PEI lineare 40000, un reagente di trasfezione più efficiente
In genere, la trasfezione è il processo di introduzione artificiale di acidi nucleici (DNA o RNA) nelle cellule eucariotiche. I reagenti di trasfezione, come suggerisce il nome, sono una serie di reagenti coinvolti nella trasfezione. Durante il processo di trasfezione, siamo spesso preoccupati dalla bassa efficienza di trasfezione, dal ristretto intervallo di applicazione, dalla forte tossicità, dal funzionamento macchinoso e dal prezzo elevato dei reagenti di trasfezione. Quindi, esiste un reagente di trasfezione che può risolvere questi problemi? Sì, il PEI lineare è la scelta migliore per risolvere questi problemi.
Nota: Yeasen ha lanciato un romanzo PEI Reagente di trasfezione Hieff Trans™ Ultra PEI-AAV per la produzione su larga scala di vari vettori virali e l'espressione transitoria di proteine adatte a sistemi aderenti e in sospensione.
1. Quali sono i tipi di trasfezione cellulare?
2. Che cosa è il PEI lineare MW 40000?
3. Come funziona il PEI lineare MW 40000?
4. Quali sono le caratteristiche del PEI MW 40000?
5. Altri reagenti di trasfezione di Yeasen
6. Considera la lettura
1. Quali sono i tipi di trasfezione cellulare?
Prima di introdurre il PEI lineare MW 40000, cerchiamo di capire brevemente i tipi di trasfezione cellulare. La trasfezione cellulare è di grande importanza per la ricerca genetica, la ricerca proteica e la ricerca citologica, che si riferisce al processo di introduzione artificiale di acidi nucleici (DNA o RNA) nelle cellule utilizzando mezzi di infezione non virale. Lo scopo principale della trasfezione è studiare la funzione dei geni o dei prodotti genici, migliorando o inibendo l'espressione genica specifica nelle cellule o per produrre proteine ricombinanti. L'introduzione di acido nucleico esogeno cambierà le caratteristiche delle cellule, in modo da raggiungere lo scopo della trasfezione, che è utile per lo studio della regolazione genica e dell'espressione proteica, nonché per la sintesi e la produzione di proteine.
Le transfezioni cellulari possono essere divise tramite metodi chimici, biologici e fisici, o il tempo di residenza di un gene estraneo nella cellula. Nella transfezione transitoria, l'acido nucleico introdotto può esistere nella cellula per un tempo limitato senza replicarsi, mentre con la transfezione stabile, l'acido nucleico introdotto è integrato nel genoma ospite e può essere espresso nella progenie della cellula transfettata.
Con così tanti metodi diversi di trasfezione cellulare, come scegliere il metodo giusto?
Nessun singolo metodo di trasfezione è adatto a tutti i tipi di cellule e soddisfa tutte le esigenze sperimentali. Il metodo di trasfezione ottimale dovrebbe essere selezionato in base ai requisiti del tipo di cellula e alle condizioni sperimentali.
Attualmente, i reagenti di trasfezione chimica sono ancora i metodi di trasfezione cellulare più diffusi, grazie alla loro semplicità d'uso e alla compatibilità con diverse linee cellulari.
2. Che cosa è il PEI lineare MW 40000?
Polietilenimmina lineare (PEI) MW40000 (lisi rapida) è un reagente di trasfezione transitorio basato su polietilenimmina con un peso molecolare di 40.000 (PEI 40000). PEI 40000 è un polimero cationico altamente carico che può facilmente legare molecole di acido nucleico caricate negativamente per formare complessi, introducendo così complessi nelle cellule.
Rispetto al reagente di transfezione PEI 25000, PEI 40000 è facile da sciogliere e può essere direttamente disciolto in acqua. Inoltre, PEI 25000 contiene residui di propionile dal 4 all'11%, che impediscono alla struttura portante del polimero di legarsi al DNA.Ma PEI 40000 è una costruzione di capannone completa, quindi le sue prestazioni sono costantemente efficienti.
3. Come funziona il PEI lineare MW 40000?
La polietilenimmina (PEI) è un eccellente vettore non virale multifunzionale con buona adesione cellulare e può essere utilizzato per trasfettare le cellule indipendentemente dagli inibitori lisosomiali. PEI e DNA sono legati da forze elettrostatiche, causando il collasso del DNA dalla struttura a spirale libera in complessi di particelle sferiche. I complessi PEI-DNA sono solitamente caricati positivamente per interagire elettrostaticamente con la membrana cellulare esterna e assorbiti tramite endocitosi. I complessi PEI-DNA endocitati vengono quindi catturati dagli endosomi per il trasferimento ai lisosomi per la degradazione. La pressione ionica interna sempre crescente provoca il rigonfiamento e la rottura dell'endosoma, rilasciando DNA estraneo nel citoplasma. Questo meccanismo di trasfezione è chiamato effetto "spugna protonica".
Studi hanno dimostrato che le molecole PEI possono rivestire la superficie dei complessi PEI-DNA per proteggere sufficientemente il DNA dalla degradazione da parte delle nucleasi nel citoplasma, assicurando il transito del DNA estraneo dal citoplasma al nucleo. Inoltre, le molecole PEI possono inserirsi nelle membrane fosfolipidiche e creare canali stabili per trasferire il DNA nel nucleo cellulare. Le molecole PEI non entrano nel nucleo cellulare e svolgono un ruolo importante come vettore del DNA.
