- RT-qPCR alimentée par une rétroaction inverse hautement efficace transcriptase
La transcriptase inverse (RT) est une enzyme capable de convertir des modèles d'ARN en ADN complémentaire (ADNc). Dans la recherche en biologie moléculaire, la transcriptase inverse est largement utilisée, jouant notamment un rôle indispensable dans le domaine du diagnostic moléculaire. Grâce au processus de transcription inverse, le génome d'ARN des virus peut être converti en ADNc, qui peut ensuite être amplifié et détecté à l'aide de techniques telles que la qPCR. Cette caractéristique permet un diagnostic précis des virus à ARN, tels que le VIH, la grippe A et la grippe B.
Figure 1. Schéma du processus de transcription inverse
La recherche de réactifs de diagnostic moléculaire RT-qPCR plus rapides, plus sensibles et plus faciles à utiliser est devenue la principale tendance actuelle du développement. En tant que l'une des principales matières premières du processus RT-qPCR, la transcriptase inverse doit posséder une vitesse de transcription inverse plus rapide, un rendement de synthèse plus élevé et une meilleure résistance à la chaleur. Afin d'obtenir une transcriptase inverse plus adaptée à la RT-qPCR, Yeasen a développé le HifairMT série de transcriptases inverses par modification génétique basée sur M-MLV, présentant une activité RNase H plus faible, une stabilité thermique plus élevée et une capacité de synthèse continue plus forte.
Figure 2. Schéma de l'action de la transcription inverse
Hifair™Transcriptases inverses
Yeasen propose une variété de HifairMT transcriptase inverse et peut fournir une variété de formes de produits, y compris des enzymes et des prémélanges, que vous pouvez choisir en fonction des besoins réels. Le tableau suivant répertorie les caractéristiques et les applications recommandées des différentes transcriptases inverses Yeasen.
Tableau 1 Les lignes directrices de sélection de Hifair™ Transcriptases inverses| Nom du produit (numéro de produit) ) | Caractéristiques du produit | Application recommandée |
| Stable thermiquement (jusqu'à 65°C), adapté aux modèles complexes | LAMPE RT | |
| Forte compatibilité, vitesse rapide et rendement de synthèse élevé | Une étape RT-PCR/qPCR |
Remarque : Toutes les enzymes mentionnées ci-dessus sont disponibles dans des formulations à haute concentration ou sans glycérol.
Nous mettons maintenant en évidence une transcriptase inverse utilisée dans les réactifs de diagnostic moléculaire RT-qPCR : HifairMT V Reverse Transcriptase. Cette enzyme se distingue par sa forte compatibilité, sa rapidité et son rendement de synthèse élevé, capable de supporter des températures de réaction allant jusqu'à 58°C. Elle est particulièrement adaptée au développement de réactifs de diagnostic moléculaire RT-qPCR.
Démonstration de performance de Hifair™ Transcriptase inverse V
1. Capable de supporter une température de réaction de 58°C, il convient à la transcription inverse de modèles d'ARN complexes.
Figure 3. La transcriptase inverse de HifairMT La transcriptase inverse V et la marque T* ont été incubées respectivement à 55℃ et 58℃ pendant 30 minutes pour détecter l'activité enzymatique résiduelle. Les résultats ont montré que HifairMT La transcriptase inverse V pouvait encore maintenir une activité de 70 % après une incubation à 58 ℃ pendant 30 minutes, ce qui était bien supérieur à celui de la marque T*.
2. Le taux de détection de la RT-qPCR était meilleur que celui des autres marques,et tLa plage de détection était de 1 pg-1 μg.
Figure 4. En utilisant 1 pg-1 μg (7 gradients) d'ARN total de cellules 293T comme modèle, la transcription inverse a été réalisée en utilisant HifairMT Digestion RT-gDNA en une étape SuperMix pour qPCR (Cat#11142), V*, T*. L'ADNc obtenu a été analysé quantitativement par qPCR. Les résultats ont montré que la sensibilité de 11142ES pouvait atteindre 1 pg, ce qui était mieux que celle des autres marques.
La bibliothèque de mutants de la transcriptase inverse de Yeasen
Yeasen continue de promouvoir l'évolution de la transcriptase inverse avec c'est ZymeEditorMT Jusqu'à présent, nous avons sélectionné une variété de mutants de transcriptase inverse avec d'excellentes performances dans différentes applications, qui peuvent répondre pleinement aux besoins de différents groupes de clients dans des domaines d'application diversifiés.Tableau 2. Le Guide de sélection des mutants de la transcriptase inverse de Yeasen
Produits recommandés
| Classification des produits | Nom du produit | Numéro de catalogue |
| Série d'enzymes PCR haute performance | 10726ES | |
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