YEASEN E MOLEFUTURA desenvolveram termotolerantes, alta fidelidade T4 DNA ligase para combater a falsa ligação

Yeasen e Molefuture apresentam ligase avançada de DNA T4 para superar desafios de biologia molecular

Yeasen e Molefuture desenvolveram em conjunto uma ligase de DNA T4 de ponta usando sua plataforma ZymeEditor, abordando questões-chave em biologia molecular e construção de biblioteca de DNA para sequenciamento de próxima geração (NGS). A ligase de DNA T4 tradicional enfrenta desafios como baixa estabilidade, alta formação de dímero adaptador e alta autoligação de fragmentos de DNA. Esta nova enzima visa superar essas limitações.

A ligase de DNA T4, uma enzima dependente de ATP, apresenta um domínio de ligação de DNA (DBD) helicoidal compacto, um domínio de nucleotidil-transferase (NTase) e um domínio de dobra OB. Ao analisar a estrutura da proteína, os pesquisadores identificaram resíduos-chave dentro de 5 a 20Å do substrato de DNA. Usando ferramentas computacionais avançadas, triagem in silico e análise de estrutura-função, eles projetaram mutantes por meio do alinhamento de sequência de consenso, incorporando insights estruturais-funcionais.

Além do design racional, a equipe empregou o método MTPS para evolução direcionada, rastreando mais de 10.000 mutantes para estabilidade, atividade e atividade residual. Candidatos promissores passaram por purificação e testes rigorosos. Caracterização detalhada se seguiu, avaliando atividade, estabilidade, autoligação do adaptador, autoligação do fragmento de DNA e rendimento de DNA.

Os pesquisadores combinaram design racional de DNA e mutação direcionada em mutantes G1 para desenvolver variantes excepcionais adequadas para diversas aplicações. Essa abordagem abrangente resultou em uma ligase de DNA T4 altamente eficiente e confiável, pronta para aprimorar a pesquisa de biologia molecular e a construção de biblioteca de DNA em NGS.

Figura 1. Ilustra a evolução da Versatility T4 DNA Ligase. (A) Projeto racional de T4 DNA ligase. (B) Triagem de mutantes de T4 DNA ligase termotolerantes a 45℃, levando à identificação de mutantes com atividade específica significativamente aumentada. (C) Triagem de mutantes de T4 DNA ligase visando reduzir a formação de dímero adaptador durante a preparação da biblioteca de DNA. (D) A avaliação da retenção de rendimentos da biblioteca após tratamento térmico a 42℃ por 1 hora usando o método de preparação da biblioteca de DNA.
Tabela 1. A ligase de DNA T4 versátil de Yeasen é termoestável. A enzima foi tratada a 30℃ por 5 dias e analisada pelo método DNA Lib Prep.
Figura 2. A ligase de DNA T4 versátil de Yeasen tem maior fidelidade comparado com a ligase de DNA T4 do tipo selvagem (WT), indicada pela menor formação de dímero adaptador devido à autoligação incorreta (A) e (B) analisada pelo método DNA Lib Prep.
Figura 3. A ligase de DNA T4 versátil da Yeasen apresenta a menor formação de dímero adaptador em comparação com as ligases de DNA T4 comerciais, incluindo ligases termotolerantes analisadas pelo método DNA Lib Prep.
Este avanço demonstra o comprometimento da Yeasen e da Molefuture com a inovação e a excelência em engenharia de enzimas.

Informações para pedidos

Nome Gato# Notas
Enzima Hieff™ Versátil T4 DNA Ligase (600 U/µL) 12996ES Termotolerante e alta fidelidade para detecção de genes tumorais
ADN Kit de preparação de biblioteca de DNA Hieff NGS® 13577ES Tumor/ Método mecânico
Kit de preparação de biblioteca de DNA Hieff NGS® OnePot Pro V2 12194ES Tumor/ Método enzimático
Hieff NGS® OnePot II Kit de preparação de biblioteca de DNA para Illumina 13490ES Patógeno/ Enzimático/ tempo regular (140min)
Kit de preparação de biblioteca de DNA Flash Hieff NGS® OnePot 12316ES Patógeno/ Enzimático/ Ultra-rápido (100 minutos)
Kit de co-preparação da biblioteca Hieff NGS® DNA&RNA V2 12305ES Co-preparação de patógenos/enzimáticos/DNA e RNA
ARN Kit de preparação de biblioteca de mRNA de modo duplo Hieff NGS® Ultima 12308ES Sem esferas magnéticas oligo dT, 11 tubos
Kit de preparação de biblioteca de mRNA de modo duplo Hieff NGS® Ultima 12309ES esferas magnéticas oligo dT plus, 14 tubos
Kit de preparação de biblioteca de RNA de modo duplo Hieff NGS® Ultima 12310ES Versão pré-misturada, 5 tubos
Hieff NGS ® EvoMax RNA Library Prep Kit (versão pré-misturada) (actinomicina D Livre) 12340ES Versão pré-misturada, (Actinomicina D Livre)
Kit de depleção de rRNA Hieff NGS® MaxUp (planta) 12254ES Plantar
Kit de depleção de rRNA humano Hieff NGS® MaxUp (rRNA e ITS/ETS) 12257ES Humano

Deixe uma mensagem para perguntar sobre os dados de comparação de desempenho entre esta enzima e outras ligases de DNA T4 termoestáveis ​​e convencionais de primeira linha.

Sobre a Molefuture Biotechnology

A Molefuture Biotechnology é uma subsidiária da Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd., especializada em fornecer soluções personalizadas de modificação enzimática impulsionadas pela tecnologia de evolução enzimática. Aproveitando os recursos da Yeasen Biotecnologia, a Molefuture opera em seis grandes plataformas tecnológicas: a inovadora plataforma de evolução enzimática ZymeEditor, uma plataforma de expressão de alta eficiência multi-host, plataforma de desenvolvimento de processo de fermentação, plataforma de desenvolvimento de processo de purificação, plataforma de produção de enzima ultralimpa e plataforma de análise e controle de qualidade de enzima. Com essas seis plataformas tecnológicas, a Molefuture pode oferecer um conjunto completo de soluções personalizadas, incluindo evolução direcionada por enzima, desenvolvimento de nova enzima, desenvolvimento de processo enzimático e produção em escala de nível GMP para atender às demandas de aplicação de enzimas em áreas como diagnóstico in vitro, biomedicina, biologia sintética, estética médica, intermediários farmacêuticos, et. al.

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