Yeasen en Molefuture ontwikkelden thermotolerante, zeer betrouwbare T4 DNA-ligase om valse ligatie te bestrijden

Yeasen en Molefuture introduceren geavanceerde T4 DNA-ligase om uitdagingen op het gebied van moleculaire biologie te overwinnen

Yeasen en Molefuture hebben gezamenlijk een geavanceerde T4 DNA-ligase ontwikkeld met behulp van hun ZymeEditor-platform, waarmee belangrijke kwesties in de moleculaire biologie en DNA-bibliotheekconstructie voor next-generation sequencing (NGS) worden aangepakt. Traditionele T4 DNA-ligase kampt met uitdagingen zoals slechte stabiliteit, hoge adapterdimeervorming en hoge DNA-fragment-zelfligatie. Dit nieuwe enzym is erop gericht deze beperkingen te overwinnen.

T4 DNA-ligase, een ATP-afhankelijk enzym, heeft een compact-helical DNA-bindend domein (DBD), een nucleotidyl-transferase (NTase) domein en een OB-fold domein. Door de eiwitstructuur te analyseren, identificeerden onderzoekers sleutelresiduen binnen 5 tot 20Å van het DNA-substraat. Met behulp van geavanceerde computationele tools, in silico screening en structuur-functieanalyse, ontwierpen ze mutanten door middel van consensussequentie-uitlijning, waarbij structureel-functionele inzichten werden opgenomen.

Naast rationeel ontwerp gebruikte het team de MTPS-methode voor gerichte evolutie, waarbij meer dan 10.000 mutanten werden gescreend op stabiliteit, activiteit en resterende activiteit. Veelbelovende kandidaten ondergingen een rigoureuze zuivering en tests. Gedetailleerde karakterisering volgde, waarbij activiteit, stabiliteit, adapter-zelfligatie, DNA-fragment-zelfligatie en DNA-opbrengst werden geëvalueerd.

De onderzoekers combineerden DNA-rationeel ontwerp en gerichte mutatie op G1-mutanten om uitzonderlijke varianten te ontwikkelen die geschikt zijn voor diverse toepassingen. Deze uitgebreide aanpak heeft geresulteerd in een zeer efficiënte en betrouwbare T4 DNA-ligase, die klaar is om moleculair biologisch onderzoek en DNA-bibliotheekconstructie in NGS te verbeteren.

Figuur 1. Illustreert de evolutie van Versatility T4 DNA Ligase. (A) Rationeel ontwerp van T4 DNA-ligase. (B) Screening van thermotolerante T4 DNA-ligasemutanten bij 45℃, wat leidt tot de identificatie van mutanten met een aanzienlijk verbeterde specifieke activiteit. (C) Screening van T4 DNA-ligasemutanten gericht op het verminderen van de vorming van adapterdimeren tijdens de voorbereiding van de DNA-bibliotheek. (D) Evaluatie van de retentie van de bibliotheekopbrengsten na een hittebehandeling bij 42℃ gedurende 1 uur met behulp van de DNA-bibliotheekbereidingsmethode.
Tabel 1. Yeasen Veelzijdige T4 DNA-ligase is thermostabiel. Het enzym werd 5 dagen lang behandeld bij 30℃ en geanalyseerd met de DNA Lib Prep-methode.
Figuur 2. Yeasen Veelzijdige T4 DNA-ligase heeft hogere betrouwbaarheid vergeleken met de wildtype (WT) T4 DNA-ligase, wat werd aangegeven door minder adapterdimeervorming als gevolg van zelfmisligatie (A) en (B), geanalyseerd met de DNA Lib Prep-methode.
Figuur 3. Yeasen De veelzijdige T4 DNA-ligase vertoont de laagste adapterdimeervorming vergeleken met de commerciële T4 DNA-ligases, waaronder thermotolerante ligases die zijn geanalyseerd met de DNA Lib Prep-methode.
Deze doorbraak toont aan Yeasen en Molefuture's toewijding aan innovatie en uitmuntendheid in enzymtechnologie.

Bestelgegevens

Naam Kat# Notities
Enzym Hieff™ veelzijdige T4 DNA-ligase (600 U/µL) 12996ES Thermotolerant en hoge betrouwbaarheid voor tumorgendetectie
DNA Hieff NGS® DNA-bibliotheekvoorbereidingskit 13577ES Tumor/Mechanische methode
Hieff NGS® OnePot Pro DNA-bibliotheekvoorbereidingskit V2 12194ES Tumor/ Enzymatische methode
Hoog NGS® OnePot II DNA-bibliotheekvoorbereidingskit voor Illumina 13490ES Pathgeen/ Enzymatisch/ normale tijd (140min)
Hieff NGS® OnePot Flash DNA Bibliotheekvoorbereidingskit 12316ES Pathgeen/ Enzymatisch/ Ultrasnel (100 minuten)
Hieff NGS® DNA&RNA-bibliotheek Co-Prep Kit V2 12305ES Pathgeen/ Enzymatisch/ DNA & RNA Co-Prep
RNA Hieff NGS® Ultima Dual-mode mRNA Bibliotheek Prep Kit 12308ES Zonder oligo dT magnetische kralen, 11 buisjes
Hieff NGS® Ultima Dual-mode mRNA Bibliotheek Prep Kit 12309ES oligo dT magnetische kralen plus, 14 buisjes
Hieff NGS® Ultima Dual-mode RNA Bibliotheekvoorbereidingskit 12310ES Voorgemengde versie, 5 tubes
Hieff NGS ® EvoMax RNA Library Prep Kit (voorgemengde versie) (actinomycine D Vrij) 12340ES Voorgemixte versie, (Actinomycine D Vrij)
Hieff NGS® MaxUp rRNA-uitputtingskit (plant) 12254ES Plant
Hieff NGS® MaxUp Human rRNA Depletion Kit (rRNA & ITS/ETS) 12257ES Menselijk

Laat een bericht achter als u informatie wilt over de prestatievergelijkingsgegevens tussen dit enzym en andere hoogwaardige thermostabiele en conventionele T4 DNA-ligasen.

Over Molefuture Biotechnologie

Molefuture Biotechnology is een dochteronderneming van Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd., gespecialiseerd in het leveren van op maat gemaakte enzymmodificatieoplossingen aangestuurd door enzymevolutietechnologie. Door de middelen van Yeasen Biotechnologie, Molefuture opereert op zes belangrijke technologische platforms: het innovatieve enzymevolutieplatform ZymeEditor, een multi-host high-efficiency expression platform, een fermentatieprocesontwikkelingsplatform, een zuiveringsprocesontwikkelingsplatform, een ultra-clean enzymeproductieplatform en een enzymanalyse- en kwaliteitscontroleplatform. Met deze zes technologische platforms kan Molefuture een complete set van op maat gemaakte oplossingen bieden, waaronder enzymgestuurde evolutie, nieuwe enzymontwikkeling, enzymprocesontwikkeling en GMP-level scale-up productie om te voldoen aan de toepassingseisen van enzymen in gebieden zoals in vitro-diagnostiek, biomedische technologie, synthetische biologie, medische esthetiek, farmaceutische tussenproducten, et. al.

Inquiry