UCF.ME™ UltraNuclease, auch bekannt als Totipotente Nuklease, Breitspektrum-Nuklease und nicht einschränkende inhibitorische Endonuklease, stammt ursprünglich aus Serratia Marcescen, wurde aber später vom
1. Was ist eine totipotente Nuklease?
2. Was sind die Anwendungsszenarien für totipotente Nuklease?
3. Welche Vorteile muss die totipotente Nuklease haben?
4. Häufig gestellte Fragen
5. Verwandte Produkte
1. Was ist eine totipotente Nuklease?
Totipotente Nukleasen sind genetisch modifizierte Endonukleasen mit der Fähigkeit, eine breite Palette von Nukleinsäureformen abzubauen, darunter einzelsträngige, doppelsträngige, lineare, native und denaturierte Nukleinsäuren. Sie erzeugen 5'-Monophosphat-Oligonukleotide mit Längen von 3 bis 5 Basen und weisen keine spezifische Basenerkennung auf. Diese vielseitigen Nukleasen weisen unter verschiedenen Bedingungen eine robuste Stabilität und Verdauungsaktivität auf, was sie hocheffizient bei der Beseitigung von Nukleinsäurerückständen in Proben oder Produkten macht. Dies verbessert die Probenreinheit und die biologische Wirksamkeit von Produkten und macht totipotente Nukleasen zum bevorzugten Enzympräparat für wissenschaftliche Forschung, Impfstoffe und Branchen wie Protein- und Polysaccharidpharmazeutika.
Darüber hinaus spielen totipotente Nukleasen eine entscheidende Rolle bei der Entfernung von Nukleinsäuren während der Herstellung von Impfstoffen, Antikörpern, Zelltherapien und anderen biologischen Produkten, da sie die Einhaltung der FDA-Vorschriften gewährleisten, die vorschreiben, dass die Restnukleinsäure im Endprodukt für den therapeutischen Einsatz 10 pg/Dosis nicht überschreiten darf. Durch den Abbau von Nukleinsäuren verringern totipotente Nukleasen die Viskosität von Zelllysaten und erleichtern so den Lösungsfiltrations-/Ultrafiltrationsprozess während der Reinigung von zellabgeleiteten Partikeln wie Viren, AAV-Vektoren und Einschlusskörpern. Dies rationalisiert die Verarbeitung, verbessert die Zentrifugation, erhöht die Trennleistung von Niederschlag und Überstand und steigert die Wirksamkeit der chromatographischen Reinigung, was letztendlich zu einer höheren Ausbeute und Produktreinheit führt.
2. Was sind die Anwendungsszenarien für totipotente Nuklease?
UltraNuclease verfügt über ein breites Anwendungsspektrum. Hier sind die spezifischen Anwendungsszenarien.
2.1 Virusreinigung (Lentivirus, AAV, rekombinanter Adenovirus-Impfstoff, inaktiviertes Virus, onkolytisches Virus usw.)
Die Verwendung von Viren im biomedizinischen Sektor nimmt erheblich zu und umfasst Anwendungen wie Impfstoffe, Zelltherapie, Gentherapie und verschiedene andere Bereiche. Wirtszellen, die für die Virusproduktion verantwortlich sind, sind überwiegend kontinuierliche Passagezellen (CCLs). CCLs weisen eine genetische Veranlagung zu unkontrolliertem Wachstum auf, was ihnen die Fähigkeit verleiht, sich unbegrenzt zu vermehren. Das Vorhandensein von Rest-DNA aus CCLs kann jedoch potenzielle Risiken bergen, wie z. B. eine unkontrollierte Vermehrung menschlicher Zellen, die zur Tumorbildung führt. Darüber hinaus können diese Rest-DNA-Fragmente infektiöse virale Genome enthalten, was neben der Tumorentstehung auch Bedenken hinsichtlich des Infektionsrisikos aufwirft. Daher sind strenge Kontrollmaßnahmen für den Umgang mit Rest-DNA in biologischen Produkten und deren Sicherheit unerlässlich. In dieser Hinsicht ist unsere UCF.ME™ UltraNuclease bietet eine sichere Lösung zur Virenreinigung.
Salz spielt eine entscheidende Rolle bei der Eindämmung der Aggregation von Proteinen oder Viren und erleichtert die Trennung von DNA und RNA von Proteinen und anderen Zellbestandteilen. Salt Active UltraNuclease ist eine unspezifische Endonuklease und zeigt optimale Aktivität bei hohen Salzkonzentrationen. Unter salzreichen Bedingungen erhalten Enzyme einen besseren Zugang zu freigesetzter DNA und RNA und verbessern so deren Abbau. Nukleasen mit erhöhter Aktivität in salzreichen Umgebungen erweisen sich als wirksamer bei der Verbesserung von Reinigungsprozessen. Salt Active UltraNuclease kann eingesetzt werden, um die Viskosität in Zellüberständen und Lysaten zu reduzieren und so die Reinigungseffizienz unter salzreichen Bedingungen zu verbessern. Dieses Enzym reduziert auch Wirtsnukleinsäurerückstände auf den Pikogramm-Bereich und verbessert so die Leistung und Sicherheit verschiedener Anwendungen biologischer Produkte, einschließlich Virusreinigung, Impfstoffherstellung und Produktion von Protein- und Polysaccharid-Pharmazeutika.
