Yeasen و Molefuture برای غلبه بر چالش های زیست شناسی مولکولی، DNA لیگاز پیشرفته T4 را معرفی می کنند.

Yeasen و Molefuture به طور مشترک با استفاده از پلتفرم ZymeEditor خود یک T4 DNA لیگاز پیشرفته را توسعه داده اند که به مسائل کلیدی در زیست شناسی مولکولی و ساخت کتابخانه DNA برای توالی یابی نسل بعدی (NGS) می پردازد. لیگاز DNA سنتی T4 با چالش هایی مانند پایداری ضعیف، تشکیل دایمر آداپتور بالا، و خود بستن قطعه DNA بالا مواجه است. هدف این آنزیم جدید غلبه بر این محدودیت هاست.

T4 DNA لیگاز، یک آنزیم وابسته به ATP، دارای یک دامنه متصل به DNA فشرده-مارپیچ (DBD)، یک دامنه نوکلئوتیدیل ترانسفراز (NTase) و یک دامنه OB-fold است. با تجزیه و تحلیل ساختار پروتئین، محققان بقایای کلیدی را در 5 تا 20A از بستر DNA شناسایی کردند. آنها با استفاده از ابزارهای محاسباتی پیشرفته، در غربالگری سیلیکو، و تحلیل ساختار-عملکرد، جهش‌یافته‌ها را از طریق هم‌ترازی توالی اجماع، با ترکیب بینش‌های ساختاری-عملکردی طراحی کردند.

علاوه بر طراحی منطقی، این تیم از روش MTPS برای تکامل هدایت شده استفاده کرد و بیش از 10000 جهش یافته را از نظر ثبات، فعالیت و فعالیت باقیمانده غربال کرد. نامزدهای امیدوار کننده تحت تصفیه و آزمایش های دقیق قرار گرفتند. توصیف دقیق به دنبال، ارزیابی فعالیت، ثبات، خود بستن آداپتور، خود بستن قطعه DNA، و بازده DNA.

محققان طراحی منطقی DNA و جهش را روی جهش‌یافته‌های G1 ترکیب کردند تا انواع استثنایی مناسب برای کاربردهای متنوع ایجاد کنند. این رویکرد جامع منجر به یک لیگاز DNA T4 بسیار کارآمد و قابل اعتماد شده است که برای تقویت تحقیقات زیست شناسی مولکولی و ساخت کتابخانه DNA در NGS آماده است.

شکل 1. تکامل تطبیق پذیری T4 DNA Ligase را نشان می دهد. (الف) طراحی منطقی T4 DNA لیگاز. (ب) غربالگری جهش‌یافته‌های T4 DNA لیگاز مقاوم به حرارت در دمای 45 درجه سانتیگراد، که منجر به شناسایی جهش‌هایی با فعالیت ویژه به طور قابل توجهی افزایش یافته است. (C) غربالگری جهش‌های T4 DNA لیگاز با هدف کاهش تشکیل دایمر آداپتور در طول آماده‌سازی کتابخانه DNA. (د) ارزیابی بازده نگهداری پس از عملیات حرارتی در دمای 42 درجه سانتیگراد به مدت 1 ساعت با استفاده از روش تهیه کتابخانه DNA.
جدول 1. Yeasen همه کاره DNA لیگاز T4 پایدار در برابر حرارت است. آنزیم به مدت 5 روز در دمای 30 درجه سانتیگراد تیمار شد و با روش DNA Lib Prep آنالیز شد.
شکل 2. Yeasen همه کاره DNA لیگاز T4 دارای وفاداری بالاتری است در مقایسه با نوع وحشی (WT) T4 DNA لیگاز که با تشکیل دایمر آداپتور کمتر به دلیل خود بستن (A) و (B) نشان داده شد که با روش DNA Lib Prep تجزیه و تحلیل شد.
شکل 3. Yeasen همه کاره DNA لیگاز T4 کمترین تشکیل دایمر آداپتور را در مقایسه با لیگازهای DNA تجاری T4 از جمله لیگازهای مقاوم به حرارت که با روش DNA Lib Prep آنالیز شده است، نشان می دهد.
این پیشرفت نشان دهنده تعهد Yeasen و Molefuture به نوآوری و برتری در مهندسی آنزیم است.

