گزارش اعتبار سنجی E.Coli میزبان DNA DNA کیت (2G) گزارش اعتبار سنجی

E.coli کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان (2G)

خلاصه صلاحیت (گربه شماره: 41308ES60)

1. پس زمینه

داده‌های خلاصه‌شده در این گزارش توسط Yeasen Biotechnology برای محصول E.coli Host Cell DNA Detection Kit (2G) انجام شده است. داده های خلاصه فقط برای مرجع کاربر است و کاربر باید باقیمانده سلول میزبان را تأیید کند. روش DNA با استفاده از نمونه های خود برای تایید روش می تواند نیازهای کاربر را برآورده کند. به کلیه آزمایشگاه هایی که از این کیت استفاده می کنند توصیه می شود پارامترهای زیر را بررسی کنند: خطی بودن، برد، دقت، دقت، حد کمیت، ویژگی و استحکام.

Yeasen Biotechnology می تواند گزارش صلاحیت دقیق این کیت را ارائه دهد. اگر کاربر از این گزارش استفاده کند، فقط مناسب بودن (که شامل دقت، دقت و ویژگی) باید تأیید شود.

2. مواد و روش های آزمایشی

2.1 کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان E.coli (2G)، فروشنده: Yeasen، شماره گربه: 41308ES60.

2.2 کیت آماده سازی نمونه DNA باقیمانده مغناطیسی MolPure®، فروشنده: Yeasen، Cat No.: 18461ES60.

2.3 استاندارد ملی برای محتوای DNA E.coli: گربه. 270027، شماره لات: 201101، غلظت: 96.2 میکروگرم بر میلی لیتر، شرایط نگهداری: -70 ℃، خریداری شده از: موسسه ملی کنترل غذا و دارو.

2.4 داده های اصلی: نسخه الکترونیکی در "گزارش تجربی" ثبت شد فایل فرعی فایل اصلی 'E.coli Host Cell DNA Detection Kit (2G)'.

2.5 روش‌ها: مواد و روش‌های عملیاتی مورد استفاده برای آزمایش اساساً توسط شرکت Yeasen Biotechnology تولید یا تنظیم شده است که برای مدت طولانی مورد ارزیابی و تأیید قرار گرفت، توسعه و ساخت کیت از سیستم ISO 13485 پیروی می‌کند.

3. محتویات و نتایج صلاحیت

3.1 محدوده تشخیص

محدوده خطی کیت 30 fg/μL~300 pg/μL با R بود.²= 1، و راندمان تقویت 101.74٪ با CV<15٪ برای هر سنجش غلظت بود.

شکل 1 منحنی استاندارد qPCR DNA E.coli (2G).

3.2 دقت

3.2.1 انحراف از استاندارد ملی برای محتوای DNA E.coli

مواد مرجع DNA E.coli در هر دسته از کیت با استفاده از استاندارد ملی برای محتوای DNA E.coli کالیبره شد. ماده مرجع DNA Yeasen اساساً فاقد انحراف از استاندارد ملی برای محتوای DNA E.coli بود منحنی کالیبراسیون، و انحراف ارزش سنجش <5٪ بود.

3.2.2 آراکاوری

3.2.2.1 نمونه خالی آزمایش بازیابی Spiking

نمونه‌های استاندارد DNA E.coli در غلظت‌های بالا و پایین به ترتیب pg/μL 300، pg/μL 3 و fg/μL 30 تهیه و پس از استخراج با استفاده از روش دانه مغناطیسی برای DNA باقیمانده Sample Pretation Kit (2 تکرار استخراج و 3 تکرار برای هر نمونه انجام شد) مورد سنجش قرار گرفت. بازیابی نمونه و رزومه مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت.

برای غلظت‌های مختلف نمونه‌های DNA، بازیابی‌ها از 70٪ تا 130٪ متغیر بود و CVها همه کمتر از 20٪ بودند.