2.2 Reinigung des in E. coli exprimierten rekombinanten Proteins
Bestimmte Proteine, die in E. coli exprimiert werden, neigen dazu, sich zu Einschlusskörpern zu aggregieren, was den Reinigungsprozess erschwert, da sie sich oft mit der Wirts-DNA verflechten. Die daraus resultierenden aufgebrochenen Bakterienzellen können eine hohe Viskosität aufweisen, was die Effizienz der Proteinreinigung erheblich verringert. Durch Zugabe von 10–50 U/ml UCF.ME™ UltraNuclease zur Bakterienlösung während der Ultraschallzerstörung und Inkubation der Probe bei 37 °C für 30 Minuten oder bei 4 °C über Nacht nach Abschluss der Zerstörung kann die Viskosität der Bakterienlösung jedoch effektiv reduziert werden. Dies wiederum verbessert die Effizienz des Reinigungsprozesses erheblich. Zusammenfassend lässt sich sagen, dass Sie sich auf unsere UCF.ME™ UltraNuclease verlassen können, um die effektive Reinigung des Proteins zu erleichtern.
2.3 Zellverklumpung verhindern
In den letzten Jahren hat die Verwendung kryokonservierter mononukleärer Zellen des peripheren Blutes (PBMC) in Immunassays dramatisch zugenommen. Das größte Merkmal von PBMC-Zellen ist, dass sie nach der Wiederbelebung sehr leicht verklumpen, was leicht zu einer schlechten Zellqualität und unzuverlässigen Testergebnissen führen kann. Wenn die Zellen wiederbelebt werden, wird dem Kulturmedium die entsprechende Konzentration (25-50 U/ml) von UCF.ME™UltraNuclease hinzugefügt und die Zellen werden gemeinsam kultiviert, wodurch Zellverklumpungen wirksam verhindert werden können. Daher können Sie unsere UCF.ME™ UltraNuclease optimal nutzen, um die Chancen auf ein erfolgreiches Ergebnis zu erhöhen.
3. Welche Vorteile muss die totipotente Nuklease haben?
3.1 Vielfältige Einsatzmöglichkeiten
UCF.ME™ UltraNuclease kann verschiedene Formen von DNA und RNA unter verschiedenen Versuchsbedingungen schneiden und abbauen und kann zum Entfernen von Nukleinsäurerückständen in verschiedenen biologischen Produkten eingesetzt werden.
3.2 Hohe Reinheit, hohe Enzymaktivität
Bei unserer UCF.ME™ UltraNuclease beträgt die Enzymreinheit mindestens 99 % (HPLC) und die Enzymaktivität mindestens 1,5*106 U/mg (unter Verwendung einer absoluten quantitativen Methode für allgemeine Substrate).
3.3 Starke Anpassungsfähigkeit
UCF.ME™ UltraNuclease ist bei Lagerung und Einfrieren/Auftauen sehr stabil. Wir lagern UCF.ME™ UltraNuclease bei -20 °C, 4 °C und 37 °C, um die Tendenz der Enzymaktivität festzustellen. Bei Lagerung bei 37 °C für 2 Wochen gab es keine signifikante Veränderung der Enzymaktivität.Um die Stabilität des Enzyms zu gewährleisten, verwenden wir eine Kombination aus Trockeneis + Eisbeutel, um Transport UCF.ME™ UltraNuclease bei Ihnen vor Ort. Es ist außerdem sehr widerstandsfähig und kann sich an eine Vielzahl von Betriebsbedingungen anpassen.
3.4 Einhaltung der Pharmakopöe
UCF.ME™ UltraNuclease wird in UCF.ME (Ultra Clean Factory. Molecular Enzyme) hergestellt und ist eine Art ultrareines Enzym. Was ist ein ultrareines Enzym? Es ist ein molekulares Enzym, das Qualitätsstandards wie kein HCD, HCR, HCP, DNASE-FREI, RNASE-FREI, keine Proteaserückstände, keine mikrobiellen Rückstände, keine Krankheitserreger, tierischen Ursprungs, Antibiotikaverschmutzung, ultraniedrige Endotoxinrückstände, hohe Enzymaktivität und hohe Reinheit usw. erfüllt. Daher können Sie unseren Produkten sicher und zuverlässig vertrauen.
