ई।

ई कोलाई मेजबान कोशिका डीएनए अवशेष जांच किट (2जी)

योग्यता सारांश (श्रेणी संख्या: 4)1308ईएस60)

1. पृष्ठभूमि

इस रिपोर्ट में सारांशित डेटा येसेन बायोटेक्नोलॉजी द्वारा 'ई.कोली होस्ट सेल डीएनए अवशेष डिटेक्शन किट (2G) उत्पाद के लिए किया गया है। सारांश डेटा केवल उपयोगकर्ता के संदर्भ के लिए है, और उपयोगकर्ता को होस्ट सेल अवशेष को सत्यापित करने की आवश्यकता है डीएनए विधि अपने स्वयं के नमूनों का उपयोग करके पुष्टि करती है कि विधि उपयोगकर्ता की आवश्यकताओं को पूरा कर सकती है। इस किट का उपयोग करने वाली सभी प्रयोगशालाओं को निम्नलिखित मापदंडों को सत्यापित करने की सलाह दी जाती है: रैखिकता, सीमा, सटीकता, परिशुद्धता, परिमाणीकरण सीमा, विशिष्टता और मजबूती।

येसेन बायोटेक्नोलॉजी इस किट के लिए विस्तृत योग्यता रिपोर्ट प्रदान कर सकती है। यदि उपयोगकर्ता इस रिपोर्ट का उपयोग करता है, तो केवल उपयुक्तता (जिसमें परिशुद्धता, शुद्धता और विशिष्टता) को सत्यापित किया जाना चाहिए।

2. प्रायोगिक सामग्री और विधियाँ

2.1 ई.कोली होस्ट सेल डीएनए अवशेष जांच किट (2जी), विक्रेता: येसेन, कैट नं.: 41308ईएस60.

2.2 MolPure® चुंबकीय अवशिष्ट डीएनए नमूना तैयारी किट, विक्रेता: येसेन, कैट नं.: 18461ES60.

2.3 ई.कोली डीएनए सामग्री के लिए राष्ट्रीय मानक: कैट. 270027, लॉट नंबर: 201101, सांद्रता: 96.2 μg/mL, भंडारण की स्थिति: -70℃, खरीदा गया: राष्ट्रीय खाद्य एवं औषधि नियंत्रण संस्थान से।

2.4 मूल डेटा: इलेक्ट्रॉनिक संस्करण 'प्रायोगिक रिपोर्ट' में दर्ज किया गया मूल फ़ाइल 'ई.कोली होस्ट सेल डीएनए अवशेष डिटेक्शन किट (2G)' की उपफ़ाइल.

2.5 विधियाँ: प्रयोग के लिए प्रयुक्त सामग्री और संचालन विधियाँ मूलतः येसेन बायोटेक्नोलॉजी द्वारा निर्मित या निर्धारित की गई थीं, जिनका मूल्यांकन और सत्यापन लम्बे समय तक किया गया, किट विकास और निर्माण में आईएसओ 13485 प्रणाली का पालन किया गया।

3. योग्यता सामग्री और परिणाम

3.1 पता लगाने की सीमा

किट की रैखिक सीमा R के साथ 30 fg/μL~300 pg/μL थी²=1, और प्रत्येक सांद्रता परख के लिए CV<15% के साथ प्रवर्धन दक्षता 101.74% थी।

चित्र 1 ई.कोली डीएनए (2जी) क्यूपीसीआर मानक वक्र

3.2 सटीकता

3.2.1 से विचलन ई.कोली डीएनए सामग्री के लिए राष्ट्रीय मानक

किट के प्रत्येक बैच में ई.कोली डीएनए संदर्भ सामग्री को ई.कोली डीएनए सामग्री के लिए राष्ट्रीय मानक का उपयोग करके कैलिब्रेट किया गया था। येसेन डीएनए संदर्भ सामग्री मूल रूप से ई.कोली डीएनए सामग्री के लिए राष्ट्रीय मानक से विचलन से मुक्त थी अंशांकन वक्र, और परख मूल्य का विचलन <5% था।

3.2.2 आरईकोवरी

3.2.2.1 रिक्त नमूना स्पाइकिंग रिकवरी प्रयोग

उच्च और निम्न सांद्रता पर ई.कोली डीएनए मानकों के नमूने: 300 पीजी/μएल, 3 पीजी/μएल, और 30 एफजी/μएल क्रमशः तैयार किए गए, और अवशिष्ट डीएनए नमूना पूर्व उपचार किट के लिए चुंबकीय मनका विधि का उपयोग करके निष्कर्षण के बाद परख की गई (प्रत्येक नमूने के लिए 2 निष्कर्षण प्रतिकृतियां की गईं, और प्रत्येक निष्कर्षण के लिए 3 परख प्रतिकृतियां की गईं), और नमूना पुनर्प्राप्ति और सीवी का विश्लेषण किया गया।

