——Mehr Genotypisierung, weniger Zeit und weniger Reagenzien
PCR-basierte Genotypisierung und andere Experimente erfordern häufig die Reinigung genomischer DNA aus Proben. Wenn viele Proben getestet werden müssen, ist der Prozess der Reinigung genomischer DNA zeitaufwändig, repetitiv und kostspielig. YEASEN Biology hat eine Reihe von Direct PCR Kit-Produkten entwickelt, indem es die Taq-DNA-Polymerase modifiziert und das PCR-Reaktionssystem optimiert hat, wodurch die Notwendigkeit einer genomischen Reinigung entfällt.
Clevere PCR: Direkte PCR
Das Direct PCR Kit von YEASEN beginnt direkt mit der Probe und verwendet minimale Mengen an Rohproben (Abbildung 1-A) oder deren Lysatprodukte (Abbildung 1-B) ohne genomische Reinigung als Vorlagen für die PCR-basierte Genotypisierung (Abbildung 1). Im Vergleich zur herkömmlichen PCR-basierten Genotypisierung verwendet das Direct PCR Kit weniger Proben, ist einfach zu bedienen, hat geringe experimentelle Kosten und ermöglicht eine Probenerkennung mit hohem Durchsatz.
Abb. 1 Arbeitsablauf bei der direkten PCR-Amplifikation
A. Direkte Methode: Nehmen Sie eine kleine Menge der Probe und fügen Sie sie zur PCR-Identifizierung direkt zum PCR-Mastermix hinzu.Technische Vorteile
Direkt: Keine zeitaufwändige und teure DNA-Reinigung erforderlich.
Schnell: Die Vorlagenvorbereitung dauert 10 Minuten und die PCR-Reaktion ist in nur 30 Minuten abgeschlossen.
Einfach: Proben können ohne Schneiden oder Mahlen lysiert werden und der PCR-Mix liegt bereits vorab vor, was die Anzahl der Pipettierschritte reduziert.
Einsparung: Geringer Materialeinsatz.
Hoher Durchsatz: Lysereaktionen können in einer 96-Well-Platte durchgeführt werden.
Hemmungsresistent: Tolerant gegenüber verschiedenen Tier- und Pflanzenproben.
Experimenteller Prozess mit dem Direkt-PCR-Kit
Diese Produktreihe verwendet ein einzigartiges Proteaselysesystem zur Lyse von Proben. Die Lyselösung kann direkt als Vorlage verwendet und mit dem im Kit enthaltenen PCR-Mastermix zur Genamplifikation kombiniert werden.
Abb. 2 Direkter PCR-Experimentablauf an Mausgewebe
Feige.3 Ablauf eines direkten PCR-Experiments an Pflanzengewebe
Direkte PCR-Produktauswahltabelle
| Produktserie | Maus-Direkt-PCR der zweiten Generation | |||
| Produktnummer | 10189ES | 10185ES | 10188ES | 10187ES |
| Technische Daten | 20 T/50 T/200 T/500 T | 50 T/200 T | 20 T/50 T/200 T/500 T | 50 T/200 T |
| Merkmale | ||||
| Amplikonlänge | ≤5 KB | ≤1 KB | ≤8 KB | ≤1 KB |
| Verlängerungszeit (s/kb) | 3-20 s | 30 Sekunden | ≤2 kb: 3-5 s ≤8 kb: 10 s | 60 Sek. |
| Anwendbare Organismen | Mäuse, Ratten | Mäuse, Ratten | Menschen, Mäuse, Ziegen, Hühner, Schweine usw. | Reis, Mais, Tabak, Raps, Weizen, Sojabohnen usw. |
| Anwendbare Gewebe-/Materialtypen | Mäuseschwanz, Mäuseohr, Zehen (mit Muskeln) und andere Organe | Mäuseschwanz, Mäuseohr, Zehen (mit Muskeln) und andere Organe | Frisches Blut mit gängigen Antikoagulanzien wie EDTA, Heparin, Citrat, gekühltem (gefrorenem) Blut und handelsüblichen getrockneten Blutproben wie Whatman903® und FTA® | Zarte Blätter, Alte Blätter, Sämlinge, Zarte Stiele |
| Beispielverwendung | Gewebe: 5 mg Mäuseschwanz: 1-5 mm | Gewebe: 5-10 mg Mäuseschwanz: 1-5 mm | Vollblut: 0.5–20 % Whatman® getrocknete Blutflecken: 1 mm2 | Blatt: 1-10 mm Samen: 1-3 mm |
| Genomische Freisetzungszeit | 5-10 Minuten | 15 Minuten | 0-3 Minuten | 0-10 Minuten |
| Produkt-Endstruktur | Stumpfe Enden | Stumpfe Enden | Stumpfe Enden | Stumpfe Enden |
| Glühtemperatur | Temperatur: (2 bis 5) °C. | Temperatur: (2 bis 5) °C. | Tm-(1~2)℃ | Temperatur: (2 bis 5) °C. |
| GC-Clipping-Bereich | 29 – 70 % | 30-70 % | 30-75 % | 40-65 % |
| 5'-3' Exonuklease-Aktivität | Ja | Ja | Ja | Ja |
| Anwendungen | ||||
| Genotypisierung | Ja | Ja | Ja | Ja |
| Multiplex-PCR | Bis zu 5x |
| Bis zu 3-4x |
|
| Direkte Probenverstärkung | Ja | Ja | Ja | Ja |
| Andere Eigenschaften | ||||
| Elektrophorese-Indikator | Farblos | Blau | Farblos | Blau |
| Heißstart | Ja | Ja | Ja | Ja |
| Vorgemischt/Kit | Kit (mit Mix) | Kit (mit Mix) | Kit (mit Mix+Puffer) | Kit (mit Mix) |
Produktvorteile
Die modifizierte Taq DNA-Polymerase ist der Garant der direkten PCR: Sie weist eine hohe Toleranz gegenüber Inhibitoren auf.
