فصل 1: فناوری PCR
1.1 اصول PCR
PCR (واکنش زنجیره ای پلیمراز)، یا واکنش زنجیره ای پلیمراز، به DNA پلیمراز اشاره دارد. توسط رشته اصلی DNA به عنوان یک الگو کاتالیز می شود پرایمر خاص برای گسترش نقطه شروع، افزودن dNTP، Mg2+ و عوامل گسترش، افزایش تقویت عوامل. از طریق مراحل دناتوراسیون، بازپخت و گسترش، همانندسازی در شرایط آزمایشگاهی رشته دختر مکمل DNA الگوی رشته والد است که می تواند به سرعت و به طور خاص هر DNA هدف را در شرایط آزمایشگاهی تقویت کند.
1.2 طبقه بندی DNA پلیمرازها
DNA pol یک است آنزیم مهم برای سلولی همانندسازی DNA با توجه به پایداری حرارتی، توانایی سنتز، سرعت، وفاداری و خاص بودنمی توان آن را به عنوان DNA پلیمراز Taq، DNA پلیمراز با وفاداری بالا، DNA پلیمراز شروع داغ، DNA پلیمراز با انبساط مستقیم، DNA پلیمراز تکه تکه شده طبقه بندی کرد. آنزیم، DNA پلیمراز سریع، DNA پلیمراز چندگانه و غیره.
رایج ترین آنها Taq DNA پلیمراز است که دارای فعالیت پلیمراز در انتهای 5'→3' است و فعالیت اگزونوکلئاز در انتهای 5'→3'، اما نه فعالیت تصحیح پایان 3'→5'. مهمترین ویژگی Taq مقاومت حرارتی خوب آن است که می تواند در برابر دناتوره شدن حرارتی مقاومت کند گام از PCR، اضافه کردن آنزیم بیشتر در نیمه راه را غیر ضروری می کند. با این حال، طاق از وفاداری پایینی برخوردار است زیرا فعالیت تصحیحی ندارد. وفاداری آن عمدتاً با غلظت و نسبت یون‌های منیزیم و dNTP به دست می‌آید.
DNA پلیمراز با وفاداری بالا حاوی یک مرکز پلیمریزاسیون و یک مرکز برش است، مرکز پلیمریزاسیون دارای فعالیت DNA پلیمراز 5'→3' است که می تواند کاتالیز کند. سنتز DNA در جهت 5'→3'; مرکز برش دارای یک فعالیت اگزونوکلئاز 3'→5' است که می تواند ناهماهنگی های پایه را ترمیم کند. بنابراین، علاوه بر ویژگی های Taq DNA پلیمراز، DNA پلیمراز با وفاداری بالا نیز دارای فعالیت اصلاحی است که مسئول هیجان انگیز عدم تطابق نوکلئوتیدها، بنابراین دقت محصول را تضمین می کند.
نمودار بالا نحوه عملکرد DNA پلیمراز را نشان می دهد [1].
مستقیم PCR (Direct PCR) یک واکنشی که از نمونه های خالص نشده برای تقویت PCR و حیوانات استفاده می کند یا بافت های گیاهی برای تکثیر مستقیم. در حال حاضر، Yeasen کیت های مستقیم PCR را می توان برای تکثیر PCR نمونه های خام مانند گیاهان، بافت های حیوانی، خون و غیره استفاده کرد. بدون نیاز به تصفیه اسید نوکلئیک که روند آزمایشات PCR را بسیار ساده می کند.
شکل بالا تکنیک Direct PCR را نشان می دهد.
الف روش مستقیم: مقدار کمی نمونه بردارید و مستقیماً به PCR اضافه کنید Master Mix برای شناسایی PCR.
ب- روش لیز: پس از گرفتن نمونه، آن را به محلول لیز اضافه کنید تا ژنوم آزاد شود، مقدار کمی از مایع رویی لیز را بردارید و برای شناسایی PCR به مخلوط اصلی PCR اضافه کنید.
