Produktanwendungsszenarien

1. Entfernung von Nukleinsäureresten in Biologika: Bei der Herstellung von Biologika wie Viren, Impfstoffen und Proteinen kann UltraNuclease hinzugefügt werden, um Nukleinsäurereste abzubauen. Dieser Schritt erhöht nicht nur die Virenausbeute, sondern reduziert auch den Gehalt an Nukleinsäureresten erheblich und gewährleistet so die Sicherheit und Wirksamkeit der Medikamente.
2. Viskositätsreduzierung: Durch den Abbau von Nukleinsäuren wird die Viskosität von Zelllysaten reduziert, was Filtrations-/Ultrafiltrationsprozesse bei der Reinigung von zellabgeleiteten Partikeln wie Viren, AAV-Vektoren und Einschlusskörpern erleichtert.
3. Verbesserte Auflösung und Wiederfindung: Bei ELISA-, zweidimensionalen Elektrophorese- und Immunoblot-Analysen verbessert es die Auflösung und Wiederfindung.
4. Verhinderung der Zellaggregation: UltraNuclease kann die Aggregation menschlicher peripherer mononukleärer Blutzellen (PBMCs) wirksam verhindern.

Der Einfluss unterschiedlicher Reaktionsbedingungen auf die Enzymaktivität

Um die optimalen Betriebsbedingungen für UltraNuclease zu ermitteln, haben wir die Auswirkungen verschiedener Puffersysteme auf die Enzymaktivität untersucht.

Vergleichende Analyse von Konkurrenzprodukten (von Firma A)

Die Leistung des UltraNucleases entspricht der von Unternehmen A und es kann ein Ersatzeffekt erzielt werden.

Der Qualitätsprüfstandard entspricht dem GMP-Produktionsstandard

Erkennungselemente	Qualitätsstandards	Nachweisverfahren
Enzymaktivität	250-300 U/uL	Universelle Substratmethode
Spezifische Aktivität	≥1.5×106 U/mg	Universelle Substratmethode
Proteinreinheit	≥99 %	SDS-SEITE
Protease	Erfüllt die Anforderungen	Universelle Substratmethode
Bakterielles Endotoxin	Erfüllt die Anforderungen	Gel-Methode
Wirtsprotein	Negativ	ELISA-Methode
Wirts-DNA	Negativ	qPCR-Methode
Sterile Prüfung	Steriles Wachstum	Allgemeine Regel 1101
Erregernachweis	Negativ (nicht erkannt)	Siehe die interne Methode
Mykoplasmen-Test	Negativ (nicht erkannt)	Siehe die interne Methode
Schwermetalltests	Erfüllt die Anforderungen	Allgemeine Regel 0821

Passend zur Verwendung von UltraNuclease hat Yeasen außerdem unabhängig ein spezielles Nachweiskit für UltraNuclease entwickelt, das Restenzyme effektiv erkennen und Risiken reduzieren kann. Das Yeasen UltraNuclease Residual Detection Kit wurde in Anlehnung an die Validierungsrichtlinien für analytische Methoden des Chinesischen Arzneibuchs <9101> von 2020 entwickelt und befolgt strikt die wichtigsten Anforderungen für Tests mit mehreren Parametern (linearer Bereich, Spezifität, Genauigkeit, Präzision, Empfindlichkeit, beschleunigte Stabilität usw.).

Nachweis von Ultranukleaserückständen

In normalen Reinigungsschritten lässt sich UltraNuclease leicht als Verunreinigung entfernen. Um die spezifische Restmenge der omnipotenten UltraNuclease zu ermitteln, wird sie in der Industrie häufig als Standardprodukt verwendet und ein passendes ELISA-Kit entwickelt.

Das UCF.ME® UltraNuclease Das von Yeasen unabhängig entwickelte ELISA-Kit basiert auf dem Prinzip des Doppelantikörper-Sandwich-Enzym-gekoppelten Immunoassays (Sandwich-ELISA), mit dem die Restmenge an UltraNuclease in Proben genau nachgewiesen werden kann. Das Kit ist in Bezug auf Linearität, Wiederholbarkeit, Wiederfindungsrate und Spezifität stabil.

