न्यूक्लिक एसिड संदूषण लंबे समय से आणविक निदान तकनीकों की उन्नति में एक महत्वपूर्ण बाधा रहा है। जैसे-जैसे अधिक संवेदनशील निदान विधियाँ विकसित होती हैं, एंजाइम और प्रोटीन की उच्च शुद्धता की माँग बढ़ती जाती है। प्रोटीन उत्पादन में प्रमुख चुनौतियों में से एक न्यूक्लिक एसिड संदूषण को प्रभावी ढंग से हटाना है। न्यूक्लिक एसिड की उपस्थिति प्रोटीन के कार्य और गतिविधि को प्रभावित कर सकती है, जिससे संभावित रूप से गैर-विशिष्ट बंधन, एंजाइम गतिविधि अवरोध या बढ़ी हुई पृष्ठभूमि संकेत जैसी समस्याएँ हो सकती हैं, जो अंततः निदान परिणामों की सटीकता को प्रभावित करती हैं।
परिणामस्वरूप, प्रोटीन उत्पादन के दौरान न्यूक्लिक एसिड को हटाने के लिए कुशल प्रक्रियाएं विकसित करना महत्वपूर्ण और आवश्यक दोनों है।
वर्षों के तकनीकी शोध के बाद, येसेन बायोटेक्नोलॉजी ने कुशल न्यूक्लिक एसिड निष्कासन के लिए एक बंद एकीकृत विधि विकसित की है। यह प्रक्रिया सेल पारगम्यता को अनुकूलित करती है, आयन-केशन एक्सचेंज कॉलम शुद्धिकरण, माइक्रोफिल्ट्रेशन और अल्ट्राफिल्ट्रेशन चरणों को शामिल करती है, और अवशेषों की पूर्ण-प्रक्रिया निगरानी शामिल करती है। यह एकीकृत दृष्टिकोण न्यूक्लिक एसिड संदूषण को अधिकतम हटाने को सुनिश्चित करता है, जिससे अल्ट्रा-लो डीएनए अवशेषों के साथ आणविक एंजाइमों का शुद्धिकरण संभव होता है।
प्रोटीन उत्पादन में डीएनए संदूषण को रोकने के लिए व्यापक रणनीतियाँ
डीएनए संदूषण जैविक उत्पादों के उत्पादन में एक व्यापक चुनौती है, जो उनकी शुद्धता, गुणवत्ता और प्रयोगात्मक परिणामों की सटीकता को महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित करता है। प्रोटीन की तैयारी में डीएनए की उपस्थिति गलत प्रयोगात्मक निष्कर्षों, डेटा को तिरछा करने और संभावित रूप से गलत सकारात्मकता की संभावना को बढ़ा सकती है। प्रोटीन उत्पादन में शामिल शोधकर्ताओं और निर्माताओं के लिए, डीएनए संदूषण को रोकने और कम करने के लिए प्रभावी रणनीतियों को लागू करना आवश्यक है। यह लेख डीएनए संदूषण, विशेष रूप से वायुजनित संदूषण से बचने के तरीकों की खोज करता है, और प्रोटीन नमूनों से डीएनए को प्रभावी ढंग से हटाने के तरीकों की रूपरेखा तैयार करता है।
मैं। वायुजनित डीएनए संदूषण को रोकना
वायुजनित डीएनए संदूषण प्रोटीन उत्पादन में एक गंभीर चिंता का विषय बना हुआ है, खास तौर पर ऐसे वातावरण में जहां सूक्ष्मजीव और कण नियंत्रण आवश्यक है। वायुजनित डीएनए संदूषण के जोखिम को कम करने के लिए, निम्नलिखित रणनीतियों को अपनाया जाना चाहिए:
| 1. स्वच्छ कक्ष वातावरण स्थापित करें क्लीनरूम में प्रोटीन उत्पादन का संचालन, हवा में मौजूद कणों और सूक्ष्म जीवों को कम करने के लिए आवश्यक नियंत्रित वातावरण प्रदान करता है, जो डीएनए संदूषण का कारण बन सकते हैं। संदूषक मुक्त वातावरण सुनिश्चित करने के लिए क्लीनरूम को विशिष्ट स्वच्छता मानकों को पूरा करना चाहिए। | 2. HEPA निस्पंदन सिस्टम लागू करें HEPA फ़िल्टर से लैस वायु शोधन प्रणालियाँ हवा में मौजूद धूल, सूक्ष्मजीवी संदूषक और DNA अंशों सहित कणों को रोकने के लिए आवश्यक हैं। ये फ़िल्टर पूरे उत्पादन संयंत्र में स्वच्छ हवा बनाए रखने में मदद करते हैं। |