1.3 سوالات متداول و راه حل ها
| مشکل | دلیل | راه حل |
| بدون باندهای تقویت شده | مشکلات سیستم الکتروفورز | عیب یابی رنگ اسید نوکلئیک، غلظت ژل و بافر الکتروفورز. |
| دمای دناتوراسیون نادرست | آیا دمای مشخص شده دستگاه PCR با دمای واقعی مطابقت دارد؟ اگر درجه حرارت بیش از حد بالا باشد، آنزیم به سرعت عمل می کند در چند سیکل اول؛ اگر خیلی کم باشد، دناتوره سازی الگو کامل نیست. | |
| آلودگی پروتئاز و نوکلئاز در سیستم واکنش | سیستم واکنش باید قبل از افزودن آنزیم Taq به مدت 5-10 دقیقه در دمای 95 درجه سانتیگراد گرم شود. | |
| پخطای ریمر | بررسی ویژگی پرایمر یا طراحی مجدد پرایمرها با استفاده از BLAST. | |
| قالب حاوی ناخالصی است | به طور خاص، بافت‌های فیکس شده با فرمالدئید و پارافین اغلب حاوی اسید فرمیک هستند که باعث دپوراسیون DNA می‌شوند و بر نتایج PCR تأثیر می‌گذارند. | |
| خرابی و خرابی پرایمر | اطمینان حاصل کنید که پرایمرهای مصنوعی درست، خالص شده یا به دلیل شرایط نامناسب نگهداری غیرفعال هستند. | |
| مقدار کمتر محصول PCR | دمای آنیل نامناسب | یک واکنش گرادیان PCR برای بهینه سازی دمای بازپخت با گرادیان 2 درجه طراحی شد. |
| وجود بازدارنده ها در قالب DNA | مطمئن شوید که الگوی DNA تمیز است. | |
| دناتوراسیون طولانی مدت | دناتوره شدن طولانی مدت منجر به غیر فعال شدن DNA پلیمراز می شود. | |
| پسوند خیلی کوتاه است | زمان تمدید خیلی کوتاه است. زمان تمدید را بر اساس اصل 1kb/min تنظیم کنید. | |
| مقدار الگوی DNA خیلی کم است | مقدار الگوی DNA را افزایش دهید. | |
| مقدار ناکافی پرایمر | محتوای پرایمر را در سیستم افزایش دهید. | |
| تعداد سیکل های PCR ناکافی است | تعداد چرخه های واکنش را افزایش دهید. | |
| باندهای متعدد | ویژگی پرایمر ضعیف | از نرم افزارهای طراحی پرایمر مانند BLAST و Primer برای بررسی ویژگی پرایمر یا طراحی مجدد پرایمرها استفاده شد. |
| تعداد بیش از حد حلقه ها | مقدار الگو را به طور مناسب افزایش دهید و تعداد چرخه ها را کاهش دهید. | |
| آلودگی DNA اگزوژن | از عملکرد تمیز اطمینان حاصل کنید. | |
| تعداد بیش از حد قالب ها | مقدار DNA پلاسمید باید کمتر از 50 نانوگرم باشد، در حالی که DNA ژنومی باید کمتر از 200 نانوگرم باشد. | |
| پرایمر بیش از حد | مقدار پرایمرها را در سیستم واکنش کاهش دهید. | |
| محلول واکنش به خوبی مخلوط نشده است | اطمینان حاصل کنید که بافر واکنش کاملا ذوب شده و کاملاً مخلوط شده است. | |
| Mg غلظت بالا | غلظت منیزیم مصرفی را به طور مناسب تنظیم کنید. | |
| دوز بالای آنزیم یا کیفیت پایین آنزیم | مقدار آنزیم را کاهش دهید یا آن را با منبع دیگری جایگزین کنید. | |
| دمای آنیل پایین، بازپخت طولانی و زمان افزایش | دمای بازپخت را برای کاهش زمان دناتوراسیون و گسترش افزایش دهید، یا یک واکنش گرادیان PCR برای بهینه سازی دمای آنیل طراحی کنید. | |
| مشکلات مربوط به خود مخلوط PCR | اگر PCR premix است، ممکن است کیفیت خود معرف باشد، توصیه می شود بچ یا مارک های دیگر را تغییر دهید. | |
| اندازه اشتباه | سیآلودگی | نیمکت را با معرف ها و نوک های جدید تمیز کنید. |
| استفاده نادرست از الگوها یا پرایمرها | پرایمرها و قالب ها را جایگزین کنید. | |
| جیآنوتیپ | آنالیز توالی و مطالعات BLAST بر روی ژن های مورد مطالعه انجام شد. |
فصل 2: الکتروفورز اسید نوکلئیک
2.1 اصول الکتروفورز اسید نوکلئیک
حرکت ذرات باردار تحت اثر میدان الکتریکی به سمت الکترود مخالف خواص الکتریکی آنها الکتروفورز نامیده می شود. استفاده از ذرات باردار در میدان الکتریکی حرکت با سرعت های مختلف و دستیابی به جداسازی فناوری الکتروفورز نامیده می شود. الکتروفورز اسید نوکلئیک یک ابزار مهم برای تحقیقات اسید نوکلئیک و یک است بخشی جدایی ناپذیر از تکنیک هایی مانند پروب های اسید نوکلئیک، تقویت اسید نوکلئیک و تحلیل توالی الکتروفورز اسید نوکلئیک معمولاً انجام می شود انجام شد در آگارز یا ژل پلی آکریل آمید غلظت های مختلف از آگارز و پلی آکریل آمید می توانند ژل هایی با اندازه های مش الک مولکولی مختلف تشکیل دهند که می توانند برای جداسازی قطعات اسید نوکلئیک با وزن های مولکولی مختلف استفاده شوند.