نوع نمونه	تمرکز نظری	میانگین 1 را استخراج کنید	استخراج 2 به معنی	غلظت متوسط	CV	بازیابی
نمونه خالی	/	/	/	/	/	/
نمونه بازیابی 1	300 pg/μL	250.56 pg/μL	262.11 pg/μL	256.33 pg/μL	4.41٪	85.44٪
نمونه بازیابی 2	3 pg/μL	2.29 pg/μL	2.56 pg/μL	2.42 pg/μL	7.09٪	80.77٪
نمونه بازیابی 3	30 fg/μL	33.62 fg/μL	32.61 fg/μL	33.12 fg/μL	14.28٪	110.39٪

جدول 1 نمونه خالی بازیابی Spiking

3.2.2.2 شبیه سازی نمونه آزمایش بازیابی Spiking

نمونه هایی با همان غلظت (3 pg/μL DNA E.coli) استخراج شد (2 تکرار استخراج برای هر نمونه و 3 تکرار سنجش برای هر استخراج انجام شد) با 5 محلول زمینه مختلف (پروتئین بالا، اسید نوکلئیک بالا، pH بالا و پایین، نمک بالا) و بازیابی نمونه ها و CV ها مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت.

بازیابی نمونه DNA برای محلول های پس زمینه مختلف از 70٪ تا 130٪، با همه CV ها <20٪ متغیر بود.

نوع نمونه	تمرکز نظری	میانگین 1 را استخراج کنید	استخراج 2 به معنی	غلظت متوسط	CV	بازیابی
نمونه پایه	/	/	/	/	/	/
پروتئین بالا	3 pg/μL	2.25	2.23	2.24	1.09٪	74.74٪
اسید هسته ای بالا		3.93	3.96	3.95	1.56٪	131.52%
پر نمک		2.69	2.67	2.68	2.63	89.20٪
PH بالا		2.90	3.67	3.29	13.82٪	109.55٪
PH پایین		2.77	2.87	2.82	3.41٪	94.01٪

جدول 2 بازیابی اولیه نمونه اولیه

3.3 دقت

3.3.1 تکرارپذیری

آزمایش را 10 بار برای استانداردهای DNA E.coli در غلظت 3 pg/μL با CV <15% تکرار کنید.

تکرارها	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	میانگین	CV
مقدار تشخیص (fg/μL)	3.16	2.87	2.97	2.86	2.81	2.97	3.14	3.21	3.14	3.1	3.02	4.78٪

جدول 3 نتایج تکرارپذیری

3.3.2 دقت متوسط

سه آزمایش‌کننده به‌طور مستقل نمونه‌های استاندارد DNA E.coli را در غلظت‌های بالا و پایین آزمایش کردند: 300 pg/μL، 3 pg/μL، و 30 fg/μL، و سه تکرار برای هر غلظت انجام شد و CVs هر 9 داده به‌دست‌آمده کمتر از 15 درصد بود.

انقضا	تمرکز واقعی تمرکز نظری	E.coli DNA (2G)
		300 pg/uL	3 pg/uL	30 fg/uL
انقضا 1	تعیین 1	295.65	3.22	26.90
	تعیین 2	287.71	3.24	32.00
	تعیین 3	300.23	3.17	27.50
انقضا 2	عزم 4	306.06	3.13	37.30
	عزم 5	299.76	3.02	32.70
	عزم 6	299.63	3.02	34.00
انقضا 3	عزم 7	266.70	3.01	35.90
	عزم 8	272.89	3.09	40.70
	عزم 9	276.51	3.01	35.20
/	میانگین	289.46	3.10	33.60
/	CV	4.89٪	3.02٪	13.18٪

جدول 4 نتایج دقت متوسط

3.4 ویژگی

تداخل DNA ژنومی سلولی که معمولاً در تولید مواد بیولوژیک استفاده می‌شود از نظر تداخل با معرف‌های تشخیص DNA E.coli ارزیابی شد و گروه تداخل با گروه کنترل همپوشانی داشت و هیچ تداخلی مشاهده نشد (شکل زیر به ترتیب داده‌های تداخل DNA ژنومی HEK293، Vero و CHO را با تشخیص DNA Regent E.coli نشان می‌دهد).

