Un avance notable en la preparación de la biblioteca de ARN específica de la cadena

¿Alguna vez ha tenido dudas al construir una biblioteca de ARN? Las preocupaciones sobre la toxicidad de ciertos reactivos y la necesidad de trabajar en un entorno sin luz pueden ser bastante desconcertantes, en particular cuando se trata de numerosas muestras. La actinomicina D ha sido a menudo la fuente de estas preocupaciones, ya que es conocida por su toxicidad y sensibilidad a la luz. Pero ¿por qué se incluye la actinomicina D en los kits de bibliotecas?

Recientes descubrimientos han revelado que la actinomicina D posee la capacidad de inhibir la transcripción. Esto lo logra uniéndose al ADN en el complejo de iniciación de la transcripción, impidiendo así la elongación de las cadenas de ARN por la ARN polimerasa. Básicamente, la actinomicina D interfiere con la actividad de la polimerasa, obstaculizando la síntesis simultánea de la segunda cadena durante el proceso de síntesis del ADNc. Esto permite el uso de dUTP en lugar de dTTP en la síntesis de dos cadenas, lo que conduce a una mayor especificidad de la cadena en la construcción de bibliotecas de ARN.

La incorporación de actinomicina D en los kits de construcción de bibliotecas de ARN ha mejorado indudablemente la construcción de bibliotecas de cadenas específicas, mejorando significativamente la especificidad de la cadena. Esta innovación ha agilizado el proceso experimental, simplificándolo para los investigadores. Además, ha mejorado sustancialmente la especificidad de la cadena, un aspecto fundamental de las investigaciones científicas relacionadas con el ARN.

Sin embargo, la actinomicina D tiene sus desventajas: presenta toxicidad y requiere protección contra la luz. En el panorama actual de creciente demanda de kits de construcción de bibliotecas de placas y premezclados, la necesidad de protección contra la luz plantea limitaciones a los avances en los kits de placas.

Afortunadamente, ya no hay necesidad de preocuparse por la actinomicina D. La plataforma Yeasen ZymeEditor ha introducido un mutante revolucionario de la enzima MMLV que reemplaza la función de la actinomicina D. Este nuevo El kit es inodoro, no tóxico y noo necesidad de evitar Ligero. Ofrece una especificidad de cadena superior, eliminando preocupaciones relacionadas con la salud y la sensibilidad a la luz.

Tabla 1: Características distintivas de los kits de preparación de ARN libre de Yeasen

Figura 3. Al utilizar el kit que contenía actinomicina D junto con el nuevo kit sin actinomicina D, los rendimientos fueron comparables para ambos kits con aportes de ARN de 10 ng y 1 μg. Sin embargo, con un aporte de ARN de 4 μg, el nuevo kit sin actinomicina D mostró rendimientos más altos.

Figura 4. La utilización del nuevo kit, que incluye un mutante MMLV sin la adición de actinomicina D, da como resultado una especificidad de cadena superior en comparación con el kit que incorpora actinomicina D. Esta distinción se hace más pronunciada, particularmente con aportes de ARN inferiores a 10 ng.

Yeasen, dedicada a mejorar la experiencia del cliente, continúa abriendo nuevos caminos en el ámbito de los kits de bibliotecas de ARN.

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