گزارش اعتبار سنجی DNA سلول DNA میزبان HEK293 (3G)

HEK293 کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان (3جی)

خلاصه صلاحیت (گربه شماره: 41331ES60)

1. پس زمینه

داده های خلاصه شده در این گزارش توسط Yeasen Biotechnology برای 'HEK293' انجام شده است کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان (3G)' محصول داده های خلاصه فقط برای مرجع کاربر است و کاربر باید باقیمانده سلول میزبان را تأیید کند. روش DNA با استفاده از نمونه های خود برای تایید روش می تواند نیازهای کاربر را برآورده کند. به کلیه آزمایشگاه هایی که از این کیت استفاده می کنند توصیه می شود پارامترهای زیر را بررسی کنند: خطی بودن، برد، دقت، دقت، حد کمیت، ویژگی و استحکام.

Yeasen Biotechnology می تواند گزارش صلاحیت دقیق این کیت را ارائه دهد. اگر کاربر از این گزارش استفاده کند، فقط مناسب بودن (که شامل دقت، دقت و ویژگی) باید تأیید شود.

2. مواد و روش های آزمایشی

2.1 HEK293 کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان (3G)، فروشنده: Yeasen، شماره گربه: 41331ES60.

2.2 کیت آماده سازی نمونه DNA باقیمانده مغناطیسی MolPure®، فروشنده: Yeasen، Cat No.: 18461ES60.

2.3 داده های اصلی: نسخه الکترونیکی در "گزارش تجربی" ثبت شد فایل فرعی فایل اصلی 'HEK293 کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان (3G).

2.4 روشها: مواد و روشهای عملیاتی مورد استفاده برای آزمایش اساساً توسط Yeasen Biotechnology تولید یا تنظیم شده است که برای مدت طولانی مورد ارزیابی و تأیید قرار گرفته است، توسعه و ساخت کیت از سیستم ISO 13485 پیروی می کند.

3. محتویات و نتایج صلاحیت

3.1 محدوده تشخیص

محدوده خطی کیت 30 fg/μL~300 pg/μL با R بود.²≥0.998، و راندمان تقویت 90٪ تا 110٪ محدوده با CV <15٪ برای هر سنجش غلظت بود.

شکل 1 منحنی استاندارد qPCR DNA HEK293 (3G).

3.2 دقت

3.2.1 آراکاوری

3.2.1.1 نمونه خالی آزمایش بازیابی Spiking

نمونه HEK293 استانداردهای DNA در غلظت‌های بالا و پایین: 300 pg/μL، 3 pg/μL و 30 fg/μL به ترتیب تهیه شد و پس از استخراج با استفاده از روش مهره مغناطیسی برای کیت پیش درمان نمونه DNA باقی‌مانده (2 تکرار استخراج برای هر نمونه انجام شد، و 3 نمونه استخراج مجدد برای هر نمونه انجام شد و 3 نمونه استخراج مجدد برای آزمایش C انجام شد). تجزیه و تحلیل کرد.

برای غلظت‌های مختلف نمونه‌های DNA، بازیابی‌ها از 70٪ تا 130٪ متغیر بود و CVها همه کمتر از 20٪ بودند.

نوع نمونه	تمرکز نظری	میانگین 1 را استخراج کنید	استخراج 2 به معنی	غلظت متوسط	CV	بازیابی
نمونه خالی	/	/	/	/	/	/
نمونه بازیابی 1	300 pg/μL	306.81 pg/μL	279.57 pg/μL	293.82 pg/μL	6.56٪	97.94٪
نمونه بازیابی 2	3 pg/μL	3.11 pg/μL	2.99 pg/μL	3.09 pg/μL	2.75٪	103.00٪
نمونه بازیابی 3	30 fg/μL	31.02 fg/μL	30.63 fg/μL	30.83 fg/μL	0.89٪	102.77٪

جدول 1 نمونه خالی بازیابی Spiking

3.2.1.2 شبیه سازی نمونه آزمایش بازیابی Spiking

نمونه هایی با همان غلظت (3 pg/μL DNA HEK293) استخراج شد (2 تکرار استخراج برای هر نمونه و 3 تکرار سنجش برای هر استخراج انجام شد) با 5 محلول زمینه مختلف (پروتئین بالا، اسید نوکلئیک بالا، pH بالا و پایین، نمک بالا) و بازیابی نمونه ها و CV ها آنالیز شدند.

بازیابی نمونه DNA برای محلول های پس زمینه مختلف از 70٪ تا 130٪، با همه CV ها <20٪ متغیر بود.

نوع نمونه	تمرکز نظری	میانگین 1 را استخراج کنید	استخراج 2 به معنی	غلظت متوسط	CV	بازیابی
نمونه پایه	/	/	/	/	/	/
پروتئین بالا	3 pg/μL	2.65	2.80	2.73	3.80٪	90.87٪
اسید هسته ای بالا		2.82	2.97	2.90	3.71٪	96.58٪
پر نمک		2.88	2.70	2.79	4.47٪	92.89٪
PH بالا		2.81	2.93	2.87	2.98٪	95.71٪
PH پایین		2.76	2.79	2.77	0.99٪	92.48٪

جدول 2 بازیابی اولیه نمونه اولیه

3.3 دقت

3.3.1 تکرارپذیری

آزمایش را 10 بار برای استانداردهای DNA HEK293 در غلظت 30 fg/μL با CV <15٪ تکرار کنید.

