Um avanço notável na preparação da biblioteca de RNA específica da fita

Você já enfrentou dúvidas ao construir uma biblioteca de RNA? Preocupações sobre a toxicidade de certos reagentes e a necessidade de trabalhar em um ambiente sem luz podem ser bastante desconcertantes, particularmente ao lidar com inúmeras amostras. A actinomicina D tem sido frequentemente a fonte dessas preocupações, pois é conhecida por sua toxicidade e sensibilidade à luz. Mas por que a actinomicina D é incluída em kits de biblioteca?

Descobertas recentes revelaram que a actinomicina D possui a capacidade de inibir a transcrição. Ela consegue isso ligando-se ao DNA no complexo de iniciação da transcrição, prevenindo assim o alongamento das cadeias de RNA pela RNA polimerase. Essencialmente, a actinomicina D interfere na atividade da polimerase, dificultando a síntese simultânea da segunda fita durante o processo de síntese de cDNA. Isso permite o uso de dUTP em vez de dTTP na síntese de duas fitas, levando a uma especificidade de cadeia aprimorada na construção de bibliotecas de RNA.

A incorporação de actinomicina D em kits de construção de bibliotecas de RNA melhorou inegavelmente a construção de bibliotecas específicas de fita, aumentando significativamente a especificidade da cadeia. Essa inovação agilizou o processo experimental, simplificando-o para pesquisadores. Além disso, melhorou substancialmente a especificidade da cadeia, um aspecto essencial das investigações científicas relacionadas ao RNA.

No entanto, a actinomicina D tem suas desvantagens: ela exibe toxicidade e requer proteção contra a luz. No cenário atual de crescente demanda por kits de construção de bibliotecas de placas e pré-misturados, a necessidade de proteção contra a luz impõe limitações aos avanços dos kits de placas.

Felizmente, não há mais necessidade de se preocupar com a actinomicina D. A plataforma Yeasen ZymeEditor introduziu um mutante enzimático MMLV inovador que substitui a função da actinomicina D. Este novo O kit é inodoro, não tóxico e no precisa evitar luz. Oferece especificidade de cadeia superior, eliminando preocupações relacionadas à saúde e à sensibilidade à luz.

Tabela 1： Características distintivas dos kits de preparação de RNA Lib de Yeasen

Figura 3. Ao empregar o kit contendo actinomicina D juntamente com o novo kit sem actinomicina D, os rendimentos foram comparáveis ​​para ambos os kits em entradas de RNA de 10 ng e 1 μg. No entanto, em uma entrada de RNA de 4 μg, o novo kit sem actinomicina D exibiu rendimentos mais altos.

Figura 4. A utilização do novo kit, apresentando um mutante MMLV sem a adição de Actinomicina D, resulta em especificidade de fita superior em comparação ao kit que incorpora Actinomicina D. Essa distinção se torna mais pronunciada, particularmente em entradas de RNA mais baixas, de 10 ng.

A Yeasen, dedicada a melhorar a experiência do cliente, continua inovando no campo dos kits de biblioteca de RNA.

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