| 3. सकारात्मक दबाव का माहौल बनाए रखें सकारात्मक दबाव वाले वातावरण नियंत्रित स्थान के बाहर से दूषित हवा के प्रवेश को रोकते हैं। बाहरी वातावरण की तुलना में उत्पादन क्षेत्र के अंदर उच्च वायु दबाव बनाए रखना सुनिश्चित करता है कि किसी भी रिसाव से हवा बाहर निकल जाए, न कि अंदर घुस जाए। | 4. नियमित सफाई और कीटाणुशोधन प्रोटोकॉल उचित कीटाणुनाशकों - जैसे कि न्यूक्लिअस या क्लोरीन-आधारित क्लीनर - का उपयोग करके उत्पादन क्षेत्र की नियमित सफाई से हवा में मौजूद डीएनए को नष्ट किया जा सकता है, जिससे संदूषण का जोखिम कम हो सकता है। यह विशेष रूप से उच्च-स्पर्श वाले क्षेत्रों और प्रोटीन उत्पादन उपकरणों के निकट सतहों पर महत्वपूर्ण है। |
| 5. कार्मिकों की आवाजाही सीमित करें क्लीनरूम के वातावरण में कर्मियों की आवाजाही को कम करने से मानवीय संपर्क के माध्यम से संदूषकों के प्रवेश की संभावना कम हो जाती है। नामित कर्मियों को जोखिम को नियंत्रित करने के लिए प्रवेश और निकास के संबंध में सख्त प्रोटोकॉल का पालन करना चाहिए। | 6. वायु गुणवत्ता निगरानी क्लीनरूम के भीतर हवा की गुणवत्ता की निगरानी करना, जिसमें माइक्रोबियल काउंट और पार्टिकुलेट लेवल शामिल हैं, उत्पादन मानकों के साथ निरंतर अनुपालन सुनिश्चित करने के लिए आवश्यक है। पर्यावरण की स्वच्छता का आकलन करने के लिए एयर सैंपलर और पार्टिकल काउंटर का इस्तेमाल किया जा सकता है। |
| 7. एकल-उपयोग सामग्री अपनाएँ प्रोटीन उत्पादन के लिए एकल-उपयोग उपभोग्य सामग्रियों का उपयोग करने से क्रॉस-संदूषण का जोखिम काफी कम हो जाता है, जो कि पुन: प्रयोज्य उपकरणों के साथ आम बात है। | 8. बंद उत्पादन प्रक्रियाएँ बायोरिएक्टर या सीलबंद कक्ष जैसे बंद सिस्टम खुले वातावरण के संपर्क को कम करते हैं। इससे हवा से डीएनए संदूषण का जोखिम कम हो जाता है, खास तौर पर किण्वन और प्रोटीन शुद्धिकरण जैसे महत्वपूर्ण चरणों के दौरान। |
| 9. एरोसोल उत्पादन से बचें प्रोटीन उत्पादन के दौरान एरोसोल का निर्माण हवा में मौजूद डीएनए के प्रसार को सुविधाजनक बना सकता है। सावधानी बरतने के उपाय, जैसे कि तरल पदार्थों को सावधानी से संभालना और बिना हिलाए-डुलाए उनका स्थानांतरण, एरोसोल के निर्माण को कम कर सकते हैं। | 10. न्यूक्लिऐसेस का उपयोग उपयोग से पहले और बाद में सतहों और उपकरणों को न्यूक्लिऐसेस से उपचारित करने से अवशिष्ट डीएनए को नष्ट किया जा सकता है, जो कोशिका अपघटन या निस्पंदन जैसी प्रक्रियाओं के बाद बच सकता है। |