Funktionsprinzip des Yeasen UltraNuclease ELISA Kits (Zwei-Stellen-Immunenzymtest)

Produkteigenschaften:

Einhaltung gesetzlicher Vorschriften: Vollständig validiert gemäß den gesetzlichen Anforderungen, Validierungsberichte sind verfügbar; Qualitätssicherung: Alle Rohstoffe für das Kit werden unabhängig entwickelt, wodurch die Qualitätskontrolle gewährleistet wird;

Hohe Empfindlichkeit: Quantitative Grenze bereits bei 23.5 pg/ml;

Hohe Präzision: Hohe Wiederholbarkeit innerhalb einer Charge und geringe Variabilität zwischen Chargen;

Hohe Spezifität: Keine Kreuzreaktivität mit anderen gentechnisch veränderten Zellproteinen

Leistungsparameter:

Produktparameter	Inhalt
Untersuchungszeit	3,5 Stunden
Assay-Prinzip	Zwei-Stellen-Immunenzymtest
Signalverstärkung	Biotin-Streptavidin-System
Detektionswellenlänge	450 nm und 630 nm
Empfindlichkeit	23,5 pg/ml
Erfassungsbereich	0,047–3 ng/ml
Erkennungsobjekt	UltraNuclease
Anwendbares Instrument	Molekulare Geräte: M- und i-Serie
Anwendung	Nachweis von UltraNuclease-Rückständen in Aufreinigungsprozessen von Zell- und Gentherapie sowie rekombinanten Adeno-assoziierten Virusimpfstoffen

Produktdaten:

Standardkurve des Reagenzienkits:

Tatsächliches Experiment zur Probenrückgewinnung:

UltraNuclease wurde unabhängig mit 5 μg/ml Zelllyselösungen (HEK293, E.coli, CHO und Vero) versetzt, mit einer endgültigen Konzentration von 1,5 ng/ml. Die Genauigkeit bei verschiedenen Zellproben war im Vergleich zu anderen Anbietern besser.

Spezifitätsdemonstration

Schlussfolgerung: Der Test hat eine hohe Spezifität ohne Kreuzreaktionen; paarweise Vergleiche, „*“ Signifikanter Unterschied zur negativen Probe; „NS“ Kein signifikanter Unterschied zur negativen Probe.

Präzision:

Wiederholbarkeit:

Konzentration ng/mL	6 doppelte Daten auf derselben Platte						CV-Wert
3	2.412	2.390	2.323	2.367	2.476	2.291	2,53 %
1.5	1.780	1.883	1.884	1.908	1.876	1.883	2,19 %
0,75	1.123	1.215	1.166	1.183	1.140	1.109	3,12 %
0,375	0,691	0,706	0,708	0,722	0.722	0,679	2,21 %
0,1875	0,449	0,462	0,453	0,460	0,447	0,433	2,13 %
0,094	0,306	0,308	0,304	0,311	0,295	0,302	1,65 %
0,047	0,242	0,241	0,240	0,241	0,256	0,240	2,37 %
0	0,183	0,192	0,189	0,187	0,189	0,189	1,43 %

Schlussfolgerung: Bei jeder Konzentration auf der Standardkurve wurden 6 Duplikate getestet und alle CV% lagen unter 5 %.

Zwischenpräzision:

Mittlere Präzision
Probenkonzentration	1,5 ng/ml	0,375 ng/ml	0,094 ng/ml
Analyst 1	1.388	0,382	0,079
Analyst 2	1.458	0,363	0,068
Analyst 3	1.318	0,37	0,063
Durchschnitt	1.388	0,372	0,07
SD	0,070	0,010	0,008
CV-Wert	5,04 %	2,59 %	11,69 %

3 Analysten führten das UCF.ME™ UltraNuclease ELISA-Experiment durch und der CV% lag unter 15 %

Produktinformation:

Produktname	Produkt Nummer	Produktspezifikationen
UCF.ME®UltraNuclease GMP-Qualität (Benzonase)	20157ES25/50/60/80/90	25 KU/50 KU/100 KU/1MU/5MU
UCF.ME® UltraNuclease ELISA Kit	36701ES59	96T

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