ЧО Набор для обнаружения остатков ДНК клетки-хозяина (3Г)
Квалификационное резюме (номер по каталогу: 41332ES60)
- Фон
Данные, обобщенные в этом отчете, получены компанией Yeasen Biotechnology для CHO. Продукт Host Cell DNA Residue Detection Kit (3G). Сводные данные предназначены только для справки пользователя, и пользователю необходимо проверить остаток клетки-хозяина Метод ДНК с использованием собственных образцов для подтверждения того, что метод может соответствовать требованиям пользователя. Всем лабораториям, использующим этот набор, рекомендуется проверить следующие параметры: линейность, диапазон, точность, прецизионность, предел количественного определения, специфичность и надежность.
Yeasen Biotechnology может предоставить подробный отчет о квалификации для этого набора. Если пользователь использует этот отчет, то только пригодность (которая включала точность, Точность и Специфичность) должны быть проверены.
- Экспериментальные материалы и методы
2.1 ЧО Набор для обнаружения остатков ДНК клетки-хозяина (3G), производитель: Yeasen, номер по каталогу: 41332ES60.
2.2 Набор для подготовки образцов остаточной магнитной ДНК MolPure, производитель: Yeasen, номер по каталогу: 18461ES60.
2.3 Исходные данные: электронная версия была записана в «Отчете об эксперименте». подфайл родительского файла ЧО Набор для обнаружения остатков ДНК клетки-хозяина (3G).
2.4 Методы: Материалы и методы работы, используемые для эксперимента, в основном были произведены или установлены компанией Yeasen Biotechnology, которые оценивались и проверялись в течение длительного времени; разработка и производство наборов соответствуют системе ISO 13485.
- Содержание и результаты квалификации
3.1 Дальность обнаружения
Линейный диапазон набора составил 3 фг/мкл~300 пг/мкл с R2=1, а эффективность амплификации составила 99,09% с CV<15% для каждого анализа концентрации.
Рисунок 1. Стандартная кривая количественной ПЦР ДНК CHO (3G)
3.2 Точность
3.2.1 Рвосстановление
3.2.1.1 Эксперимент по восстановлению с добавлением холостого образца
Образцы CHO Стандарты ДНК в высоких и низких концентрациях: 30 пг/мкл, 300 Фг/мкл и 3 фг/мкл были подготовлены соответственно и проанализированы после экстракции с использованием набора для предварительной обработки образцов остаточной ДНК с помощью метода магнитных частиц (3 Для каждого образца были выполнены повторные экстракции, и для каждой экстракции было сделано 3 повторных анализа), а также были проанализированы показатели извлечения образцов и коэффициенты вариации.
Для различных концентраций образцов ДНК степень извлечения составила от 70% до 130%, а коэффициент вариации составил <20%.
| Тип образца | Теоретическая концентрация | Извлечение 1 означает | Извлечение 2 означает | Извлечь 3 означает | Средняя концентрация | резюме | Восстановление |
| Пустой образец | / | / | / |
| / | / | / |
| Образец восстановления 1 | 30 пг/мкл | 27.07 | 27.51 | 28.27 | 27.62 | 2.20% | 92.06% |
| Образец восстановления 2 | 300 фг/мкл | 285,53 | 301.25 | 295.71 | 294.16 | 2,71% | 98.05% |
| Образец восстановления 3 | 3 фг/мкл | 3.50 | 3.54 | 3.31 | 3.45 | 3,56% | 115.00% |
Таблица 1. Восстановление после добавления холостого образца
3.2.1.2 Эксперимент по восстановлению с имитацией добавления образца
Образцы одинаковой концентрации (300 фг/мкл ДНК CHO) были извлечены (для каждого образца было проведено 3 повторных экстракции и для каждой экстракции было проведено 3 повторных анализа) с 5 различными фоновыми растворами (с высоким содержанием белка, высоким содержанием нуклеиновых кислот, высоким и низким содержанием pH, высоким содержанием соли), после чего были проанализированы показатели восстановления образцов и CV.