| 11। पर्यावरण अलगाव को लागू करें प्रोटीन शुद्धिकरण और निर्माण जैसे उच्च जोखिम वाले कार्यों के लिए, आइसोलेटर या ग्लव बॉक्स का उपयोग सुरक्षा की एक अतिरिक्त परत प्रदान करता है, जो प्रक्रिया को वायुजनित प्रदूषकों से अलग रखता है। | 12. समर्पित उपकरण और औजार प्रोटीन उत्पादन के लिए विशेष रूप से उपयोग किए जाने वाले समर्पित उपकरणों का उपयोग करने से उन औजारों और यंत्रों से होने वाले क्रॉस-संदूषण को रोका जा सकता है, जो अन्य प्रक्रियाओं में डीएनए या न्यूक्लिक एसिड के संपर्क में आ सकते हैं। |
| 13. आपातकालीन संदूषण प्रतिक्रिया योजना आकस्मिक डीएनए संदूषण को प्रबंधित करने के लिए एक प्रभावी प्रतिक्रिया योजना लागू की जानी चाहिए। प्रोटोकॉल में प्रसार को रोकने और संदूषण के प्रभाव को कम करने के लिए त्वरित पहचान, रोकथाम और उपचारात्मक कदम शामिल होने चाहिए। | 14. कर्मचारी प्रशिक्षण डीएनए संदूषण के जोखिम और उचित हैंडलिंग तकनीकों के महत्व पर कर्मियों को निरंतर प्रशिक्षण देने से सर्वोत्तम प्रथाओं के कार्यान्वयन और संदूषण नियंत्रण प्रोटोकॉल के पालन को सुनिश्चित किया जा सकता है। |
द्वितीय. प्रोटीन से डीएनए संदूषण हटाना
प्रोटीन शुद्धिकरण के दौरान, प्रोटीन की गुणवत्ता बनाए रखने के लिए किसी भी अवशिष्ट डीएनए संदूषण को हटाना महत्वपूर्ण है। प्रोटीन नमूनों से डीएनए को हटाने के लिए आमतौर पर कई तकनीकों का उपयोग किया जाता है:
| 1. हल्के कोशिका लिसिस विधियाँ गैर-विनाशकारी लाइसिस बफर्स प्रोटीन को मुक्त करने की अनुमति देते हैं जबकि डीएनए के टूटने को कम करते हैं। यह दृष्टिकोण डीएनए के अंधाधुंध विनाश से बचाता है, जिससे प्रोटीन के नमूने के दूषित होने की संभावना कम हो जाती है। | 2. अनुकूलित लाइसिस स्थितियां कोशिका अपघटन के दौरान पीएच और आयनिक शक्ति जैसे कारकों को समायोजित करने से डीएनए को घुलनशील होने से रोका जा सकता है, जिससे परिणामी नमूने में संदूषक डीएनए की मात्रा कम हो सकती है। |
| 3. न्यूक्लिऐस अवरोधन प्रोटीएज़ अवरोधकों, जैसे कि फेनिलमेथिलसल्फोनिल फ्लोराइड (पीएमएसएफ) के प्रयोग से कोशिकाओं के भीतर न्यूक्लिऐज़ की गतिविधि को रोका जा सकता है, जिससे विखंडन के दौरान डीएनए का अधिक नियंत्रित और चयनात्मक क्षरण संभव हो सकता है। | 4. आसमाटिक शॉक ऑस्मोटिक शॉक कोशिकाओं को ऑस्मोटिक दबाव में अचानक अंतर वाले घोल में रखकर उन्हें नष्ट करने की एक सौम्य विधि है। इससे डीएनए रिलीज को कम करने में मदद मिल सकती है, जिससे स्वच्छ प्रोटीन तैयारियाँ हो सकती हैं। |
| 5. एंजाइमेटिक लिसिस जीवाणु कोशिका भित्ति को नष्ट करने के लिए लाइसोजाइम जैसे एंजाइम का प्रयोग करना, एक नियंत्रित विधि है, जो केवल कोशिका झिल्ली को लक्ष्य बनाती है, जिससे कोशिकीय सामग्री के मुक्त होने के दौरान डीएनए संदूषण का जोखिम कम हो जाता है। | 6. पोस्ट-लिसिस उपचार एक बार कोशिकाएं विघटित हो जाएं, तो नमूने को तुरंत ठंडा करने से न्यूक्लिऐस गतिविधि को कम करने में मदद मिल सकती है, अन्यथा इससे विलयन में डीएनए का और अधिक क्षरण हो सकता है। |
तृतीय. न्यूक्लिक एसिड हटाने के उन्नत तरीके
