鎖特異的RNAライブラリ調製における画期的な進歩

RNA ライブラリの構築中に疑問に思ったことはありませんか? 特定の試薬の毒性や、光のない環境で作業する必要があることへの懸念は、特に多数のサンプルを扱う場合には、非常に困惑することがあります。アクチノマイシン D は毒性と光に対する感受性で知られているため、こうした懸念の原因となることがよくあります。しかし、なぜアクチノマイシン D がライブラリ キットに含まれているのでしょうか?

最近の調査結果から、アクチノマイシン D には転写を阻害する能力があることが明らかになりました。これは、転写開始複合体で DNA に結合し、RNA ポリメラーゼによる RNA 鎖の伸長を防ぐことによって実現されます。基本的に、アクチノマイシン D はポリメラーゼの活性を妨害し、cDNA 合成プロセス中に 2 番目の鎖が同時に合成されるのを妨げます。これにより、2 鎖合成で dTTP の代わりに dUTP を使用できるようになり、RNA ライブラリ構築における鎖特異性が向上します。

RNA ライブラリ構築キットにアクチノマイシン D を組み込むことで、鎖特異的ライブラリの構築が明らかに改善され、鎖特異性が大幅に向上しました。この革新により、実験プロセスが合理化され、研究者にとって簡素化されました。さらに、RNA 関連の科学的調査の極めて重要な側面である鎖特異性が大幅に改善されました。

しかし、アクチノマイシン D には欠点もあります。毒性があり、光から保護する必要があります。プレミックス キットやプレート ライブラリ構築キットの需要が高まっている今日では、光から保護する必要があるため、プレート キットの進歩に制限が生じます。

幸いなことに、アクチノマイシン D について心配する必要はなくなりました。Yeasen ZymeEditor プラットフォームでは、アクチノマイシン D の機能を置き換える画期的な MMLV 酵素変異体が導入されました。この新しいキットは無臭、無毒で、光を避ける必要がありません。優れた鎖特異性を提供し、健康と光に対する感受性に関する懸念を排除します。

表1： YeasenのRNA Lib Prepキットの特徴

図 3.アクチノマイシン D を含むキットとアクチノマイシン D を含まない新しいキットを併用した場合、RNA 入力量が 10 ng と 1 μg のときは、両方のキットの収量は同等でした。ただし、RNA 入力量が 4 μg のときは、アクチノマイシン D を含まない新しいキットの方が収量が高くなりました。

図 4.アクチノマイシン D を添加していない MMLV 変異体を特徴とする新しいキットを使用すると、アクチノマイシン D を組み込んだキットと比較して、優れた鎖特異性が得られます。この違いは、特に 10 ng という低い RNA 入力でより顕著になります。

Yeasen は、顧客体験の向上に注力しており、RNA ライブラリ キットの分野で新たな境地を切り開き続けています。

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