डीएनए नमूनों की विभिन्न सांद्रताओं के लिए, पुनर्प्राप्ति 70% से 130% तक थी, और सभी सी.वी. <20% थे।

नमूना प्रकार	सैद्धांतिक एकाग्रता	1 मतलब निकालें	2 मतलब निकालें	औसत सांद्रता	सीवी	वसूली
रिक्त नमूना	/	/	/	/	/	/
रिकवरी नमूना 1	300 पीजी/μएल	250.56 पीजी/μL	262.11 पीजी/μL	256.33 पीजी/μL	4.41%	85.44%
रिकवरी नमूना 2	3 पीजी/μएल	2.29 पीजी/μL	2.56 पीजी/μL	2.42 पीजी/μL	7.09%	80.77%
रिकवरी नमूना 3	30 एफजी/μएल	33.62 एफजी/μएल	32.61 एफजी/μएल	33.12 एफजी/μएल	14.28%	110.39%

तालिका1 रिक्त नमूना स्पाइकिंग रिकवरी

3.2.2.2 सिम्युलेटेड सैंपल स्पाइकिंग रिकवरी प्रयोग

समान सांद्रता (ई.कोली डीएनए के 3 पीजी/μएल) के नमूने निकाले गए (प्रत्येक नमूने के लिए 2 निष्कर्षण प्रतिकृतियां की गईं और प्रत्येक निष्कर्षण के लिए 3 परख प्रतिकृतियां की गईं) 5 विभिन्न पृष्ठभूमि समाधानों (उच्च प्रोटीन, उच्च न्यूक्लिक एसिड, उच्च और निम्न पीएच, उच्च नमक) के साथ और नमूना पुनर्प्राप्ति और सीवी का विश्लेषण किया गया।

विभिन्न पृष्ठभूमि समाधानों के लिए डीएनए नमूना पुनर्प्राप्ति 70% से 130% तक थी, सभी CVs <20% थे।

नमूना प्रकार	सैद्धांतिक एकाग्रता	1 मतलब निकालें	2 मतलब निकालें	औसत सांद्रता	सीवी	वसूली
मूल नमूना	/	/	/	/	/	/
उच्च प्रोटीन	3 पीजी/μएल	2.25	2.23	2.24	1.09%	74.74%
उच्च परमाणु अम्ल		3.93	3.96	3.95	1.56%	131.52%
उच्च नमक		2.69	2.67	2.68	2.63	89.20%
उच्च पीएच		2.90	3.67	3.29	13.82%	109.55%
कम पीएच		2.77	2.87	2.82	3.41%	94.01%

तालिका2 बुनियादी नमूना स्पाइकिंग रिकवरी

3.3 परिशुद्धता

3.3.1 repeatability

ई.कोली डीएनए मानकों के लिए 3 पीजी/μL की सांद्रता पर 15% से कम सीवी के साथ परख को 10 बार दोहराएं।

repetitions	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	अर्थ	सीवी
पता लगाने का मान (fg/μL)	3.16	2.87	2.97	2.86	2.81	2.97	3.14	3.21	3.14	3.1	3.02	4.78%

तालिका3 पुनरावृत्ति परिणाम

3.3.2 मध्यवर्ती परिशुद्धता

तीन प्रयोगकर्ताओं ने स्वतंत्र रूप से उच्च और निम्न सांद्रता पर ई.कोली डीएनए मानक नमूनों का परीक्षण किया: 300 पीजी/μL, 3 पीजी/μL, और 30 एफजी/μL, और प्रत्येक सांद्रता के लिए तीन प्रतिकृतियां की गईं, और प्राप्त सभी नौ आंकड़ों का CV <15% था।

ऍक्स्प	वास्तविक सांद्रता सैद्धांतिक एकाग्रता	ई.कोली डीएनए (2जी)
		300 पीजी/यूएल	3 पीजी/यूएल	30 एफजी/यूएल
एक्सप 1	निर्धारण 1	295.65	3.22	26.90
	निश्चय 2	287.71	3.24	32.00
	निश्चय 3	300.23	3.17	27.50
एक्सप 2	निश्चय 4	306.06	3.13	37.30
	निश्चय 5	299.76	3.02	32.70
	निश्चय 6	299.63	3.02	34.00
एक्सप 3	निश्चय 7	266.70	3.01	35.90
	निश्चय 8	272.89	3.09	40.70
	निश्चय 9	276.51	3.01	35.20
/	अर्थ	289.46	3.10	33.60
/	सीवी	4.89%	3.02%	13.18%

तालिका4 मध्यवर्ती परिशुद्धता परिणाम

3.4 विशिष्टता

जैविक उत्पादों के उत्पादन में सामान्यतः प्रयुक्त होने वाले कोशिकीय जीनोमिक डीएनए के हस्तक्षेप का मूल्यांकन ई.कोली डीएनए पहचान अभिकर्मकों के साथ हस्तक्षेप के लिए किया गया, तथा हस्तक्षेप समूह नियंत्रण समूह के साथ ओवरलैप हो गया तथा कोई हस्तक्षेप नहीं देखा गया (नीचे दिया गया चित्र, क्रमशः, ई.कोली डीएनए पहचान अभिकर्मकों के साथ HEK293, वेरो, तथा CHO जीनोमिक डीएनए के हस्तक्षेप डेटा को दर्शाता है)।