Wenn nicht gereinigte Proben als Vorlagen verwendet werden, werden viele Komponenten eingeführt, die PCR-Reaktionen hemmen. Mit herkömmlichen PCR-Reaktionssystemen und Taq-DNA-Polymerase ist es schwierig, ideale Ergebnisse zu erzielen, oder es ist sogar unmöglich, eine PCR-Amplifikation durchzuführen. Der PCR-Mix in dieser Kit-Reihe ist ein formeloptimierter Vormix unter Verwendung einer modifizierten Taq-DNA-Polymerase, die die Bindungsfähigkeit an Vorlagen-DNA erhöht und eine höhere Toleranz gegenüber gängigen PCR-Inhibitoren aufweist, wodurch eine breitere Vorlagenanpassungsfähigkeit erreicht wird.
Abb. 4: Der PCR-Mix im Direct PCR Kit weist eine höhere Toleranz gegenüber Verunreinigungen auf. Die gleiche Menge an Vorlage wird für die PCR mit verschiedenen PCR-Mischungen verwendet, und dem System werden verschiedene Konzentrationen von PCR-Reaktionsinhibitoren hinzugefügt. Die Menge an PCR-Produkten unter verschiedenen Bedingungen wird verglichen.
YERLEICHTERN hat eine Reihe von Produkten für unterschiedliche Proben entwickelt:
- I. Nagetierspezifischer Typ: Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus (10189ES)
Verwendbare Proben: Mäusegewebe (wie etwa Mäuseschwanz, Mäuseohr, Mäusezehe usw.)
- Hohe Amplifikationseffizienz (Länge, Geschwindigkeit, GC-Kompatibilität)
Abb.5 Das Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus amplifiziert Lysate aus verschiedenen Geweben. 1: Plasmid; 2: Mäuseohr; 3: Mäuseschwanz; 4: Leber. Lysebedingungen: 70°C Lyse für 10 min, 95°C Inaktivierung für 5 min. Die Zielfragmente sind 1 kb, 2 kb, 3 kb und 6 kb, mit Verlängerungszeiten von 3, 5, 10 bzw. 20 Sek./kb. M: 10510ES60 (YEASEN).
- Umfassende Vorlagenkompatibilität (10189ES)
Abb.6 Das Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus wurde verwendet, um menschliche 293-Zellen direkt zu lysieren (70°C für 10 min) und zu amplifizieren (1), Speichel (2) und Kopfhautgewebe (3). Alle Proben zeigten klare Zielbanden, M: 10510ES60 (YEASEN).
- II. Universaltyp-Blut mehrerer Spezies: Blood Advanced Direct PCR Kit (10188ES)
- Amplifikationslänge bis zu 8 kb
Abb. 7 DNA-Fragmente unterschiedlicher Länge wurden mithilfe des Blood Advanced Direct PCR Kit direkt aus menschlichem Vollblut amplifiziert. Die Blutproben wurden bei -20 °C mit EDTA als Antikoagulans gelagert. Die Blutvorlagenkonzentration betrug 10 % und die Verlängerungszeit wurde auf 10 Sek./kb eingestellt. M: 10510ES60 (YEASEN).
- Hohe Toleranz
Abb.8 A: Mit dem Blood Advanced Direct PCR Kit wird ein 2 kb DNA-Fragment mit einem GC-Gehalt von 71 % direkt aus menschlichem, mit EDTA antikoaguliertem Vollblut amplifiziert. Die Blutkonzentration wird durch einen Gradienten von 0,5-50 % eingestellt und die Verlängerungszeit beträgt 10 Sek./kb. B: Mit dem Blood Advanced Direct PCR Kit wird ein 2,2 kb DNA-Fragment mit einem GC-Gehalt von 67 % direkt aus mit EDTA antikoaguliertem Vollblut von Mäusen amplifiziert. Die Blutvorlagenkonzentration wird auf 0,5–50 % eingestellt und die Verlängerungszeit beträgt 10 Sek./kb. M: 10510ES60 (YEASEN).
- III. Pflanzenspezifischer Typ: Plant Tissue Direct PCR Kit (10187ES)
- Verifiziert mit mehreren Arten von Pflanzenproben
Abb.9 Direkte Amplifikationsergebnisse aus Blattgeweben verschiedener Pflanzenarten. M: 100 bp DNA-Leiter. C: Gereinigte genomische DNA aus den entsprechenden Pflanzen als Vorlage. 1-2: Blattgewebelysat als Vorlage. Anzahl der Zyklen: 30 Zyklen.
Kundenfall
- I. Identifizierung des Mausgenotyps
Ein Biounternehmen in Guangzhou:
Abb. 10 Amplifikation des Mäuseschwanzes mit dem Mouse Direct PCR Kit (10189ES). Zielgen: 500 bp; Lysezeit: 10 min; PCR-Reaktionssystem: 25 μL, Verlängerungszeit: 5 s/kb.
- II.Direkte Amplifikation von Reisgenen
XX Universität
Abb. 11 Das Plant Direct PCR Kit (10187ES) wird zur Amplifikation von Reis-bezogenen Genen verwendet.
Rbegeistert PProdukte
| Produktpositionierung | Produktname | Produktnummer | Produktspezifikation |
| Hochwertige Agarose | 10208ES60/76 | 100 g/500 g | |
| Nukleinsäurefärbungen (unter UV-Licht) | 10202ES76 | 500 μl | |
| Schnelles PCR-Upgrade, kann Kolonie-PCR sein und ist für die Amplifikation komplexer Templates geeignet | 10167ES03/08 | 1 ml/5×1 ml |