2.2 الکتروفورز ژل آگارز
آگارز یک پلیمر خطی است که از جلبک دریایی استخراج می شود. آگارز در یک محلول بافر حرارت داده می شود و به یک محلول شفاف و شفاف ذوب می شود و سپس ریخته می شود. در قالب ژلاتین قرار می گیرد و جامد می شود و ماتریکس جامد به نام ژل را تشکیل می دهد که چگالی آن بستگی به غلظت آگاروز
آگارز الکتروفورز ژل نوعی روش الکتروفورز با استفاده از آگارز به عنوان محیط حمایتی است تفاوت اصلی بین تحلیلی اصل و دیگر پشتیبانی الکتروفورز این است که آن را دارد نقش دوگانه "الک مولکولی" و "الکتروفورز". را ژل در آن قرار می گیرد میدان الکتریکی، زیر عمل از میدان الکتریکی، باردار اسیدهای نوکلئیک به سمت مثبت قطب از طریق مش از را ژل را نرخ از مهاجرت تحت تأثیر اندازه است مولکولهای اسید نوکلئیک، غلظت آگارز، ولتاژ اعمال شده، میدان الکتریکی، بافر الکتروفورز و مقدار رنگ جاسازی شده. پس از زمان مناسب الکتروفورساست زیر شرایط مختلفقطعات اسید نوکلئیک با اندازه‌ها و ترکیب‌های مختلف در موقعیت‌های مختلف روی ژل قرار می‌گیرند و به این ترتیب هدف جداسازی محقق می‌شود.جداسازی ژل آگارز دارای طیف گسترده ای است، معمولاً در بازیابی ژل برش DNA، جداسازی DNA و برای پشتیبانی از نوترکیب بودن DNA استفاده می شود. پلاسمید و غیره را می توان از طول جدا کرد 200bp به 50 کیلوبایت از DNA قطعات
2.3 روش های تجربی
ساختن چسب
غلظت 1% را به عنوان مثال در نظر بگیرید: 1 گرم آگارز را وزن کنید، آن را در یک فلاسک مخروطی 250 میلی لیتری بریزید، 100 میلی لیتر بافر الکتروفورز 0.5×TBE اضافه کنید. و خوب مخلوط کنید و در مایکروفر بجوشانید و سپس آن را با هوا در حدود 60 درجه سانتیگراد خشک کنید، مقدار مناسب رنگ اسید نوکلئیک را اضافه کنید و خوب تکان دهید و سپس در یک صفحه ژل تمیز که از قبل آماده شده است بریزید، با دو دست شانه بگیرید تا به صورت عمودی داخل محلول ژل قرار دهید و منتظر بمانید ژل بودن به طور طبیعی خنک شود تا زمانی که کاملاً جامد شود (25-30 دقیقه).
شانه ساخت چسب را بردارید
ژل را با دقت به مخزن الکتروفورز (یا با سینی ژل یا فقط ژل) منتقل کنید) سمت چاه نمونه را در قطب منفی قرار دهید و 0.5× TBE اضافه کنید بافر الکتروفورز تا زمانی که ژل حدود 1 میلی متر زیرتر شود.
اضافه کنید نمونه
اضافه کردن 10× بافر بارگذاری (بارگذاری بافر) به نمونه های DNA، خوب مخلوط کنید و سپس مخلوط نمونه را به آرامی به سو اضافه کنیدبژل ادغام شده چاه ها با تفنگ پیپت، اضافه کردن 5-10 میکرولیتر نمونه در هر چاه (نه بیشتر از 40 میکرولیتر). به طور کلی، اولین چاه باید با نشانگر DNA پر شود، دومی با کنترل مثبت (DNA تعریف شده) و سوم با کنترل منفی (معرف یا آب) و ترتیب نمونه ها باید ثبت شود.