डाउनस्ट्रीम प्रसंस्करण में क्रोमैटोग्राफी, या आत्मीयता-आधारित विधियों का उपयोग करके प्रोटीन तैयारियों से ट्रेस डीएनए संदूषकों को हटाया जा सकता है। प्रोटीन नमूनों से डीएनए संदूषण को हटाने के लिए एनियन एक्सचेंज और केशन एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी दो अच्छी तरह से स्थापित तकनीकें हैं। दोनों ही डीएनए को चुनिंदा रूप से हटाने के लिए न्यूक्लिक एसिड और चार्ज सतहों के बीच की बातचीत पर निर्भर करते हैं।
| 1. आयन एक्सचेंज कॉलम आयन एक्सचेंज कॉलम नकारात्मक रूप से चार्ज किए गए न्यूक्लिक एसिड को आकर्षित करने और बांधने के लिए सकारात्मक रूप से चार्ज किए गए स्थिर चरणों का उपयोग करते हैं। एल्यूशन बफर की नमक सांद्रता को समायोजित करके, न्यूक्लिक एसिड को प्रोटीन की तैयारी से चुनिंदा रूप से हटाया जा सकता है। | 2. धनायन विनिमय स्तंभ विशिष्ट परिस्थितियों में, न्यूक्लिक एसिड को हटाने के लिए धनायन विनिमय स्तंभों का भी उपयोग किया जा सकता है। नमक की सांद्रता बढ़ाकर या pH को संशोधित करके, न्यूक्लिक एसिड को स्तंभ से प्रतिस्पर्धी रूप से निकाला जा सकता है। |
| 3. अल्ट्राफिल्ट्रेशन अल्ट्राफिल्ट्रेशन में न्यूक्लिक एसिड से प्रोटीन को अलग करने के लिए चयनात्मक झिल्ली निस्पंदन का उपयोग किया जाता है, जिससे यह सुनिश्चित होता है कि शुद्धिकरण चरणों के दौरान डीएनए को प्रभावी ढंग से हटा दिया जाए। | 4. जेल निस्पंदन क्रोमैटोग्राफी जेल निस्पंदन एक आकार-बहिष्करण क्रोमैटोग्राफी तकनीक है जो अणुओं को उनके आकार के आधार पर अलग करती है। न्यूक्लिक एसिड, प्रोटीन से बड़े होने के कारण, प्रभावी रूप से अलग हो जाते हैं, जिससे शुद्ध प्रोटीन नमूने पीछे रह जाते हैं। |
चतुर्थ. कार्मिकों से डीएनए संदूषण को कम करना
प्रोटीन उत्पादन प्रक्रियाओं में डीएनए संदूषण की संभावित शुरूआत में कार्मिक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। निम्नलिखित उपाय इस जोखिम को कम करने में मदद कर सकते हैं:
| 1. व्यापक कार्मिक प्रशिक्षण सभी कर्मचारियों को डीएनए संदूषण नियंत्रण के महत्व और संदूषण को रोकने के सर्वोत्तम तरीकों पर प्रशिक्षण दिया जाना चाहिए। | 2. व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण (पीपीई) मानव संपर्क से डीएनए संदूषण के जोखिम को कम करने के लिए कर्मचारियों को उपयुक्त पीपीई (जैसे लैब कोट, दस्ताने, मास्क और चश्मा) पहनना चाहिए। |
| 3. हाथ स्वच्छता प्रोटोकॉल हाथों से सतहों और उपकरणों तक डीएनए के स्थानांतरण को कम करने के लिए बार-बार हाथ धोना और अल्कोहल-आधारित सैनिटाइज़र का उपयोग आवश्यक है। | 4. वस्त्र और जूते में परिवर्तन काम के लिए विशेष कपड़े और जूते पहनने से यह सुनिश्चित होता है कि उत्पादन क्षेत्र के बाहर से डीएनए संदूषण न आए। |
| 5. सख्त कार्य व्यवहार विनियम लार, भोजन के कणों या बूंदों के माध्यम से डीएनए के प्रवेश को रोकने के लिए कर्मियों को प्रोटीन उत्पादन क्षेत्र में खाने, पीने या बात करने से बचना चाहिए। | 6. पर्यावरण निगरानी यह सुनिश्चित करने के लिए कि उत्पादन क्षेत्र में डीएनए संदूषण मौजूद नहीं है, वायु, सतह और उपकरण जांच सहित नियमित पर्यावरणीय निगरानी की जानी चाहिए। |