تکرارها	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	میانگین	CV%
مقدار تشخیص (fg/μL)	29.51	30.02	30.13	30.16	27.99	31.01	31.05	30.95	31.02	29.86	30.17	3.15٪

جدول 3 نتایج تکرارپذیری

3.3.2 دقت متوسط

سه آزمایش‌کننده به‌طور مستقل نمونه‌های استاندارد DNA HEK293 را در غلظت‌های بالا و پایین آزمایش کردند: 300 pg/μL، 3 pg/μL، و 30 fg/μL، و سه تکرار برای هر غلظت انجام شد، و CVs تمام نه داده‌های به‌دست‌آمده کمتر از 15 درصد بود.

انقضا	تمرکز واقعی تمرکز نظری	HEK293 DNA (3G)
		300 pg/uL	3 pg/uL	30 fg/uL
انقضا 1	تعیین 1	319.58	3.026	32.02
	تعیین 2	309.76	3.051	37.01
	تعیین 3	309.24	3.067	36.03
انقضا 2	عزم 4	308.34	2.909	29.91
	عزم 5	308.54	2.9	29.67
	عزم 6	305.83	2.921	28.85
انقضا 3	عزم 7	299.11	3.035	29.36
	عزم 8	300.07	2.833	31.14
	عزم 9	302.03	3.033	33.07
/	میانگین	306.95	2.975	31.90
/	CV%	2.03٪	2.83٪	9.26٪

جدول 4 نتایج دقت متوسط

3.4 ویژگی

تداخل DNA ژنومی سلولی که معمولاً در تولید بیولوژیک استفاده می‌شود از نظر تداخل با معرف‌های تشخیص DNA HEK293 ارزیابی شد و گروه تداخل با گروه کنترل همپوشانی داشت و هیچ تداخلی مشاهده نشد (شکل زیر به ترتیب داده‌های تداخل DNAهای ژنومی ژنومی CHO، E.coli و Pichia Pastoris را با تشخیص HEK29 نشان می‌دهد).

شکل 2 نتایج آزمایش تداخل

3.5 محدودیت کمی

DNA HEK293 در 30 fg/μL، 20 fg/μL، 10 fg/μL و 5 fg/μL، با 10 تکرار برای هر غلظت شناسایی شد. نتایج نشان داد که CV کمتر از 20 درصد در غلظت های 10 fg/μL و بالاتر بود. یعنی حد کمیت کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان HEK293 (3G) 10 fg/μL بود.

تکرارها مورد آزمایشی	HEK293 DNA (3G) (fg/μL)
	مقدار	نسبت محاسبه مجدد %
1	11.04	110.40٪
2	9.97	99.70٪
3	11.12	111.20٪
4	11.07	110.70٪
5	11.21	112.10٪
6	9.93	99.30٪
7	10.25	102.50٪
8	10.16	101.60٪
9	10.08	100.80%
10	10.11	101.10٪
میانگین	10.49	/
CV%	5.14٪	/

شکل 3 نتیجه آزمایش qPCR 10fg/μL HEK293 DNA (3G)

3.6 استحکام

این کیت آزمایش شده است و برای ابزارهای زیر مناسب است، اما محدود به آنها نیست:

فروشنده	مدل های ابزار	راندمان تقویت	آر2	حد کمیت (fg/μL)	CV%
ترمو	ABI 7500	102.84٪	1	10	7%
ترمو	ABI QuantStudio5	104.70٪	0.999	10	9%
شانگهای هونگشی	SLAN	101.46٪	0.999	10	8%

جدول 5 نتایج تست تناسب ابزار

3.7 ثبات

3.7.1 پایداری انجماد و ذوب

کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان HEK293 (3G) با انجماد و ذوب مکرر 10 بار آزمایش شد و عملکرد کیت تحت تأثیر قرار نگرفت.

شاخص های تست زمان انجماد-ذوب	پارامتر	زمان T0	10 بار منجمد-ذوب
پارامتر منحنی استاندارد	راندمان تقویت	99.34٪	100.78%
	آر2	1	1
حد کمیت (30 fg/μL)	CV	11%	7%

جدول 6 تجزیه و تحلیل نتایج پایداری انجماد- ذوب

3.7.2 پایداری تسریع شده

کیت تشخیص باقیمانده DNA سلول میزبان HEK293 (3G) به ترتیب در دمای 2 تا 8 درجه سانتی گراد به مدت 30 روز و 37 درجه سانتی گراد به مدت 14 روز نگهداری شد. هیچ یک از عملکرد کیت تحت تأثیر قرار نگرفت.

شاخص های تست دما و زمان شتاب	پارامتر	زمان T0	37 ℃ 7 روز	37 ℃ 14 روز
پارامتر منحنی استاندارد	راندمان تقویت	103.83٪	101.58٪	100.47٪
	آر2	0.999	1	1
حد کمیت (30 fg/μL)	CV%	8%	5%	5%

جدول 7 تجزیه و تحلیل نتایج پایداری تسریع شده

3.8 حد خالی

بدون کنترل الگو (NTC) یک رقت قالب با 96 تکرار مقادیر CT > 32 بود (به علاوه خط آستانه کالیبراسیون ROX روی 0.06 تنظیم شده است).

شکل 4 نتایج آزمایش NTC

4. 4.مرجع

4.1 کمیسیون فارماکوپه چین (ChPC). فارماکوپه جمهوری خلق چین (جلد Ⅲ) [S]. پکن: انتشارات علوم و فناوری پزشکی چین، صفحه 542-543، 2020.

4.2 NMPA، 2007: اصول کلی برای بررسی فنی اعتبارسنجی روش تحلیلی برای کنترل کیفیت محصولات بیولوژیکی.

4.3 ICH (2022)《تأیید روش تحلیلی Q2》، نسخه پیش نویس.

اطلاعات سفارش