الکتروفورز
را بپوشانید مخزن الکتروفورز، وصل کنید سیم ها، برق را روشن کنید و ولتاژ، جریان الکتروفورز را تنظیم کنید و زمان پارامترها به طور کلی، ولتاژ نباید از 5 ولت بر سانتی متر تجاوز کند (طول به آن اشاره دارد فاصله بین قطب های مثبت و منفی مخزن الکتروفورز) و زمان الکتروفورز به طور کلی است 15-30 دقیقه
پایان الکتروفورز
حذف کنید را ژل (بدون سینی ژل) و آن را در زیر سیستم تصویربرداری UV تصویر کنید تا یک تصویر الکتروفورتیک واضح به دست آورید، سپس تصویر الکتروفورتیک را ویرایش کنید. با نرم افزار ویرایش تصویر و آن را با اطلاعات نمونه، تاریخ و اپراتور برچسب بزنید.
2.4 پرسش ها و راه حل های متداول
| مشکل | دلیل | راه حل |
| باند هدف گم شده است | ژل DNA کوچک تمام می شود | زمان الکتروفورز را کوتاه کنید، ولتاژ را کاهش دهید، غلظت ژل را افزایش دهید. |
| نوارهای DNA با وزن مولکولی مشابه به راحتی قابل تشخیص نیستند | زمان الکتروفورز را برای مطابقت با غلظت بهینه ژل افزایش دهید. | |
| قطعه هدف برای الکتروفورز معمولی خیلی بزرگ است. | بر روی الکتروفورز ژل پالسی تجزیه و تحلیل شد. | |
| کلیپ بدون هدف | فرآیند PCR معیوب بود و محصول مورد نظر را تقویت نکرد. | |
| نوارهای DNA تار | بافر الکتروفورز کهنه | هنگامی که بافر الکتروفورز چندین بار استفاده می شود، قدرت یونی کاهش می یابد، مقدار PH به آرامی افزایش می یابد و توانایی شستشو ضعیف می شود، بنابراین بر اثر الکتروفورز تأثیر می گذارد، بنابراین توصیه می شود که بافر الکتروفورز را مرتباً تغییر دهید. |
| تخریب DNA | از آلودگی نوکلئاز جلوگیری کنید. | |
| شرایط الکتروفورز مورد استفاده برای الکتروفورز مناسب نیست | ولتاژ الکتروفورز نباید از 20V/cm تجاوز کند و دما باید کمتر از 30 درجه سانتیگراد باشد. دمای الکتروفورز رشته های بزرگ DNA باید کمتر از 15 درجه سانتیگراد باشد. بررسی کنید که آیا بافر الکتروفورز مورد استفاده ظرفیت بافر کافی دارد یا خیر. | |
| نمونه برداری بیش از حد DNA | مقدار DNA نمونه برداری شده در ژل را کاهش دهید. | |
| نمونه های DNA خیلی شور هستند | نمک اضافی با رسوب اتانول قبل از الکتروفورز حذف شد. | |
| آلودگی پروتئینی | استخراج فنل قبل از الکتروفورز باعث حذف پروتئین ها می شود. | |
| غلظت نمونه خیلی بالاست | غلظت نمونه بالایی باید کمتر از 500 نانوگرم در چاه باشد، غلظت بیش از حد بالا بر سرعت الکتروفورز تأثیر می گذارد، در حال اجرا، و در نتیجه کشیدن و تار شدن. | |
| باندهای ضعیف یا بدون | اندازه نمونه ناکافی از DNA | افزایش میزان جذب DNA |
| تخریب DNA | جلوگیری از آلودگی نوکلئازی DNA | |
| منبع نور نامناسب برای رنگهای اسید نوکلئیک | منبع نور مناسب با طول موج را مطابق دستورالعمل رنگ اسید نوکلئیک انتخاب کنید. | |
| باندها جدا نشدن | کمبود زمان | زمان الکتروفورز را افزایش دهید |
| غلظت نادرست ژل | غلظت چسب خیلی زیاد است و در نتیجه مقاومت زیادی در برابر جدا شدن ایجاد می کند. | |
| غلظت یون های نمک در نمونه خیلی زیاد است | غلظت بالای یون های نمک مقاومت الکتروفورتیک را افزایش می دهد و از جدا شدن نوارها مانند نمونه های هضم شده حاوی بافر اندونوکلئاز جلوگیری می کند. | |
| باندهای غیر اختصاصی | آلودگی RNA | آماده سازی مجدد نمونه ها |
| آلودگی بین نمونه ها | تعویض نوک در حین پر کردن؛ جلوگیری از ریختن نمونه های با حجم بیش از 40 میکرولیتر. |
2.5 الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید
ژل های پلی اکریل آمید از واکنش شیمیایی بین مونومر آکریل آمید، کاتالیزورهای پلیمریزاسیون زنجیره ای N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine (TEMED) و آمونیوم پرسولفات و عامل اتصال عرضی N,N'-methylenebisacrylamide تشکیل می شوند. مونومر آکریل آمید در حضور یک کاتالیزور پلیمریزه می شود و طولانی می شود زنجیر، که هستند متقابل توسط یک عامل اتصال عرضی برای تشکیل ژل که اندازه منافذ آن با طول زنجیره و درجه اتصال عرضی تعیین می شود. اندازه منافذ با طول زنجیره و درجه پیوند متقابل طول زنجیر بستگی دارد غلظت آکریل آمید و درجه اتصال عرضی پلیمر را می توان با تنظیم نسبت آکریل آمید به عامل پیوند دهنده تغییر داد..