Степень извлечения образцов ДНК для различных фоновых растворов варьировалась от 70% до 130%, при этом все коэффициенты вариации (CV) составляли <20%.
| Тип образца | Теоретическая концентрация | Извлечение 1 означает | Извлечение 2 означает | Извлечь 3 означает | Средняя концентрация | резюме | Восстановление |
| Базовый образец | / | / | / |
| / | / | / |
| Высокое содержание белка | 300 фг/мкл | 302.29 | 332.86 | 342.76 | 325.97 | 6.47% | 108.66% |
| Высокая ядерная кислота | 284.47 | 290,66 | 308.76 | 294.63 | 4.28% | 98.21% | |
| Высокосоленый | 272,96 | 286.25 | 312.91 | 290,71 | 7.00% | 96.90% | |
| Высокий уровень pH | 296.04 | 320,58 | 324,56 | 313.72 | 4,92% | 104.57% | |
| Низкий уровень pH | 314.77 | 327.89 | 340.26 | 327.64 | 3,89% | 109.21% |
Таблица 2 Базовая выборка Spiking Recovery
3.3 Точность
3.3.1 Повторяемость
Повторите анализ 10 раз для стандартов ДНК CHO в концентрации 3 фг/мкл с CV <15%.
| Повторения | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | Иметь в виду | РЕЗЮМЕ% |
| Значение обнаружения (фг/мкл) | 3.13 | 3.26 | 2.89 | 3.16 | 2.95 | 2.87 | 2.88 | 2.75 | 2.87 | 3.15 | 2.99 | 5.65% |
Таблица 3 Результаты повторяемости
3.3.2 Средняя точность
Три экспериментатора независимо друг от друга протестировали стандартные образцы ДНК CHO при высоких и низких концентрациях: 300 пг/мкл, 3 пг/мкл и 3 фг/мкл, и для каждой концентрации было сделано по три повтора, а коэффициенты вариации всех девяти полученных данных составили <15%.
| Эксп |
Фактическая концентрация Теоретическая концентрация | ДНК CHO (3G) | ||
| 300 пг/мкл | 3 пг/мкл | 3 фг/мкл | ||
| Опыт 1 | Определение 1 | 302.63 | 2.97 | 3.40 |
| Определение 2 | 294,54 | 3.01 | 3.14 | |
| Определение 3 | 287,67 | 2.99 | 3.01 | |
| Эксп2 | Определение 4 | 292.27 | 2.92 | 3.47 |
| Определение 5 | 299,61 | 2.90 | 2.82 | |
| Определение 6 | 305.73 | 2.93 | 2.90 | |
| Опыт 3 | Определение 7 | 301.06 | 3.17 | 3.15 |
| Решимость 8 | 299.17 | 3.00 | 3.21 | |
| Решимость 9 | 290,66 | 2.90 | 3.05 | |
| / | Иметь в виду | 297.04 | 2.98 | 3.13 |
| / | РЕЗЮМЕ% | 2.03 | 2.80 | 6.85 |
Таблица 4 Результаты промежуточной точности
3.4 Специфичность
Интерференция клеточной геномной ДНК, обычно используемой при производстве биологических препаратов, была оценена на предмет интерференции с реагентами для обнаружения ДНК CHO, и группа интерференции перекрывалась с контрольной группой, и никакой интерференции не наблюдалось (на рисунке ниже показаны, в порядке убывания, данные по интерференции геномных ДНК мыши, MDCK, HEK293 и E.coli с реагентами для обнаружения ДНК CHO).
Рисунок 2 Результаты эксперимента по интерференции
3.5 Предел количественного определения
ДНК CHO была обнаружена при 3 фг/мкл, 1 фг/мкл, 0,5 фг/мкл, 0,3 фг/мкл и 0,1 фг/мкл, с 10 повторениями для каждой концентрации. Результаты показали, что CV был <20% при концентрациях 0,3 фг/мкл и выше. То есть предел количественного определения набора для обнаружения остатков ДНК клеток-хозяев CHO (3G) составил 0,3 фг/мкл.
|
Повторения Тестовый элемент | ДНК CHO (3G) (фг/мкл) | |
| Количество | Коэффициент пересчета% | |
| 1 | 0,28 | 93,33% |
| 2 | 0,26 | 86.67% |
| 3 | 0,32 | 106.67% |
| 4 | 0.30 | 100.00% |
| 5 | 0,33 | 110.00% |
| 6 | 0,23 | 76.67% |
| 7 | 0,29 | 96.67% |
| 8 | 0,37 | 123.33% |
| 9 | 0,31 | 103.33% |
| 10 | 0,28 | 93,33% |
| Иметь в виду | 0.30 | / |
| РЕЗЮМЕ% | 13.09% | / |
Рисунок 3. Результат теста qPCR ДНК CHO (3G)
3.6 Предел обнаружения
ДНК CHO была обнаружена при 0,3 фг/мкл, 0,1 фг/мкл, 0,05 фг/мкл и 0,01 фг/мкл, с 20 репликациями для каждой концентрации. Результаты показали, что уровень обнаружения был ≥19 (т.е. уровень обнаружения ≥95%) в 20 повторных лунках при концентрациях 0,05 фг/мкл и выше. То есть предел обнаружения набора для обнаружения остатков ДНК клеток-хозяев CHO (3G) составил 0,05 фг/мкл.
