Die Reverse Transkriptase des Moloney Murine Leukemia Virus (M-MLV) ist eine der am häufigsten verwendeten Reverse Transkriptasen in molekularbiologischen Laborverfahren. Um eine höhere Reverse-Transkriptionseffizienz, bessere thermische Stabilität und eine erhöhte cDNA-Syntheserate zu erreichen, wird die ursprüngliche Reverse Transkriptase häufig gentechnisch verändert. Derzeit erfordern die auf dem Markt erhältlichen Reverse-Transkriptionsreagenzien typischerweise Reaktionszeiten von 15 bis 30 Minuten, was relativ lang ist. Wenn die Anzahl der Reaktionsproben groß ist, kann der Gesamtzeitaufwand drastisch ansteigen. Die bestehenden 5-Minuten-Reverse-Transkriptionsprodukte der YESSEN-Reihe können den Reverse-Transkriptionsprozess innerhalb von nur 5 Minuten abschließen, was Zeit spart und hocheffizient ist.

PProdukt PPositionierung	Produktname	Katze#
Schnelles, effizientes und ertragreiches Premix für die Reverse Transkription	Hifair™ AdvanceFast 1. Strang cDNA Synthese SuperMix für qPCR	11156ES
Schnelles, effizientes und ertragreiches Reverse-Transkriptions-Premix (mit gDNA-Entfernung)	Hifair™ AdvanceFast 1. Strand cDNA Synthesis SuperMix für qPCR (DNA Digester plus)	11155ES
Schnelle Fertigstellung der gDNA-Entfernung und des Reverse-Transkription-Premix in einem Schritt	Hifair™ AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix für qPCR	11151ES
Flexibles Primer-Auswahl-Kit für schnelle Reverse-Transkription (mit gDNA-Entfernung)	Hifair™ AdvanceFast 1. Strang cDNA Synthese Kit (ohne Farbstoff)	11150ES
Flexibles Primer-Auswahl-Kit für schnelle Reverse-Transkription (mit gDNA-Entfernung und Tracking-Farbstoff)	Hifair™ AdvanceFast 1. Strang cDNA Synthese Kit	11149ES

Boutique-Empfehlung Eins

Schnelles, effizientes und ertragreiches Reverse-Transkriptions-Premix (mit gDNA-Entfernung) (Kat.-Nr. 11155ES)

Hohe Reverse-Transkriptionsausbeute aus verschiedenen Vorlagen

Probe	293T Zelle	Arabidopsis thaliana	Maus	Fischleber
11155ES	23.4↓	19,6↓	24,9↓	21.1↓
Marke A	24.9	21.3	27,5	21.3
Marke B	26.1	20,5	27.1	23.1
Marke C	25,7	19,8	27.3	21.9
Marke D	24.3	21.3	28.1	24,5

Abbildung. Die Reverse Transkription wurde mithilfe von RNA-Vorlagen aus menschlichen 293T-Zellen, Arabidopsis thaliana, Mäuseleber und Fischleber durchgeführt. Die Marken A, B, C und D sind alle Reverse-Transkriptionsreagenzien mit zweistufiger Verdauung und unterschiedlichen Reverse-Transkriptionszeiten von 15 bis 20 Minuten. Die Testergebnisse zeigen, dass das 5-Minuten-Reverse-Transkriptionskit Hifair 11155ES im Vergleich zu anderen Marken durch höhere Erträge und niedrigere Ct-Werte glänzt.

Boutique-Empfehlung Zwei

5-Minuten-Ein-Schritt-Verdauungs- und Reverse-Transkriptions-Premix (Kat.-Nr. 11151ES)

Hohe Ausbeute bei reverser Transkription

Abbildung. Unter Verwendung von menschlicher 293T-Zell-RNA als Vorlage wurden jeweils drei Gene getestet. Die Marken A, B und C sind alle einstufige Reagenzien zur gDNA-Entfernung und Reverse-Transkription. Die Testergebnisse zeigen, dass bei einer Eingabe von 1 μg und 10 ng Gesamt-RNA die Ausbeute der Reverse-Transkription mit dem 11151ES-Kit anderen Marken überlegen ist und geringere Ct-Werte aufweist.

Abbildung. Unter Verwendung von Arabidopsis thaliana-RNA als Vorlage sind die Marken A, B und C alle einstufige Reagenzien zur gDNA-Entfernung und Reverse-Transkription. Die Testergebnisse zeigen, dass bei einer Eingabe von 1 μg und 10 ng Gesamt-RNA die Ausbeute der Reverse-Transkription mit dem 11151ES-Kit anderen Marken überlegen ist und die Ct-Werte niedriger sind.