می توان از الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید استفاده کرد جدا کردن نمونه بر اساس تفاوت در شارژ، اندازه مولکولی و شکل نمونه های الکتروفورز شده. الک مولکولی و الکترواستاتیک را ترکیب می کند ، و قدرت تفکیک بالاتری نسبت به الکتروفورز ژل آگارز دارد. قطعات DNA تنها با تفاوت یک نوکلئوتید را می توان جدا کرد.
الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید برای تجزیه و تحلیل و تهیه قطعات DNA با طول کمتر از 1 کیلوبایت استفاده می شود. بسته به اندازه از قطعات اسید نوکلئیک که باید جدا شوند، ژل از متفاوت است می توان تهیه کرد.
محدوده جداسازی موثر برای غلظت های مختلف آکریل آمید و DNA در جدول زیر نشان داده شده است:
| Conc. (%) | محدوده جداسازی موثر (bp) |
| 3.5 | 100 تا 2000 |
| 5 | 80 تا 500 |
| 8 | 60 تا 400 |
| 12 | 40 تا 200 |
| 15 | 25 تا 150 |
| 20 | 10 تا 100 |
2.4 دستورالعمل برای انتخاب محصولات مرتبط
PCR معمولی | ||||
| مشخصات | 10167ES | 10102ES | 10103ES | 10108ES |
| طول تقویت | ≤10-15 کیلوبایت | ≤5 کیلوبایت | ≤5 کیلوبایت | ≤4 کیلوبایت |
| زمان تمدید | 1-10 ثانیه در کیلوبایت | 30 ثانیه در کیلوبایت | 30 ثانیه در کیلوبایت | 30 ثانیه در کیلوبایت |
| ساختار نهایی محصول | 3'-dA | 3'-dA | 3'-dA | 3'-dA |
| دمای بازپخت | 60 درجه سانتیگراد | Tm-(2~5)℃ | Tm-(2~5)℃ | Tm-(2~5)℃ |
| محدوده سازگاری GC | 30-70٪ | 40-70٪ | 40-70٪ | 30-70٪ |
| فعالیت اگزونوکلئاز 5'-3' | حاضر شود | حاضر شود | حاضر شود | حاضر شود |
| کلنی PCR | مناسب است | مناسب است | مناسب است | مناسب است |
| شناسایی ژن | مناسب است | مناسب است | مناسب است | مناسب است |
| Multiplex PCR | مناسب نیست | مناسب نیست | مناسب نیست | 3-4 plex PCR |
| نشانگر الکتروفورز | بنفش قرمز | آبی | بی رنگ | آبی |
| شروع داغ | شروع داغ | نه شروع داغ | نه شروع داغ | شروع داغ |
| پیش مخلوط / کیت | از قبل مخلوط کنید | از قبل مخلوط کنید | از قبل مخلوط کنید | از قبل مخلوط کنید |
PCR مستقیم | ||||
| مشخصات | 10185ES | 10188ES | 10187ES | |
| نوع محصول | تقویت مستقیم ماوس | تقویت مستقیم خون | تقویت مستقیم گیاهی | |
| طول تقویت | ≤1 کیلوبایت | ≤8 کیلوبایت | ≤1 کیلوبایت | |
| زمان تمدید | 30 ثانیه بر کیلوبایت | 3-5 ثانیه بر کیلوبایت برای ≤2 کیلوبایت، | 60 ثانیه بر کیلوبایت | |
| 10 ثانیه در کیلوبایت برای ≤8 کیلوبایت | ||||
| زمان لیز نمونه | 15 دقیقه | 0-3 دقیقه | 0-10 دقیقه | |
| ساختار نهایی محصول | انتهای بلانت | انتهای بلانت | انتهای بلانت | |
| دمای بازپخت | Tm-(2~5)℃ | Tm-(1~2)℃ | Tm-(2~5)℃ | |
| محدوده سازگاری GC | 30-70٪ | 30-75٪ | 40-65٪ | |
| فعالیت اگزونوکلئاز 5'-3' | √ | √ | √ | |
| شناسایی ژن | √ | √ | √ | |
| Multiplex PCR | 3-4 پلکس | |||
| تقویت نمونه مستقیم | √ | √ | √ | |