اطلاعات سفارش

نام گربه# یادداشت ها
آنزیم Hieff™ همه کاره DNA لیگاز T4 (600 U/µL) 12996ES مقاوم به حرارت و وفاداری بالا برای تشخیص ژن تومور
DNA کیت آماده سازی کتابخانه DNA Hieff NGS® 13577ES تومور / روش مکانیکی
Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V2 12194ES روش توموری/آنزیمی
Hieff NGS® OnePot کیت آماده سازی کتابخانه DNA II برای ایلومینا 13490ES پاتژن / آنزیمی / زمان منظم (140 دقیقه)
Hieff NGS® OnePot Flash DNA Library Prep Kit 12316ES پاتژن / آنزیمی / فوق سریع (100 دقیقه)
Hieff NGS® DNA&RNA Library Co-Prep Kit V2 12305ES پاتژن / آنزیم / DNA و RNA Co-Prep
RNA کیت آماده سازی کتابخانه mRNA با حالت دوگانه Hieff NGS® Ultima 12308ES بدون مهره های مغناطیسی الیگو dT، 11 لوله
کیت آماده سازی کتابخانه mRNA با حالت دوگانه Hieff NGS® Ultima 12309ES دانه های مغناطیسی الیگو dT پلاس، 14 لوله
کیت آماده سازی کتابخانه RNA دو حالته Hieff NGS® Ultima 12310ES نسخه پیش میکس، 5 تیوب
کیت آماده سازی کتابخانه Hieff NGS ® EvoMax RNA (نسخه پیش میکس) (اکتینومایسین D رایگان) 12340ES نسخه پیش میکس، (اکتینومایسین D رایگان)
Hieff NGS® MaxUp rRNA Depletion Kit (گیاه) 12254ES گیاه
Hieff NGS® MaxUp Human rRNA Depletion Kit (rRNA & ITS/ETS) 12257ES انسان

لطفاً برای پرس و جو در مورد داده های مقایسه عملکرد بین این آنزیم و سایر لیگازهای DNA T4 معمولی و مقاوم در برابر حرارت پیام بگذارید.

درباره بیوتکنولوژی Molefuture

Molefuture Biotechnology یکی از شرکت های تابعه Yeasen است Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.، متخصص در ارائه راه حل های سفارشی اصلاح آنزیم که توسط فناوری تکامل آنزیم هدایت می شود. استفاده از منابع Yeasen بیوتکنولوژی، Molefuture بر روی شش پلتفرم تکنولوژیکی اصلی فعالیت می‌کند: پلت‌فرم تکامل آنزیم نوآورانه ZymeEditor، یک پلت‌فرم بیان با کارایی بالا چند میزبان، پلت‌فرم توسعه فرآیند تخمیر، پلت‌فرم توسعه فرآیند تصفیه، پلت‌فرم تولید آنزیم فوق‌العاده تمیز، و پلت‌فرم تجزیه و تحلیل آنزیم و کنترل کیفیت. با این شش پلتفرم فناوری، Molefuture می‌تواند مجموعه کاملی از راه‌حل‌های سفارشی‌شده از جمله تکامل مبتنی بر آنزیم، توسعه آنزیم‌های جدید، توسعه فرآیند آنزیمی، و تولید مقیاس‌پذیر در سطح GMP را برای برآورده کردن نیازهای کاربردی آنزیم‌ها در زمینه‌هایی مانند تشخیص آزمایشگاهی، زیست‌پزشکی، زیست‌شناسی مصنوعی، داروسازی بین‌المللی، زیبایی‌شناسی پزشکی ارائه دهد. al.

تحقیق