마이코플라스마는 흉막폐렴유사생물(PPLO)로도 알려져 있으며, 지금까지 발견된 가장 작고 단순한 원핵생물로 세포벽이 없습니다. 직경이 0.1~0.3μm이고, 필터를 통과할 수 있으며, 높은 다형성을 보입니다. 포유류 세포 배양에서 비교적 흔하고 박테리아 오염 물질을 감지하기 어렵습니다.
마이코플라스마 오염은 세포 배양에 여러 가지 부정적인 영향을 미치며 세포 배양 관행에서 심각한 문제가 되었습니다. 일상적인 세포 배양에서 마이코플라스마 오염률은 보수적으로 15%에서 35% 사이로 추정되며, 이는 실험 결과의 신뢰성을 심각하게 방해합니다.
세포 배양에서 마이코플라스마 오염의 약 95%는 주로 Acholeplasma laidlawii, Mycoplasma arginini, Mycoplasma orale, Mycoplasma fermentans, Mycoplasma hominis, Mycoplasma hyorhinis에 의해 발생합니다. 배양 배지에서 마이코플라스마 집락은 '튀긴 계란' 모양을 형성합니다. 세포 배양 상층액과 세포막은 마이코플라스마 성장에 적합한 환경을 제공하며, 세포 표면에 기생하는 마이코플라스마는 숙주 세포막을 관통할 수 있습니다.
마이코플라스마 오염의 주요 원인은 다음과 같습니다: 세포 배양 배지 또는 그 구성 요소(배지, 혈청 및 기타 시약의 원료), 실험실 직원, 세포 배양 인큐베이터, 액체 질소 저장 탱크, 공기 중 입자 및 에어로졸, 항생제 과다 사용, 부적절하게 밀봉된 세포 배양, 이미 마이코플라스마로 오염된 세포.
한편, 이러한 오염에 상응하는 위험은 다음과 같습니다. 다운스트림 정제 과정에서 마이코플라스마를 효과적으로 제거할 수 없어 세포 제품이나 세포를 배지로 사용하여 생산한 제품이 일괄 폐기됩니다. 오염된 물질과 접촉하는 모든 관련 장비 및 시설, 중간체 또는 최종 제품이 오염됩니다. 다른 정상 세포가 마이코플라스마에 오염됩니다. 마이코플라스마 오염으로 인해 중요한 세포 또는 바이러스 종자 은행이 폐기됩니다. 실험실에서 마이코플라스마 오염을 해결하기 위해 생산 또는 실험 작업을 중단해야 합니다. 마이코플라스마 내성이 생겨 제거하기가 더 어려워집니다. 마이코플라스마 오염 영역이 확대되고 실험실의 다른 세포 배양에 위협이 됩니다.
따라서 세포 배양 시스템에 마이코플라스마가 존재하지 않는다는 것을 확인하기 위해 정기적인 마이코플라스마 검사와 제거가 수행되어야 하며, 이는 과학 연구의 정상적인 진행에 필수적입니다.
마이코플라스마 검출
마이코플라스마는 비교적 흔하지만 일반적으로 제거하기 어려운 유형의 오염입니다. 세포 배양을 포함하는 생물학적 공정의 경우 규정에 따라 '마이코플라스마 오염이 없어야 합니다.'
- 2020년판 중국 약전 제3권 '생물학적 제품의 생산 및 시험을 위한 동물 세포 기질의 조제 및 품질 관리'에서는 생산에 사용되는 세포에 대해 마스터 세포은행(MCB), 제조용 세포은행(WCB), 최종 생산 세포(EOPC)에 대해 마이코플라스마 검사를 실시해야 한다고 규정하고 있습니다.
- FDA, 업계 지침: 감염성 질환 적응증을 위한 바이러스 백신 생산에 사용되는 세포 기질 및 기타 생물학적 물질의 특성화 및 적격성에서는 마이코플라스마 제어가 원료, 바이러스 씨앗, 가공되지 않은 수확 유체 및 기타 그러한 물질에 대해 수행되어야 한다고 규정하고 있습니다.
