イェーセンとモレフューチャーは偽ライゲーションに対抗するため、耐熱性、高忠実度のT4 DNAリガーゼを開発しました。

Yeasen と Molefuture が分子生物学の課題を克服する先進的な T4 DNA リガーゼを導入

Yeasen と Molefuture は、ZymeEditor プラットフォームを使用して最先端の T4 DNA リガーゼを共同開発し、次世代シーケンシング (NGS) 用の分子生物学と DNA ライブラリ構築における重要な問題に取り組んでいます。従来の T4 DNA リガーゼは、安定性の低さ、アダプター ダイマー形成の多さ、DNA フラグメントの自己連結の多さなどの課題に直面しています。この新しい酵素は、これらの制限を克服することを目指しています。

ATP 依存性酵素である T4 DNA リガーゼは、コンパクトらせん DNA 結合ドメイン (DBD)、ヌクレオチジルトランスフェラーゼ (NTase) ドメイン、および OB フォールドドメインを特徴としています。タンパク質構造を分析することで、研究者は DNA 基質の 5 ～ 20 Å 以内の重要な残基を特定しました。高度な計算ツール、in silico スクリーニング、構造機能分析を使用して、構造機能の洞察を組み込んだコンセンサス配列アライメントを通じて変異体を設計しました。

チームは合理的な設計に加えて、指向性進化に MTPS 法を採用し、10,000 を超える変異体の安定性、活性、残留活性をスクリーニングしました。有望な候補は、厳格な精製とテストを受けました。その後、詳細な特性評価が行われ、活性、安定性、アダプターの自己連結、DNA フラグメントの自己連結、DNA 収量が評価されました。

研究者らは、DNA の合理的設計と G1 変異体の誘導変異を組み合わせて、多様な用途に適した優れた変異体を開発しました。この包括的なアプローチにより、非常に効率的で信頼性の高い T4 DNA リガーゼが誕生し、NGS における分子生物学研究と DNA ライブラリ構築の強化が期待されます。