شکل 2 نتایج آزمایش تداخل

3.5 محدودیت کمی

E.coli DNA در مقادیر 50 fg/μL، 40 fg/μL، 30 fg/μL، 10 fg/μL و 5 fg/μL، با 10 تکرار برای هر غلظت شناسایی شد. نتایج نشان داد که CV کمتر از 20 درصد در غلظت های 30 fg/μL و بالاتر بود. یعنی حد کمیت کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان E.coli (2G) 30 fg/μL بود.

تکرارها مورد آزمایشی	E.coli DNA (2G) (fg/μL)
	مقدار	نسبت محاسبه مجدد
1	29.43	98.09٪
2	29.51	98.35٪
3	32.04	106.79٪
4	26.07	86.89%
5	34.06	113.53٪
6	33.54	111.79%
7	26.95	89.82٪
8	27.38	91.26٪
9	27.04	90.13٪
10	26.10	87.02%
میانگین	29.21	/
CV	10.40٪	/

شکل 3 نتیجه آزمایش qPCR 30fg/μL E.coli DNA (2G)

3.6 استحکام

این کیت آزمایش شده است و برای ابزارهای زیر مناسب است، اما محدود به آنها نیست:

فروشنده	مدل های ابزار	راندمان تقویت	آر2	حد کمیت (fg/μL)	CV
ترمو	ABI 7500	101.74٪	1	30	13.30٪
ترمو	ABI QuantStudio5	100.46٪	1	30	12.40٪
بیو راد	CFX96	99.20٪	0.999	30	13.76٪
شانگهای هونگشی	SLAN	100.40٪	0.999	30	11.67٪

جدول 5 نتایج تست تناسب ابزار

3.7 ثبات

3.7.1 پایداری انجماد و ذوب

کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان E.coli (2G) با انجماد و ذوب مکرر 10 بار مورد آزمایش قرار گرفت و عملکرد کیت تحت تأثیر قرار نگرفت.

شاخص های تست زمان انجماد-ذوب	پارامتر	زمان T0	10 بار منجمد-ذوب
پارامتر منحنی استاندارد	راندمان تقویت	98.23٪	100.20٪
	آر2	1	0.999
حد کمیت (30 fg/μL)	CV	15.07٪	9.66٪

جدول 6 تجزیه و تحلیل نتایج پایداری انجماد- ذوب

3.7.2 پایداری تسریع شده

E.کولی کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان (2G) به ترتیب در دمای 2 تا 8 درجه سانتیگراد به مدت 30 روز و 37 درجه سانتیگراد به مدت 14 روز نگهداری شد. هیچ یک از عملکرد کیت تحت تأثیر قرار نگرفت.

شاخص های تست دما و زمان شتاب	پارامتر	آزمایش 1		آزمایش 2
		زمان T0	2 ~ 8 ℃ 30 روزها	زمان T0	37 ℃ 14 روز
پارامتر منحنی استاندارد	راندمان تقویت	97.77٪	99.81٪	98.39٪	98.65٪
	آر2	1	1	1	1
حد کمیت (30 fg/μL)	CV	11.04%	13.79٪	9.55٪	14.55٪

جدول 7 تجزیه و تحلیل نتایج پایداری تسریع شده

4. 4.مرجع

4.1 کمیسیون فارماکوپه چین (ChPC). فارماکوپه جمهوری خلق چین (جلد Ⅲ) [S]. پکن: انتشارات علوم و فناوری پزشکی چین، صفحه 542-543، 2020.

4.2 NMPA، 2007: اصول کلی برای بررسی فنی اعتبارسنجی روش تحلیلی برای کنترل کیفیت محصولات بیولوژیکی.

4.3 ICH (2022)《تأیید روش تحلیلی Q2》، نسخه پیش نویس.

اطلاعات سفارش