Mit der rasanten Entwicklung der Glykoproteomik und der Antikörper-Wirkstoffforschung hat auch die Glykosylierungsmodifikation viel Aufmerksamkeit auf sich gezogen. Der Kontakt zwischen Zellen und zwischen Zellen und zwischen Zellen und Krankheitserregern wird hauptsächlich durch die Wechselwirkung von Zuckern und Proteinen hergestellt, und die Glykosylierung bestimmt die Adhäsionseigenschaften von Glykokonjugaten. Bei IgG ist die konservierte N-Glykosylierung an Asn297 in der Fc-Region ebenfalls entscheidend für seine Aktivität. Darüber hinaus verfügen einige Antikörper auch über zusätzliche N-Glykane, die zusammen mit der konservierten Stelle an Asn297 in der Fc-Region die Erkennung, Halbwertszeit und Immunantwort des Antikörpers beeinflussen.
Die Proteinglykosylierung ist eine komplexe posttranslationale Modifikation, bei der Glykanketten an bestimmten Stellen von Proteinen verbunden werden. Je nach Art der Glykankette werden Glykoproteine in N-gebundene Glykoproteine, O-gebundene Glykoproteine usw. unterteilt. Darüber hinaus wird die Proteinglykosylierung auch vom Wirtszelltyp und den Fermentationsbedingungen (wie Kulturmedium, pH-Wert, Temperatur usw.) beeinflusst. Daher weisen Glykoproteine normalerweise heterogene Glykosylierungsmuster auf, einschließlich Glykosylierungsstellen, Glykosylierungsniveaus und der spezifischen Struktur der Glykanketten, was die Analyse und strukturelle Charakterisierung von Glykanketten äußerst anspruchsvoll macht. Um möglichst viele strukturelle Informationen über Glykanketten zu erhalten, besteht die Hauptstrategie der Glykankettenanalyse darin, zuerst die Glykanketten von den Proteinen freizusetzen und dann eine detaillierte Analyse und Charakterisierung durchzuführen. Bei dieser Strategie ist eine effiziente, genaue und stabile Deglykosylierungsmethode von entscheidender Bedeutung.
Zur Deglykosylierung werden heute häufig enzymatische Methoden eingesetzt. Zu den für N-gebundene Glykane häufig verwendeten Enzymen gehören PNGase F, Endo H und Endo S.
Produkteinführung
PNGase F ist die effektivste enzymatische Methode zur Entfernung fast aller N-gebundenen Oligosaccharide in Glykoproteinen, die durch Asparagin verbundene Oligosaccharid-Glykoproteine mit hohem Mannose-Gehalt, Hybrid- und komplexe Oligosaccharid-Glykoproteine spalten können, wobei N-gebundene Glykane spezifisch entfernt werden. Die Spaltstelle ist: die Amidbindung zwischen dem innersten N-Acetylglucosamin (GlcNAc) und dem Asparaginrest, wobei das Asparagin auf dem Protein nach enzymatischer Hydrolyse in Asparaginsäure umgewandelt wird.
Wenn sich α1-6-Fucose am GlcNAc-Kern befindet, kann PNGase F auch schneiden; nur wenn sich α1-3-Fucose am GlcNAc-Kern befindet (häufig bei Pflanzen- und Insekten-Glykoproteinen), kann PNGase F nicht schneiden.
Unser Unternehmen bietet konventionell PNGase F (Kat.-Nr. 20407ES)，Die herkömmliche enzymatische Reaktion von PNGase F benötigt jedoch mehrere Stunden, um Antikörper-N-Glycane freizusetzen. Aufgrund der bevorzugten Glykanfreisetzung kann eine unvollständige Deglykosylierung zu verzerrten Ergebnissen führen, und die erhaltene Glykanverteilung stellt möglicherweise nicht die richtige Zusammensetzung der therapeutischen Antikörper dar. Daher ist es für die Überwachung der Glykosylierung während des Produktionsprozesses von Antikörpern und Antikörperfusionsproteinen und anderen biotherapeutischen Wirkstoffen von entscheidender Bedeutung, so schnell wie möglich ein genaues N-Glycan-Profil zu erhalten.