L'espressione genica può essere rilevata 1-4 giorni dopo che il gene esogeno è stato introdotto nelle cellule dei mammiferi. Questa espressione è dovuta al fatto che una parte del DNA introdotto viene trascritta in mRNA dopo essere entrata nel nucleo, e poi tradotta nel citoplasma. Poiché questo metodo è relativamente semplice e facile da implementare, selezionando un buon vettore di espressione e un buon metodo di trasfezione, la quantità di espressione proteica può raggiungere un livello più elevato. I reagenti di trasfezione PEI sono stati ampiamente utilizzati nella ricerca scientifica e nelle applicazioni industriali come metodo di trasfezione comune per studiare la struttura e la funzione delle proteine.
4. Quali sono le caratteristiche del PEI MW 40000?
Come reagente di transfezione transitorio con bassa citotossicità, PEI 40000 ha un'elevata efficienza di transfezione e un'elevata efficienza di espressione genica in cellule come HEK293 e CHO. Il reagente di transfezione lineare PEI è stato convalidato per un'ampia gamma di linee cellulari tra cui HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, HepG2 e cellule Hela. L'efficienza di transfezione è pari all'80%~90%. Continua a visualizzare i dati sulle prestazioni:
- Elevata efficienza di trasfezione, adatta per cellule aderenti e in sospensione
È adatto a una varietà di linee cellulari tra cui HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2 e cellule Hela, ecc.; l'efficienza di trasfezione è pari all'80%~90%.
Tabella 1.Elenco delle linee cellulari convalidate
| Cellule aderenti (1 μg di DNA) | Efficienza | Cellule in sospensione (2 μg di DNA) | Efficienza |
| HEK-293 | 80%-90% | CHO-K1 | 85% |
| Sf9 | 80%-90% | Modello HEK-293T | 70%-80% |
| Epatite G2 | 80%-90% | Il THP-1 | 70%-80% |
| Ciao | 80%-90% |
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Figura 2. Plasmide GFP transfettato con PEI 40000 nelle cellule aderenti HEK-293, l'efficienza di transfettazione ha raggiunto il 90% dopo 72 ore (sinistra); Il plasmide GFP transfettato PEI 40000 nelle cellule in sospensione CHO-K1 e l'efficienza di transfettazione ha raggiunto l'80% dopo 72 ore (a destra)
- Bassa tossicità
Garantisce la vitalità cellulare e migliora l'efficienza della trasfezione.
Figura 3. Il PEI 40000 fornito da YEASEN ha una citotossicità molto più bassa rispetto al poli** concorrente
- L'efficienza di trasfezione è superiore a quella del PEI 25000, che può sostituire completamente il PEI 25000
PEI 25000 contiene residui di propionile dal 4 all'11%, impedendo alla struttura portante del polimero di legarsi al DNA. Rispetto a PEI 25000, PEI 40000 è una costruzione a capannone completo, quindi le sue prestazioni sono costantemente efficienti.
Figura 4. Le cellule HEK-293 sono state transfettate transitoriamente con il plasmide GFP utilizzando i reagenti di transfettazione PEI 25000 e PEI 40000 e la fluorescenza è stata osservata dopo 72 ore. Risultati sperimentali: l'efficienza di trasfezione del PEI 40000 è migliore di quella del PEI25000.
- Configurazione semplice e tempi di trasfezione brevi
Questo prodotto è di tipo istantaneo, che può essere sciolto direttamente in acqua senza regolazione del pH. E compatibile con siero e antibiotici, non c'è bisogno di cambiare il mezzo.
- Conveniente, adatto per la trasfezione transitoria su larga scala
Rispetto ai prodotti importati, il reagente di trasfezione Yeasen PEI 40000 ha un prezzo basso e lotti stabili.
5. Altri reagenti di trasfezione di Yeasen
Yeasen ha una linea completa di reagenti di trasfezione, inclusi gli attuali metodi di trasfezione chimica mainstream, reagenti liposomiali cationici e reagenti polimerici cationici, che possono essere applicati a una varietà di scenari di utilizzo. In questa sezione, elenchiamo tutti i reagenti di trasfezione di Yeasen e le loro applicazioni nella seguente tabella, puoi scegliere quello migliore che è adatto al tuo esperimento.
Tabella 2.Elenco dei reagenti di trasfezione Yeasen
| Gatto# | Nome del prodotto | Tipo di acido nucleico | Tipo di cellula |
| 40823ES | Il DNA | Aderente E Celle di sospensione | |
| 40816ES | Il DNA | Aderente E Celle di sospensione | |
| 40820ES | Il DNA | Aderente E Celle di sospensione | |
| 40821ES | Il DNA | Aderente E Celle di sospensione | |
| 40802ES | DNA (<10kb), shRNA | UNcellule aderenti | |
| 40805ES | Sospensione Hieff Trans™ senza celle Reagente di trasfezione liposomiale (Informarsi) | DNA (<10kb) | Celle di sospensione (per cellule del sangue sospese o immunitarie cellule, l'efficienza di trasfezione dei reagenti chimici attuali è non alto. Elettroporazione o metodo virale sono consigliati.) |
| 40806ES | siRNA,microRNA,pre-miRNA, miRNA imitatore, antimiRNA | Cellule aderenti e in sospensione |
6. Considera la lettura
Reagente di trasfezione – Hieff Trans™ e PEI
Guida alla selezione dei prodotti reagenti per la trasfezione cellulare in vitro
Riferimento:
[1] Lu, Y., Yao, J., & Zhou, J. (nd). Formazione e comportamento di aggregazione di complessi di polietilenimmina-DNA. Dipartimento di Farmaceutica, Nanchino 210009.
[2] Sabin, J., et al. (2022). Nuove intuizioni sul meccanismo di trasfezione della polietilenimmina e le loro implicazioni sulla terapia genica e sui vaccini a DNA. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 210, 112219.
[3] Transfezione transitoria di cellule di mammifero con polietilenimmina (PEI). Longo PA, Kavran JM, Kim MS, Leahy DJ