| نشانگر الکتروفورز | آبی | بی رنگ | آبی | |
| شروع داغ | √ | √ | √ | |
| پیش مخلوط / کیت | کیت (همراه با مخلوط) | کیت (با مخلوط + بافر) | کیت (همراه با مخلوط) | |
| ارگانیسم های مناسب | موش، موش | انسان، موش، بز، مرغ، خوک و غیره | برنج، ذرت، تنباکو، کلزا، گندم، سویا و غیره. | |
| بافت/مواد مناسب | دم، گوش، انگشت پا (با ماهیچه) و سایر اندام ها | خون تازه با EDTA، هپارین، سیترات و غیره، خون سرد (یخ زده)، لکه های خون خشک تجاری | برگ های جوان، برگ های پیر، نهال، ساقه های جوان | |
| ورودی نمونه | بافت: 5-10 میلی گرم. دم: 1-5 میلی متر | خون کامل: 0.5٪ - 20٪ لکه خون خشک: 1 میلی متر مربع | برگ: 1-10 میلی متر، بذر: 1-3 میلی متر | |
PCR با کیفیت بالا | ||||
| مشخصات | 10164ES | 10153ES | 10154ES | |
| طول تقویت | ≤10 kb gDNA، ≤10 kb cDNA، ≤16 kb λDNA | ≤10 kb gDNA، ≤10 kb cDNA، ≤13 kb λDNA | ≤10 kb gDNA، ≤10 kb cDNA، ≤13 kb λDNA | |
| زمان تمدید | 5 ثانیه در کیلوبایت | 30 ثانیه در کیلوبایت | 30 ثانیه در کیلوبایت | |
| وفاداری (تاق) | 83× | 83× | 83× | |
| ساختار نهایی محصول | انتهای بلانت | انتهای بلانت | انتهای بلانت | |
| دمای بازپخت | 60℃ | 68℃ | 68℃ | |
| محدوده سازگاری GC | 20-80٪ | 30-60٪ | 30-60٪ | |
| فعالیت اگزونوکلئاز 5'-3' | غایب | غایب | غایب | |
| نشانگر الکتروفورز | آبی | بی رنگ | آبی | |
| تک آنزیم/پیش مخلوط | از قبل مخلوط کنید | تک آنزیم | از قبل مخلوط کنید | |
| تحمل | / | / | خون، لیز بافت موش | |
الکتروفورز اسید نوکلئیک | ||||
| دسته بندی محصولات | گربه شماره | نام محصول | برنامه | |
| آگارز | 10208ES | آگارز | الکتروفورز معمول اسید نوکلئیک | |
| 10221ES | آگارز با الک بالا (درجه PCR) | مناسب برای جداسازی قطعات DNA 20 جفت باز تا 800 جفت باز، قابل مقایسه با ژل پلی آکریل آمید | ||
| 10226ES | قرص آگارز (0.5 گرم / قرص) | مناسب برای کاربردهای معمول آگارز | ||
| رنگ اسید نوکلئیک | 10202ES | رنگ آمیزی ژل اسید نوکلئیک سال قرمز (10000× در آب) | محلول در آب، با خواص طیفی مشابه EB، تحریک پذیر در نور فرابنفش 300 نانومتر | |
| نشانگر DNA | 10510ES | GoldBand 1 kb DNA Ladder | 250-12000 جفت باز (13 باند) | |
| 10515ES | GoldBand 50bp DNA Ladder | 50-1000 جفت باز (14 باند) | ||
| 10507ES | GoldBand 100bp DNA Ladder | 100-1500 جفت باز (12 باند) | ||
| 10516ES | GoldBand 100bp به اضافه DNA Ladder | 100-3000 جفت باز (14 باند) | ||
| 10517ES | GoldBand 200bp DNA Ladder | 200-5000 جفت باز (12 باند) | ||
| 10518ES | GoldBand 500bp DNA Ladder | 500-5000 جفت باز (8 باند) | ||
| 10501ES | نشانگر DNA GoldBand DL2000 | 100-2000 جفت باز (6 باند) | ||
| 10504ES | نشانگر DNA GoldBand DL5000 | 100-5000 جفت باز (9 باند) | ||
| 10505ES | نشانگر DNA GoldBand DL10000 | 100-10000 جفت باز (10 باند) | ||
