Een opmerkelijke doorbraak in strengspecifieke RNA-bibliotheekbereiding

Heb je ooit twijfels gehad tijdens het samenstellen van een RNA-bibliotheek? Zorgen over de toxiciteit van bepaalde reagentia en de noodzaak om in een lichtvrije omgeving te werken, kunnen behoorlijk verwarrend zijn, vooral bij het werken met talrijke monsters. Actinomycine D is vaak de bron van deze zorgen, omdat het bekend staat om zijn toxiciteit en lichtgevoeligheid. Maar waarom is actinomycine D opgenomen in bibliotheekkits?

Recente bevindingen hebben onthuld dat actinomycine D de mogelijkheid bezit om transcriptie te remmen. Het bereikt dit door te binden aan DNA bij het transcriptie-initiatiecomplex, waardoor de verlenging van RNA-ketens door RNA-polymerase wordt voorkomen. In essentie verstoort actinomycine D de polymerase-activiteit, waardoor de gelijktijdige synthese van de tweede streng tijdens het cDNA-syntheseproces wordt belemmerd. Dit maakt het mogelijk om dUTP te gebruiken in plaats van dTTP bij de synthese van twee strengen, wat leidt tot verbeterde ketenspecificiteit bij de constructie van RNA-bibliotheken.

De opname van actinomycine D in RNA-bibliotheekconstructiekits heeft onmiskenbaar de constructie van strengspecifieke bibliotheken verbeterd, wat de ketenspecificiteit aanzienlijk heeft vergroot. Deze innovatie heeft het experimentele proces gestroomlijnd en vereenvoudigd voor onderzoekers. Bovendien heeft het de ketenspecificiteit aanzienlijk verbeterd, een cruciaal aspect van RNA-gerelateerde wetenschappelijke onderzoeken.

Actinomycine D heeft echter ook nadelen: het vertoont toxiciteit en vereist bescherming tegen licht. In het huidige landschap van toenemende vraag naar premixed en plate library constructing kits, vormt de noodzaak om te beschermen tegen licht beperkingen voor de vooruitgang van plate kits.

Gelukkig hoeft u zich geen zorgen meer te maken over actinomycine D. Yeasen Het ZymeEditor-platform heeft een baanbrekende MMLV-enzymmutant geïntroduceerd die de functie van actinomycine D vervangt. Deze nieuwe De kit is geurloos, niet giftig en no moet vermijden licht. Het biedt superieure ketenspecificiteit, waardoor zorgen met betrekking tot gezondheid en lichtgevoeligheid worden geëlimineerd.

Tabel 1: Onderscheidende kenmerken van YeasenRNA Lib Prep Kits van 's

Figuur 3. Bij gebruik van de kit met actinomycine D naast de nieuwe kit zonder actinomycine D waren de opbrengsten voor beide kits vergelijkbaar bij RNA-inputs van 10 ng en 1 μg. Bij een RNA-input van 4 μg vertoonde de nieuwe kit zonder actinomycine D echter hogere opbrengsten.

Figuur 4. Het gebruik van de nieuwe kit, met een MMLV-mutant zonder toevoeging van Actinomycine D, resulteert in een superieure strengspecificiteit vergeleken met de kit die Actinomycine D bevat. Dit onderscheid wordt duidelijker, met name bij lagere RNA-inputs van 10 ng.

Yeasen, dat zich toelegt op het verbeteren van de klantervaring, blijft nieuw terrein betreden op het gebied van RNA-bibliotheekkits.

Productaanbeveling