3.5 GMP-Produktion
Der gesamte Prozess der UltraNuclease-Produktion wird in der GMP-Produktionswerkstatt abgeschlossen, und der Qualitätsprüfungsplan wird streng durch die Arzneibuch Methode, um den groß angelegten Bedarf von der Forschung und Entwicklung bis zur Produktion zu decken.
UCF.ME™ Partner von UltraNuclease —— UltraNuclease ELISA-Kit
In normalen Reinigungsschritten, UCF.ME™ UltraNuclease lässt sich als Verunreinigung leicht entfernen. Zur Erkennung von Rückständen von UCF.ME™ UltraNuclease, YEASEN hat das unterstützende UltraNuclease ELISA-Kit entwickelt, das den Rückstand von UCF.ME™ genau erkennen kann. UltraNuclease in der Probe. Das Kit weist eine ausgezeichnete Linearität, Wiederholbarkeit, Wiederfindungsrate und Spezifität auf.
UltraNuclease ELISA-Kit
Der lineare Bereich liegt zwischen 0,047 und 3 ng/ml und R2 ist größer als 0,99. Mit guter Reproduzierbarkeit zwischen Chargen fügen wir der Probe eine feste Konzentration von UltraNuclease hinzu und verwenden 3 verschiedene Chargen von ELISA-Kits zur Erkennung. Die Erkennungswiedergewinnungsrate liegt zwischen 70 % und 110 %, wenn die Nukleasekonzentration zwischen 3 und 0,186 ng/ml liegt und der CV weniger als 10 % beträgt. Darüber hinaus liegen die simulierten Probenwiedergewinnungsraten von UltraNuclease mit unterschiedlichen Konzentrationen alle zwischen 70 % und 130 % und sind besser als bei anderen Marken. Es weist auch eine starke Spezifität auf, da wir die unspezifische Bindung des UltraNuclease-Antikörpers an 8 gängige Proben ausgewertet haben. Die Ergebnisse der Interferenzgruppe und der Kontrollgruppe überlappten sich und es wurden keine Interferenzen beobachtet.
Nach der Einreichung des DMF durch UltraNuclease hat YEASEN DMFs von Salzaktive Ultranuklease von der US-amerikanischen FDA.
Die Aktennummer lautet:
| Nummer | Produktname | Aktenzeichen |
| 1 | UltraNuclease | MF037298 |
| 2 | Salzaktive UltraNuclease | MF037815 |
4. Häufig gestellte Fragen
F1: In welchem Schritt soll UltraNuclease hinzugefügt werden?
A: Das hängt von den Proben ab, mit denen Sie arbeiten. Bei der Virusreinigung wird es im Allgemeinen nach der Virusklärung hinzugefügt; bei der E. coli-Proteinreinigung kann es hinzugefügt werden, wenn die Zellen lysiert sind; bei der Behandlung von Zellklumpen kann es direkt dem Medium zur Co-Kultivierung mit Zellen hinzugefügt werden.
Frage 2: Wie wird es verwendet, wenn die Reaktionstemperatur 37 °C nicht erreichen kann?
A: Die Enzymaktivität von UltraNuclease wird durch Temperatur, Behandlungszeit und Enzymaktivitätseinheiten beeinflusst. Wenn die Temperatur 37 °C nicht erreichen kann, kann die Enzymmenge entsprechend hinzugefügt oder die Inkubationszeit verlängert werden.
F3: Ist UltraNuclease mit Proteaseinhibitoren kompatibel?
A: Kompatibel, aber beachten Sie, dass viele Proteaseinhibitoren EDTA enthalten. Wenn der EDTA-Gehalt über 1 mM liegt, hemmt EDTA die Aktivität einiger Nukleasen.
Frage 4: Wie entferne ich UltraNuclease?
A: Es kann durch Methoden wie TFF, Dialyse und chromatographische Säulen entfernt werden.
Frage 5: Kann das UltraNuclease ELISA-Kit zum Nachweis totipotenter Nukleaserückstände anderer Marken verwendet werden?
A: Wir empfehlen dies nicht. Das ELISA-Kit wurde vollständig auf der Basis von UltraNuclease entwickelt und kann UltraNuclease genau quantifizieren. Altipotente Nukleasen anderer Marken können sich in Bezug auf Sequenz und Produktionsprozess von UltraNuclease unterscheiden und die Testergebnisse können ungenau sein.
5. Verwandte Produkte
Die von
Tabelle 1 Verwandte Produkte
| Produktname | Artikelnummer | Technische Daten |
| 20157ES25/60/80/90 | 25 KU/100 KU/1MU/5MU | |
| 20159ES25/60/80/90 | 25 KU/100 KU/1MU/5MU | |
| 36701ES59 | 96T | |
| Salz Aktiv UltraNuclease ELISA-Kit | 36703ES96 | 96T |