Schnelle PNGase F (Kat.-Nr. 20406ES) ist ein optimiertes rekombinantes Reagenz, das Antikörper, Immunglobuline, Fusionsproteine und andere Glykoproteine in wenigen Minuten schnell und vollständig deglykosylieren kann. Dieses Enzym kann schnell und ohne Vorliebe alle N-Glykane entfernen und kann direkt für nachfolgende Chromatographie- oder Massenspektrometrieanalysen verwendet werden.
Produkteigenschaften:
Schnell: Vollständige und schnelle Deglykosylierung in wenigen Minuten.
Hohe Reinheit: Keine Protease- oder Glykosidase-Kontamination, Reinheit ≥ 95 %.
Nicht selektiv: Entfernen Sie schnell und ohne Vorliebe alle N-Glycane.
Gute Kompatibilität: Direkte Verwendung für die nachfolgende Chromatographie- oder Massenspektrometrieanalyse.
Endo H ist eine rekombinante Glykosidase, die die Chitobiose-Kernstruktur von mannosereichen und einigen Hybrid-Oligosacchariden in N-Glykoproteinen spalten und die N-gebundene mannosereiche Substanz aus den Glykoproteinen entfernen kann.
Unser Unternehmen bietet derzeit rekombinant exprimiertes Hefe-Endo H an (Kat.-Nr. 20414ES).
Endo S ist eine hochspezifische Glykosidase, die N-gebundene Zucker zwischen den Chitobiose-Kernstrukturen von Wildtyp-IgG-Schwerketten spalten kann. Die Aktivität von Glykosidase S ist nicht streng vom Peptid abhängig, sodass X ein Protein, Peptid, Asparagin oder freies Oligosaccharid sein kann. Glykosidase S ist unabhängig von der Anwesenheit von Kern-Alpha1-6-Fucose oder halbierendem N-Acetylglucosamin auf dem Substrat aktiv. Sie ist jedoch inaktiv gegenüber Oligosacchariden, die drei- oder vierfach antennär sialyliert und desialyliert sind.
Unser Unternehmen bietet derzeit rekombinant exprimiertes E. coli Endo S (Kat.-Nr. 20413ES) an.
Kaufberatung
| Produktnummer | 20406ES | 20407ES | 20414ES | 20413ES |
| Produktname | ||||
| Quelle | Rekombinante Hefe-Expression | Rekombinante Hefe-Expression | Rekombinante Hefe-Expression | E.coli rekombinante Expression |
| Spezifische Aktivität | Nicht zutreffend. | 100000U/ml | 1000000U/ml | 8000 U/mg |
| Spaltstelle | Fast alle N-gebundenen Glykane | Fast alle N-gebundenen Glykane | N-gebundene Mannose-reiche Glykane | Spaltt innerhalb der Disaccharid-Kernstruktur der schweren IgG-Kette |
| Verdauungszeit | 10 Minuten | 1-3 Std | 1-3 Std | 1 h |
| Glykosylierung | Geeignet | Geeignet | Geeignet | Geeignet |
| Proteinstruktur | Geeignet | Geeignet | Geeignet | Geeignet |
Testdaten
1. Schnelle PNGase F Prüfen
1: Proteinmarker (Kat.-Nr. 20350ES) 2: Konkurrent + Substrat oder Antikörper 3: Konkurrent + Substrat oder Antikörper
4:
2.Endo H-Test
Abbildung 2. Endo H enzymatische Spaltungswirkung (Substrat)
3.Endo S-Test
Produktinformationen
| Produktname | Produktnummer | Spezifikation |
| 20406ES20/50 | 20 T/50 T | |
| 20407ES01/02 | 15000 U /75000 U | |
| 20414ES92/97 | 10000 U /50000 U | |
| 20413ES80/90 | 1000 HE/5 x 1000 HE |