- ICH Q5D, '생명공학/생물학적 제품 생산에 사용되는 세포 기질의 유도 및 특성화'에서는 또한 마이코플라스마 관리가 원자재, 바이러스 씨앗, 가공되지 않은 수확 유체 및 기타 그러한 재료에 대해 수행되어야 한다고 언급합니다.
그림 1 국내 및 해외 규정에서 요구하는 마이코플라스마 오염 검사 지점
기존의 마이코플라스마 검출 방법은 주로 배양법과 지표세포법을 포함합니다. 그러나 이 두 가지 방법의 긴 검출 주기 또는 민감도 문제로 인해 기업의 생산 또는 제품 출시 주기가 길어졌습니다. 세포 및 유전자 치료의 발전으로 마이코플라스마 검출의 적시성과 민감도에 대한 산업의 요구 사항이 점점 더 엄격해졌습니다. 짧은 유통기한은 이러한 긴 검출 기간을 지원하기에 충분하지 않으므로 빠른 NAT(Nucleic Acid Testing) 방법이 다양한 마이코플라스마 검출 방법 중에서 두드러졌습니다.
그림 2 국내 및 해외 규정에 기재된 마이코플라스마 검출방법
생산 원료, 세포 은행, 바이러스 종자, 바이러스 또는 세포 수확액, 치료용 세포에서 잠재적인 마이코플라스마 오염을 신속하게 정성적으로 검출하기 위한 제품입니다. 주로 생물약품의 연구, 개발, 생산 및 출시 프로세스에 사용됩니다.
제품 자격
규정 준수: EP2.6.7, JP G3, USP 63 약전의 요구 사항에 따라 검증되어 국제 권위 기관의 표준을 충족합니다.
감사 준수: 제품 생산은 ISO13485 품질 관리 시스템 표준을 준수하며 포괄적인 감사 문서로 지원됩니다.
품질 보증: 키트에 필요한 모든 효소 원료는 자체 생산되고 산업화되어 안정적인 공급이 보장됩니다.
기술적 경험 축적: TaqMan 방법에는 탄탄한 기술적 기반이 있으며, 키트 민감도는 10 CFU/mL 이하에 도달할 수 있습니다.
제품 성능에 집중: 이중 차단 항체를 갖춘 Taq 효소 항체 라이브러리는 키트의 특이성, 민감성 및 안정성을 향상시킵니다.
제품 특징
다양한 검출 유형: 최적화된 TaqMan 프로브는 최대 183가지 마이코플라스마 종을 검출할 수 있습니다.
사용 편의성: 샘플 준비 및 테스트에 걸리는 총 시간이 3시간도 채 걸리지 않아 배양 방법과 관련된 28일간의 대기 시간이 필요 없습니다.
높은 감도: 검출 한도가 10 CFU/mL로 낮아 직접 배양 방법에 대한 실행 가능한 대안이 됩니다.
높은 특이성: 프라이머와 프로브는 16S rRNA를 표적으로 설계되었으므로 클로스트리디움 및 유산균과 같은 밀접한 관련이 있는 종과 교차 반응이 발생하지 않습니다.
높은 안전성: 키트의 양성 대조군(PC)은 감염성이 없어 오염 위험이 전혀 없습니다.
강력한 간섭 저항성: 내부 통제(IC)를 도입하면 샘플 간섭과 반응 준비의 이상을 배제하는 데 도움이 되며, 효과적으로 거짓 음성을 방지할 수 있습니다.
그림 3 Mycoplasma Real-time qPCR Detection Kit를 사용한 Mycoplasma 검출을 위한 워크플로
2. MycAway™ Plus-Color 원스텝 마이코플라스마 검출 키트고유한 등온 증폭 기술을 사용하여 더 높은 색상 구별력을 제공합니다. 청자색(음성)에서 하늘색(양성)으로의 변화는 육안으로 더 쉽게 식별할 수 있습니다. 또한, 거짓 양성의 발생을 제거하기 위한 오염 방지 구성 요소가 포함되어 있습니다.