Рисунок 4. Результат ПЦР-теста ДНК CHO (3G)
3.7 Надежность
Этот комплект был протестирован и подходит, среди прочего, для следующих инструментов:
| Продавец | Модели инструментов | Эффективность усиления | Р2 | Предел количественной оценки | резюме | Предел обнаружения | Скорость обнаружения |
| Термо | АБИ 7500 | 99,69% | 1 | 0,3 фг/мкл | 12.40% | 0,05 фг/мкл | 95.65% |
| Термо | ABI QuantStudio5 | 99,26% | 1 | 0,3 фг/мкл | 15.30% | 0,05 фг/мкл | 100.00% |
| Рош | LightCycler480 | 2,05% | 0,978 | 0,3 фг/мкл | / | 0,05 фг/мкл | / |
| Шанхай Хунши | СЛАН | 101.14% | 0,999 | 0,3 фг/мкл | 14.41% | 0,05 фг/мкл | 95.65% |
Таблица 5 Результаты испытаний пригодности инструментов
3.8 Стабильность
3.8.1 Стабильность при замораживании-оттаивании
Набор для обнаружения остатков ДНК в клетках-хозяевах CHO (3G) был протестирован путем повторного замораживания и оттаивания 10 раз, и эффективность набора не пострадала.
|
Тестирование индикаторов Время замораживания-оттаивания | Параметр | время Т0 | Замораживание-оттаивание 10 раз |
| Параметр стандартной кривой | Эффективность усиления | 95.70% | 98.62% |
| Р2 | 1 | 1 | |
| Предел количественного определения (0,3 фг/мкл) | резюме | 15.31% | 17.16% |
| Предел обнаружения (0,05 фг/мкл) | Скорость обнаружения | 95.65% | 100% |
Таблица 6 Анализ результатов стабильности при замораживании-оттаивании
3.7.2 Ускоренная стабильность
Набор для обнаружения остатков ДНК клеток-хозяев CHO (3G) хранился при температуре 2~8°C в течение 30 дней и 37°C в течение 14 дней соответственно. Ни одна из характеристик набора не была затронута.
|
Тестирование индикаторов Ускорение Температура и Время | Параметр | Эксперимент 1 | Эксперимент 2 | ||
| время Т0 | 2~8℃ 30 Дни | время Т0 | 37℃ 14 дней | ||
| Параметр стандартной кривой | Эффективность усиления | 100,53% | 102.61% | 101.76% | 101.84% |
| Р2 | 1 | 1 | 1 | 1 | |
| Предел количественного определения (0,3 фг/мкл) | резюме | 17.16% | 12.63% | 16.27% | 12.49 |
| Предел обнаружения (0,05 фг/мкл) | Скорость обнаружения | 95.65% | 100% | 95,57% | 100% |
Таблица 7 Ускоренный анализ результатов стабильности
3.9 Предел пробела
3.9.1 Нет контроля шаблонов (NTC)
Без контроля матрицы (NTC) разбавление ДНК с 96 повторениями для проведения количественного анализа методом кПЦР, все значения CT выше 96 протестированных повторных лунок были >40.
Рисунок 5 Результаты эксперимента NTC
3.9.2 Отрицательный контрольный образец экстракции (NCS)
Отрицательный контрольный образец экстракции (NCS) представлял собой разбавление ДНК, которое сначала извлекалось путем предварительной обработки образца, затем проводилась количественная ПЦР; все значения CT выше 48 протестированных повторных лунок были >40.
Рисунок 6 НКС результаты эксперимента
- 4.Ссылка
4.1 Китайская фармакопейная комиссия (ChPC). Фармакопея Китайской Народной Республики (т. Ⅲ) [S]. Пекин: China Medical Science and Technology Press, стр. 542-543, 2020.
4.2 NMPA, 2007: Общие принципы технического обзора валидации аналитических методов для контроля качества биологических продуктов.
4.3 ICH(2022)《Валидация аналитического метода Q2》, черновая версия.
Информация о заказе