Ausgezeichnete Empfindlichkeit

Abbildung. Unter Verwendung von RNA aus menschlichen 293T-Zellen als Vorlage wurden Gene mit 30 % GC, 50 % GC, 60 % GC und 70 % GC-Gehalt amplifiziert. Gesamt-RNA-Eingaben von 100 pg, 1 ng, 10 ng, 100 ng und 1 μg wurden für die Reverse Transkription verwendet, gefolgt von einer quantitativen Fluoreszenzdetektion. Die Ergebnisse zeigen, dass 11151ES die Reverse Transkription für RNA-Eingaben im Bereich von 100 pg bis 1 μg bewältigen kann.

Boutique Empfehlung Tdrei

5-Minuten-Kit für schnelle Reverse-Transkription (Kat.-Nr.: 11149/11150ES)

Hohe Empfindlichkeit mit einer minimalen Nachweisgrenze von bis zu 10 pg

Abbildung. Unter Verwendung der Gesamt-RNA von 293T-Zellen als Vorlage wurde die Reverse Transkription mit 11149ES durchgeführt und die resultierende cDNA einer quantitativen qPCR-Analyse unterzogen. Die Ergebnisse zeigen, dass 11149ES RNA-Eingaben im Bereich von 10 pg bis 1 μg erfolgreich rücktranskribieren kann, wodurch genaue quantitative Ergebnisse gewährleistet werden.

Gute Amplifikationsleistung, mit der längsten Amplifikation eines 14 kb Fragments

Figur.Unter Verwendung der Gesamt-RNA von 293T-Zellen als Vorlage wurde eine Reverse Transkription mit 11149ES durchgeführt und die resultierende cDNA einer PCR-Erkennung unterzogen. Die Ergebnisse zeigen, dass 11149ES in der Lage ist, cDNA-Fragmente mit einer Länge von 1 kb bis 14 kb zu synthetisieren, wobei die nachfolgende PCR bestimmte anwendbare Szenarien aufweist. Wenn eine direkte Reverse Transkription von Fragmenten über 10 kb erforderlich ist, wird empfohlen, die Reverse Transkriptionszeit auf 20 bis 30 Minuten zu verlängern, um den Erhalt der endgültigen Fragmente sicherzustellen.

Vergleich der Effizienz der Reversen Transkription

RNA-Eingabemenge	Ct-Wert
	11149ES	Marke A
1 μg	15.2	15.5
100 ng	18,0	18,5
10 ng	21	21.7
1 ng	24,5	25.1
100 Seiten	29.1	29,7
10 Seiten	32,7	34.3

Abbildung. Unter Verwendung der Gesamt-RNA von 293T-Zellen als Vorlage wurde die Reverse Transkription mit 11149ES und Marke A durchgeführt, wobei 11149ES nicht dem gDNA-Entfernungsschritt unterzogen wurde. Die resultierende cDNA wurde einer quantitativen qPCR-Analyse unterzogen. Die Ergebnisse zeigen, dass die Reverse-Transkriptionszeit für Marke A 13 Minuten betrug, während sie für 11149ES 5 Minuten betrug. Die quantitative Analyse verschiedener Produkte zeigt, dass die Ct-Werte für 11149ES kleiner oder ähnlich denen der Konkurrenzmarke sind, was darauf hindeutet, dass die 5-minütige Reverse-Transkriptionseffizienz von 11149ES der von Marke A überlegen oder ungefähr gleichwertig ist.

RNA-Eingabemenge	Ct-Wert
	11149ES	Marke B
1 μg	16.2	17.4
100 ng	19,0	20,5
10 ng	22	23,8
1 ng	26	27,9
100 Seiten	31.4	33.2
10 Seiten	32,9	35,6

Figur.Unter Verwendung der Gesamt-RNA von 293T-Zellen als Vorlage wurde die Reverse Transkription mit 11149ES und Marke B durchgeführt, wobei 11149ES dem gDNA-Entfernungsschritt nicht unterzogen wurde. Die resultierende cDNA wurde einer quantitativen qPCR-Analyse unterzogen. Die Ergebnisse zeigen, dass die Reverse-Transkriptionszeit für Marke B 20 Minuten betrug, während sie für 11149ES 5 Minuten betrug. Die quantitative Analyse verschiedener Substratmengen zeigt, dass die Ct-Werte für 11149ES kleiner oder ähnlich denen von Marke B sind, was darauf hindeutet, dass die 5-minütige Reverse-Transkriptionseffizienz von 11149ES der von Marke B überlegen oder ungefähr gleichwertig ist.

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