| 10511ES | نردبان DNA تمام مقیاس GoldBand | 100-12000 جفت باز (20 باند) | ||
| 10512ES | نشانگر DNA GoldBand DL15000 | 250-15000 جفت باز (7 باند) |
2.5 انتشارات با استفاده از محصولات الکتروفورز اسید نوکلئیک (صمصنوعی)
[1] لو جی، یانگ Q، Zhang X، و همکاران. TFPI یک گیرنده کریپت کولون برای TcdB از کلاد بیش از حد ویروسی 2 C. dificile است. سلول 2022؛ 185 (6): 980-994. e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010 (IF:41.584)
[2] هوانگ N، چن اچ، گونگ اچ، و همکاران. SeHed، یک سیستم بیان ژن جدید با پراکس هیدروژن برانگیخته استرس خاصیت حذف ایده و اثر ضد پیری. انتقال سیگنال و درمان هدفمند 2022, 7, 235. doi: 10.1038/s41392-022-01047-2. (اگر: 38.1)
[3] Zhang C، Zhou B، Gu F، و همکاران. مهار میکروپپتید PACMP باعث ایجاد اثرات کشنده مصنوعی می شود با کاهش CtIP و پلی (ADP-ribosyl) یون. سلول مول. 2022؛ 82 (7): 1297-1312.e8. doi:10.1016/j.molcel.2022.01.020 (اگر:17.970)
[4] زو ام، دایکس. سرکوب رشد توسط سطوح تغییر یافته (p)ppGpp ناشی از غیربهینه بودن است تخصیص منابع در اشرشیاکلی Nucleic Acids Res. 2019؛ 47 (9): 4684-4693. doi: 10.1093/nar/gkz211 (IF:11.147)
[5] Rizwan HM، Zhimin L، HarsonowatiW، و همکاران. شناسایی پاتوژن های قارچی برای کنترل پس از برداشت تجزیه و تحلیل مسیر مقایسه‌ای پوسیدگی‌ها و چند اومیکس میوه شور (Passiflora edulis) بنفش مقاومت بیشتری دارد نسبت به ارقام زرد نسبت به پاتوژن ها وجود دارد. j قارچ (بازل). 2021؛ 7 (10): 879. منتشر شده در 19 اکتبر 2021. doi:10.3390/jof 7100879 (IF: 5.816)
[6] LiT، Zhou B، Luo Z، و همکاران. خصوصیات ساختاری الف خنثی کردن نانوکسی با فعالیت گسترده علیه انواع SARS-CoV-2. میکروبیول جلو. 2022؛ 13:875840. منتشر شده در 2 ژوئن 2022. doi:10.3389/fmicb.2022.875840 (IF: 5.640)
[7] وانگ تی، رن دی، گوا اچ، و همکاران. CgSCD1 برای بیوسنتز ملانین و بیماری زایی ضروری است از Colletotrichum gloeosporioides. عوامل بیماری زا 2020؛ 9 (2): 141. منتشر شده در 20 فوریه 2020. doi:10.3390/pathogens9020141(IF:3.018) :141. منتشر شده در 20 فوریه 2020. doi:10.3390/pathogens9020141 (IF: 3.018)
[8] Lv Y، LiX، Zhang H، Zou F، Shen B. نمایه بیان CircRNA در حساس به دلتامترین و مقاوم در برابر
pipiens pallens (Diptera: Culicidae). Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol. 2022؛ 261:110750. doi: 10.1016 /j.cbpb.2022.110750 (IF:2.231)
[9] هو ام، دایکس. سرکوب رشد با تغییر (p) ppGpp سطوح ناشی از تخصیص غیر بهینه منابع در اشریشیا کلی[J]. تحقیقات اسیدهای نوکلئیک، 2019، 47(9): 4684-4693.(IF11.6)
[10] Guo L، Yang W، Huang Q، و همکاران. طیف‌سنجی جرمی خاص سلنوسیستئین، سلنوپروتئوم‌های متمایز بافتی و سلنوپروتئین‌های کاندید [J] را نشان می‌دهد. مواد شیمیایی سلولی زیست شناسی، 2018، 25(11): 1380-1388. e4. (IF6.762)