그림 4: MycAway™ Plus-Color One-Step Mycoplasma Detection Kit를 사용한 마이코플라스마 검출을 위한 작동 절차
3. GMyc-PCR 마이코플라스마 검출 키트기존의 1단계 PCR 검출 방법과 달리 프라이머의 수가 한 쌍에서 세 쌍으로 증가하여 중첩 PCR 증폭을 위해 마이코플라스마 16S 및 23S rRNA의 보존 영역을 타겟팅합니다. 이는 비특이적 생성물을 줄일 뿐만 아니라 생성물의 민감도를 크게 향상시켜 마이코플라스마의 단 하나의 사본만 검출할 수 있습니다.
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그림 5 GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit를 이용한 마이코플라스마 검출을 위한 작업 절차
마이코플라스마 제거
세포 배양 과정에서 정기적인 검사를 통해 대규모 마이코플라스마 오염을 효과적으로 예방할 수 있습니다. 그러나 세포가 이미 마이코플라스마로 오염된 경우 신속하게 처리해야 합니다. 가장 좋은 방법은 오염된 세포를 고압에서 살균한 다음 폐기하여 다른 깨끗한 세포주를 오염시키지 않는 것입니다. 오염된 세포가 특히 귀중하고 마이코플라스마 오염을 제거해야 하는 경우 항생제를 조합하여 이 목표를 달성할 수 있습니다. 마이코플라스마에는 세포벽이 없기 때문에 기존 항생제는 일반적으로 마이코플라스마에 효과가 없습니다. 따라서 적절한 마이코플라스마 제거 시약을 선택하는 것이 중요합니다.
제품 특징
낮은 독성: 세포에 대한 독성이 최소하여 형질 전환 및 생존력 분석과 같은 후속 세포 실험을 방해하지 않습니다.
높은 안정성: 시약은 -20°C에서 장기간 보관이 가능하며 높은 효능을 유지합니다.
사용이 간편합니다. 제품을 마이코플라스마에 오염된 배양 배지에 넣고 배양하기만 하면 됩니다.
빠르게 작용합니다: '즉각적인 결과'로, 효과는 최대 3일 이내에 나타납니다.
광범위 스펙트럼: 실험실에서 발견되는 대부분의 마이코플라스마 유형을 제거할 수 있습니다.
그림 6. 마이코플라스마 제거 시약 세포독성 시험의 그림
마이코플라스마 예방
세포 배양 과정에서 마이코플라스마 오염이 자주 발생합니다. 그러나 그 독특한 특성으로 인해 육안이나 현미경 장비로는 검출하기 어렵습니다. 따라서 마이코플라스마 예방에 특히 중요한 작업을 하는 것이 중요합니다. 마이코플라스마 오염을 효과적으로 예방하려면 배양 배지에 마이코플라스마 예방 시약을 첨가하면 됩니다.
현재 실험실에서 마이코플라스마는 주로 다음에서 유래합니다. 세포 간 교차 오염, 작업 환경 또는 실험실 장비 오염, 실험자의 무균 기술 부족, 오염된 배양 배지 또는 시약, 마이코플라스마 오염이 있는 원래 조직 또는 장기.
제품 정보
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제품 |
카탈로그 번호 |
제품 이름 |
제품 사양 |
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샘플 전처리 키트 |
18461ES |
25톤/100톤 |
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18467ES |
MolPure® Mag48 샘플 준비 키트 FN |
3×16T/ 6×16T |
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핵산 추출 장비 |
80511ES |
48채널 자동 핵산 추출기 |
48채널 |
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마이코플라스마 검출 키트 |
40619ES |
25톤/100톤 |
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40612ES |
25톤/100톤 |
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40601ES |
10회/20회 검정 |
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마이코플라스마 제거 시약 |
40607ES |
1ml/5×1ml |
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마이코플라스마 예방 시약 |
40608ES |
MycAway TM 예방용(2000×) -마이코플라스마 예방 시약 |
1ml/5×1ml |
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40605ES |
MycAway TM 스프레이(바로 사용 가능) |
500ml/2×500ml/10×500ml |
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40609ES |
100ml(100ml) |
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40610ES |
100ml(100ml) |