चित्र 2 हस्तक्षेप प्रयोग के परिणाम

3.5 परिमाणीकरण सीमा

ई.कोली डीएनए का पता 50 fg/μL, 40 fg/μL, 30 fg/μL, 10 fg/μL और 5 fg/μL पर लगाया गया, जिसमें प्रत्येक सांद्रता के लिए 10 प्रतिकृतियाँ थीं। परिणामों से पता चला कि 30 fg/μL और उससे अधिक की सांद्रता पर CV <20% था। यानी, ई.कोली होस्ट सेल डीएनए अवशेष पहचान किट (2G) की मात्रा निर्धारण की सीमा 30 fg/μL थी।

repetitions परीक्षण आइटम	ई.कोली डीएनए (2G) (fg/μL)
	मात्रा	पुनर्गणना अनुपात
1	29.43	98.09%
2	29.51	98.35%
3	32.04	106.79%
4	26.07	86.89%
5	34.06	113.53%
6	33.54	111.79%
7	26.95	89.82%
8	27.38	91.26%
9	27.04	90.13%
10	26.10	87.02%
अर्थ	29.21	/
सीवी	10.40%	/

चित्र 3 30fg/μL ई.कोली डीएनए (2G) qPCR परीक्षण परिणाम

3.6 मजबूती

इस किट का परीक्षण किया जा चुका है और यह निम्नलिखित उपकरणों के लिए उपयुक्त है, लेकिन इन्हीं तक सीमित नहीं है:

विक्रेता	उपकरण मॉडल	प्रवर्धन क्षमताएं	आर2	परिमाणीकरण की सीमा (fg/μL)	सीवी
थर्मामीटरों	एबीआई 7500	101.74%	1	30	13.30%
थर्मामीटरों	एबीआई क्वांटस्टूडियो5	100.46%	1	30	12.40%
जैव रेड	सीएफएक्स96	99.20%	0.999	30	13.76%
शंघाई होंगशी	स्लैन	100.40%	0.999	30	11.67%

तालिका5 उपकरण उपयुक्तता परीक्षण परिणाम

3.7 स्थिरता

3.7.1 हिमीकरण-विगलन स्थिरता

ई.कोली होस्ट सेल डीएनए अवशेष जांच किट (2जी) का परीक्षण 10 बार बार-बार ठंडा करके और पिघलाकर किया गया, और किट के प्रदर्शन पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा।

परीक्षण संकेतक जमने-पिघलने का समय	पैरामीटर	T0 समय	10 बार जमाएं-पिघलाएं
मानक वक्र पैरामीटर	प्रवर्धन क्षमताएं	98.23%	100.20%
	आर2	1	0.999
परिमाणीकरण की सीमा (30 fg/μL)	सीवी	15.07%	9.66%

तालिका6 हिमीकरण-पिघलना स्थिरता परिणाम विश्लेषण

3.7.2 त्वरित स्थिरता

इ.कोली होस्ट सेल डीएनए अवशेष जांच किट (2जी) को क्रमशः 30 दिनों के लिए 2~8°C और 14 दिनों के लिए 37°C पर संग्रहीत किया गया। किट के प्रदर्शन पर कोई असर नहीं पड़ा।

परीक्षण संकेतक त्वरण तापमान और समय	पैरामीटर	प्रयोग 1		प्रयोग 2
		T0 समय	2~8℃ 30 दिन	T0 समय	37℃ 14 दिन
मानक वक्र पैरामीटर	प्रवर्धन क्षमताएं	97.77%	99.81%	98.39%	98.65%
	आर2	1	1	1	1
परिमाणीकरण की सीमा (30 fg/μL)	सीवी	11.04%	13.79%	9.55%	14.55%

तालिका7 त्वरित स्थिरता परिणाम विश्लेषण

4. 4.संदर्भ

4.1 चीनी फार्माकोपिया आयोग (ChPC)। पीपुल्स रिपब्लिक ऑफ चाइना का फार्माकोपिया (वॉल्यूम 2) [एस]। बीजिंग: चाइना मेडिकल साइंस एंड टेक्नोलॉजी प्रेस, पृ.542-543, 2020।

4.2 एनएमपीए, 2007: जैविक उत्पादों के गुणवत्ता नियंत्रण के लिए विश्लेषणात्मक विधि सत्यापन की तकनीकी समीक्षा के लिए सामान्य सिद्धांत।

4.3 आईसीएच (2022)《विश्लेषणात्मक विधि सत्यापन Q2》, मसौदा संस्करण।

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