2.6 انتشارات با استفاده از محصولات PCR (جزئی)
[1] وانگ ای، فو ز، لیکس، et al. سیتوپلاسمی سنجش DNA توسط KU مجتمع در پیر CD4+ T سلول تقویت می کند تی سلول فعال یون و مربوط به پیری خود ایمنی التهاب مصونیت. 2021؛ 54 (4): 632-647.e9. doi:10.1016/j.immu
ni.2021.02.003 (IF: 31.745)
[2] یانگ ایکس، گائو اف، ژانگ دبلیو، et al. "ستاره" miR-34a و CXCR4 آنتاگونیست مبتنی بر نانوپلکس برای دوتاییy تعاونی درمان مهاجرت در مقابلتی متاستاتیک سینه سرطان جی کنترل کنید رها کنید. 2020؛ 326:615-627. doi: 10.1016/j. jconrel.2020.07.029 (IF: 7.727)
[3] QiaoY، دو جی، جنرال الکتریک R، et al. الف نمونه و تشخیص میکروسوزن پچ برای پسوریازیس میکرو RNA نشانگر زیستی
تجزیه و تحلیل در بینابینی مایع. مقعدی شیمی. 2022؛ 94 (14): 5538-5545. doi:10.1021/acs.analchem.1c04401(IF:6.986)
[4] لین س، بله X، هوانگ ز، et al. گرافن بر پایه اکسید سرکوب از غیر اختصاصی بودن در حلقه با واسطه ایزوتر تقویت نادرست فعال کردن حساس تشخیص سیکلواکسیژناز-2 mRNA در کولورکتال سرطان. مقعدی شیمی. 2019؛ 91 (24): 15694-15702. doi:10.1021/acs.analchem.9b03861(IF:6.350)
[5] لین س، هوانگ Z، بله X، et al. آزمایشگاه در الف لوله: انزوا، استخراج، و استدیگر تقویت تشخیص از اگزوزومی طولانی غیر کدگذاری RNA معده سرطان تالانتا. 2021; 225:122090.
doi:10.1016/j.tta.2021.122090(IF:6.057)
[6] لیو ج زو جی، et al. 5- فرمیلوراسیل به عنوان الف چندکاربردی ساختمان مسدود کردن در حسگر زیستی طرح ها [J]. آنژو شیمی بین المللی اد انگلیسی 2018 ژوئیه 26؛ 57 (31): 9689-9693. (IF 11.992)
[7] وانگ م، ژانگ اس، ژنگ جی، et al. افزایش عملکرد موتاتیون از کارت 14 منجر به خود به خود شبیه پسوریازیس پوست التهاب از طریق تقویت شده کراتینوسیت پاسخ به IL-17A. مصونیت. 2018؛ 49 (1): 66-79.e5.
doi:10.1016/j.immuni.2018.05.012(IF:19.734)
[8] ژانگ ی، دینگ اچ، وانگ ایکس، et al. MK2 ترویج می کند Tfcp2l1 تنزل از طریق β-TrCP یوبیکوئیتین لایگاز به تنظیم کند موش ساقه جنینی خود نوسازی سلولی سلول 2021؛ 37 (5): 109949. doi:10.1016/j.celrep.2021.109949 (IF: 9.423)
[9] لین س، ای ایکس، یانگ ب et al. زمان واقعی فلورسانس با واسطه حلقه همدما تقویت کنندهیون سنجش برای سریع و حساس تشخیص استرپتوکوک gallolyticus subsp. گالولیتicus مرتبط با روده بزرگ سرطان [J].
تحلیلی و زیست تحلیلی شیمی، 2019, 411 (26): 6877-6887. (IF6.35)
[10] لین س، بله X، هوانگ ز، et al. گرافن بر پایه اکسید سرکوب از غیر اختصاصی بودن در حلقه با واسطه ایزوتر تقویت نادرست فعال کردن حساس تشخیص سیکلواکسیژناز-2 mRNA در رنگctal سرطان[J]. آنالیتی cal شیمی، 2019. (IF6.35)
استناد:
[1] Loeb LA، Jr R. DNA polymerases و بیماری انسانی [J]. بررسی های طبیعت ژنتیک.