Yeasen y molefuture desarrollaron termotolerante y alta fidelidad T4 ADN ligasa para combatir la ligadura falsa

Yeasen y Molefuture presentan una ligasa de ADN T4 avanzada para superar los desafíos de la biología molecular

Yeasen y Molefuture han desarrollado conjuntamente una ligasa de ADN T4 de vanguardia utilizando su plataforma ZymeEditor, abordando cuestiones clave en biología molecular y construcción de bibliotecas de ADN para secuenciación de próxima generación (NGS). La ligasa de ADN T4 tradicional enfrenta desafíos como baja estabilidad, alta formación de dímeros adaptadores y alta autoligación de fragmentos de ADN. Esta nueva enzima tiene como objetivo superar estas limitaciones.

La ligasa de ADN T4, una enzima dependiente de ATP, cuenta con un dominio de unión al ADN de hélice compacta (DBD), un dominio de nucleotidil-transferasa (NTasa) y un dominio de plegamiento OB. Al analizar la estructura de la proteína, los investigadores identificaron residuos clave a una distancia de entre 5 y 20 Å del sustrato de ADN. Mediante herramientas computacionales avanzadas, cribado in silico y análisis de estructura-función, diseñaron mutantes a través de la alineación de secuencias de consenso, incorporando información estructural-funcional.

Además del diseño racional, el equipo empleó el método MTPS para la evolución dirigida, examinando más de 10.000 mutantes para determinar su estabilidad, actividad y actividad residual. Los candidatos prometedores se sometieron a una purificación y pruebas rigurosas. A continuación, se realizó una caracterización detallada, evaluando la actividad, la estabilidad, la autoligación del adaptador, la autoligación del fragmento de ADN y el rendimiento del ADN.

Los investigadores combinaron el diseño racional del ADN y la mutación dirigida en mutantes G1 para desarrollar variantes excepcionales adecuadas para diversas aplicaciones. Este enfoque integral ha dado como resultado una ligasa de ADN T4 altamente eficiente y confiable, preparada para mejorar la investigación de biología molecular y la construcción de bibliotecas de ADN en NGS.

Figura 1. Ilustra la evolución de la ADN ligasa Versatility T4. (A) Diseño racional (B) Selección de mutantes de la ligasa de ADN T4 termotolerantes a 45 ℃, lo que conduce a la identificación de mutantes con una actividad específica significativamente mejorada. (C) Selección de mutantes de la ligasa de ADN T4 destinada a reducir la formación de dímeros adaptadores durante la preparación de la biblioteca de ADN. (D) Evaluación de la retención de los rendimientos de la biblioteca después del tratamiento térmico a 42 ℃ durante 1 hora utilizando el método de preparación de la biblioteca de ADN.
Tabla 1. La ligasa de ADN T4 versátil de Yeasen es termoestable. La enzima se trató a 30 ℃ durante 5 días y se analizó mediante el método DNA Lib Prep.
Figura 2. La ligasa de ADN T4 versátil de Yeasen tiene mayor fidelidad en comparación con la ADN ligasa T4 de tipo salvaje (WT) indicada por una menor formación de dímeros adaptadores debido a la autoligación incorrecta (A) y (B) analizada mediante el método DNA Lib Prep.
Figura 3. La ligasa de ADN T4 versátil de Yeasen muestra la menor formación de dímeros adaptadores en comparación con las ligasas de ADN T4 comerciales, incluidas las ligasas termotolerantes analizadas mediante el método DNA Lib Prep.
Este avance demuestra el compromiso de Yeasen y Molefuture con la innovación y la excelencia en la ingeniería enzimática.

Información de pedidos

Nombre Gato# Notas
Enzima Ligasa de ADN T4 versátil Hieff™ (600 U/µL) 12996ES Termotolerante y de alta fidelidad para la detección de genes tumorales
ADN Kit de preparación de biblioteca de ADN Hieff NGS® 13577ES Método tumoral/mecánico
Kit de preparación de biblioteca de ADN Hieff NGS® OnePot Pro V2 12194ES Método enzimático/tumoral
NGS® OnePot de alta calidad Kit de preparación de biblioteca de ADN II para Illumina 13490ES Patógeno/enzimético/tiempo regular (140 min)
Kit de preparación de biblioteca de ADN Hieff NGS® OnePot Flash 12316ES Patógeno/ Enzimético/ Ultrarrápido (100 minutos)
Kit de preparación conjunta para biblioteca de ADN y ARN Hieff NGS® V2 12305ES Preparación conjunta de ADN y ARN, enzimas y patógenos
ARN Kit de preparación de biblioteca de ARNm de modo dual Hieff NGS® Ultima 12308ES Sin perlas magnéticas de oligo dT, 11 tubos
Kit de preparación de biblioteca de ARNm de modo dual Hieff NGS® Ultima 12309ES Perlas magnéticas oligo dT plus, 14 tubos
Kit de preparación de biblioteca de ARN de modo dual Hieff NGS® Ultima 12310ES Versión premezclada, 5 tubos
Kit de preparación de biblioteca de ARN Hieff NGS ® EvoMax (versión premezclada) (actinomicina D Gratis) 12340ES Versión premezclada, (Actinomicina D Gratis)
Kit de depleción de ARNr Hieff NGS® MaxUp (planta) 12254ES Planta
Kit de depleción de ARNr humano Hieff NGS® MaxUp (ARNr e ITS/ETS) 12257ES Humano

Deje un mensaje para solicitar información sobre los datos de comparación de rendimiento entre esta enzima y otras ligasas de ADN T4 termoestables y convencionales de primer nivel.

Acerca de Molefuture Biotechnology

Molefuture Biotechnology es una subsidiaria de Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd., especializada en brindar soluciones personalizadas de modificación de enzimas impulsadas por la tecnología de evolución de enzimas. Aprovechando los recursos de Yeasen Biotecnología, Molefuture opera en seis plataformas tecnológicas principales: la innovadora plataforma de evolución de enzimas ZymeEditor, una plataforma de expresión de alta eficiencia en múltiples hospedadores, una plataforma de desarrollo de procesos de fermentación, una plataforma de desarrollo de procesos de purificación, una plataforma de producción de enzimas ultralimpias y una plataforma de análisis y control de calidad de enzimas. Con estas seis plataformas tecnológicas, Molefuture puede ofrecer un conjunto completo de soluciones personalizadas que incluyen evolución dirigida por enzimas, desarrollo de nuevas enzimas, desarrollo de procesos enzimáticos y producción a gran escala a nivel de GMP para satisfacer las demandas de aplicación de enzimas en áreas como diagnóstico in vitro, biomedicina, biología sintética, estética médica, intermediarios farmacéuticos, etc.

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