निष्कर्ष
उच्च गुणवत्ता वाले, अदूषित प्रोटीन का उत्पादन सुनिश्चित करने के लिए, डीएनए संदूषण नियंत्रण के लिए एक व्यापक दृष्टिकोण आवश्यक है।कड़े पर्यावरण नियंत्रणों को अपनाकर, अनुकूलित शुद्धिकरण विधियों को अपनाकर, तथा कार्मिक प्रशिक्षण पर जोर देकर, डीएनए संदूषण से जुड़े जोखिमों को काफी हद तक कम किया जा सकता है। ये अभ्यास अनुसंधान और औद्योगिक अनुप्रयोगों में प्रोटीन उत्पादों की अखंडता और विश्वसनीयता को बनाए रखने के लिए महत्वपूर्ण हैं, जो अंततः जैविक उत्पाद विकास की उन्नति में योगदान करते हैं।
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उत्पाद लाभ
- यूसीएफ.एमई का अति-निम्न अवशिष्ट - ई. कोलाई जीनोमिक डीएनए अवशेष <0.1 प्रतियां/यू;
- कम न्यूक्लिऐस अवशेष - कोई अवशिष्ट एक्सोन्यूक्लिऐस, निकिंग एंजाइम या आरएनेज़ नहीं;
- मजबूत पाचन क्षमता - 0.05 यू/टी 105 प्रतियां/टी डीयू-डीएनए उत्पादों को पचा सकता है;
- अच्छी तापलनीयता - 10 मिनट के लिए 50°C, 5 मिनट के लिए 55°C, या 5 मिनट के लिए 95°C की किसी भी स्थिति में पूर्ण निष्क्रियता;
- RT-qPCR प्रतिक्रिया प्रणालियों के साथ संगत - उच्च इनपुट स्तरों (2U/20μL प्रतिक्रिया प्रणाली) पर भी पहचान प्रणाली पर कोई प्रभाव नहीं।
（1）कम अवशिष्ट न्यूक्लिऐसेस: कोई अवशिष्ट एक्सोन्यूक्लिऐसेस, निकिंग एंजाइम या आरएनेज़ नहीं
चित्र 1. न्यूक्लिऐस अवशेष परीक्षण के परिणाम
（2）ई. कोली जीनोमिक डीएनए अवशेष < 0.1 प्रतियां/ यू
चित्र 2. ई.कोली जीनोमिक डीएनए अवशेष परीक्षण के परिणाम
आदेश की जानकारी
| बिल्ली: | नाम | आवेदन |
| 14321 | Hieff UNICON UCF. ME™ एडवांस्ड हॉटस्टार्ट टैक डीएनए पोलीमरेज़ | पीसीआर |
| 14608 | हाईफ़ेयर UCF.ME™ V रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस (200 U/μL) | आरटी-पीसीआर |
| UCF.ME™ यूरेसिल डीएनए ग्लाइकोसिलेस (UDG/UNG), ऊष्मा-अस्थिर, 1 U/μL | आरटी-पीसीआर | |
| यूसीएफ.ME™ म्यूरिन RNase अवरोधक(40 U/µL) | आरटी-पीसीआर | |
| हाईफ़ेयर™ V2 मल्टीप्लेक्स वन स्टेप RT-qPCR जांच किट (UDG प्लस, GC एन्हांसर प्लस) | आरटी-पीसीआर | |
| Hieff NGS™ ds-cDNA संश्लेषण किट | एमएनजीएस | |
| 13501 | Hieff NGS™ ds-cDNA संश्लेषण किट (gDNA डाइजेस्टर प्लस) | एमएनजीएस |
| Hieff NGS™ वनपॉट फ्लैश डीएनए लाइब्रेरी तैयारी किट | एमएनजीएस | |
| 13490 | इल्युमिना के लिए Hieff NGS™ OnePot ll DNA लाइब्रेरी तैयारी किट | एमएनजीएस |
| 12946 | 10x Hieff NGS™ 1st cDNA संश्लेषण किट | रोगज़नक़ के लिए tNGS |
| 4x Hieff™ मल्टीप्लेक्स RT-PCR किट | रोगज़नक़ के लिए tNGS | |
| 4x Hieff™ मल्टीप्लेक्स पीसीआर मास्टर मिक्स | रोगज़नक़ के लिए एनजीएस | |
| 12977 | 4x Hieff™ मल्टीप्लेक्स पीसीआर मास्टर मिक्स 2.0 | रोगज़नक़ के लिए एनजीएस |