НЕК293 Набор для обнаружения остатков ДНК клетки-хозяина (3Г)
Квалификационное резюме (Кат. №: 4)1331ES60)
- Фон
Данные, обобщенные в этом отчете, получены компанией Yeasen Biotechnology для «HEK293». Набор для обнаружения остатков ДНК клетки-хозяина (3G)' продукт. Сводные данные предназначены только для справки пользователя, и пользователю необходимо проверить остаток клетки-хозяина Метод ДНК с использованием собственных образцов для подтверждения того, что метод может соответствовать требованиям пользователя. Всем лабораториям, использующим этот набор, рекомендуется проверить следующие параметры: линейность, диапазон, точность, прецизионность, предел количественного определения, специфичность и надежность.
Yeasen Biotechnology может предоставить подробный отчет о квалификации для этого набора. Если пользователь использует этот отчет, то только пригодность (которая включала точность, Точность и Специфичность) должны быть проверены.
- Экспериментальные материалы и методы
2.1 НЕК293 Набор для обнаружения остатков ДНК клетки-хозяина (3G), производитель: Yeasen, номер по каталогу: 41331ES60.
2.2 Набор для подготовки образцов остаточной магнитной ДНК MolPure®, производитель: Yeasen, номер по каталогу: 18461ES60.
2.3 Исходные данные: электронная версия была записана в «Экспериментальном отчете». подфайл родительского файла 'HEK293 Набор для обнаружения остатков ДНК клетки-хозяина (3G).
2.4 Методы: Материалы и методы работы, используемые для эксперимента, в основном были произведены или установлены компанией Yeasen Biotechnology, которые оценивались и проверялись в течение длительного времени; разработка и производство наборов соответствуют системе ISO 13485.
- Содержание и результаты квалификации
3.1 Дальность обнаружения
Линейный диапазон набора составил 30 фг/мкл~300 пг/мкл с R2≥0,998, а эффективность амплификации составила 90%~110% с CV<15% для каждого анализа концентрации.
Рисунок 1. Стандартная кривая количественной ПЦР ДНК HEK293 (3G)
3.2 Точность
3.2.1 Рвосстановление
3.2.1.1 Эксперимент по восстановлению с добавлением холостого образца
Образцы HEK293 Стандарты ДНК в высоких и низких концентрациях: 300 пг/мкл, 3 пг/мкл и 30 фг/мкл были подготовлены соответственно и проанализированы после экстракции с использованием набора для предварительной обработки образцов остаточной ДНК с помощью метода магнитных частиц (для каждого образца было проведено 2 повторных экстракции и 3 повторных анализа для каждой экстракции), а также были проанализированы показатели восстановления образцов и коэффициенты вариации.
Для различных концентраций образцов ДНК степень извлечения составила от 70% до 130%, а коэффициент вариации составил <20%.
| Тип образца | Теоретическая концентрация | Извлечение 1 означает | Извлечение 2 означает | Средняя концентрация | резюме | Восстановление |
| Пустой образец | / | / | / | / | / | / |
| Образец восстановления 1 | 300 пг/мкл | 306.81 пг/мкл | 279,57 пг/мкл | 293,82 пг/мкл | 6,56% | 97.94% |
| Образец восстановления 2 | 3 пг/мкл | 3.11 пг/мкл | 2.99 пг/мкл | 3.09 пг/мкл | 2,75% | 103.00% |
| Образец восстановления 3 | 30 фг/мкл | 31.02 фг/мкл | 30.63 фг/мкл | 30.83 фг/мкл | 0,89% | 102.77% |
Таблица 1. Восстановление после добавления холостого образца
3.2.1.2 Эксперимент по восстановлению с имитацией добавления образца
Образцы одинаковой концентрации (3 пг/мкл ДНК HEK293) были извлечены (для каждого образца было проведено 2 повторных экстракции и для каждой экстракции было проведено 3 повторных анализа) с 5 различными фоновыми растворами (с высоким содержанием белка, высоким содержанием нуклеиновых кислот, высоким и низким pH, высоким содержанием соли), после чего были проанализированы показатели восстановления образцов и CV.
Степень извлечения образцов ДНК для различных фоновых растворов варьировалась от 70% до 130%, при этом все коэффициенты вариации (CV) составляли <20%.
| Тип образца | Теоретическая концентрация | Извлечение 1 означает | Извлечение 2 означает | Средняя концентрация | резюме | Восстановление |
| Базовый образец | / | / | / | / | / | / |
| Высокое содержание белка | 3 пг/мкл | 2.65 | 2.80 | 2.73 | 3,80% | 90,87% |
| Высокая ядерная кислота | 2.82 | 2.97 | 2.90 | 3,71% | 96.58% | |
| Высокосоленый | 2.88 | 2.70 | 2.79 | 4,47% | 92.89% | |
| Высокий уровень pH | 2.81 | 2.93 | 2.87 | 2,98% | 95.71% | |
| Низкий уровень pH | 2.76 | 2.79 | 2.77 | 0,99% | 92.48% |
Таблица 2 Базовая выборка Spiking Recovery
3.3 Точность
3.3.1 Повторяемость
Повторите анализ 10 раз для стандартов ДНК HEK293 в концентрации 30 фг/мкл с CV <15%.
| Повторения | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | Иметь в виду | РЕЗЮМЕ% |
| Значение обнаружения (фг/мкл) | 29.51 | 30.02 | 30.13 | 30.16 | 27.99 | 31.01 | 31.05 | 30.95 | 31.02 | 29.86 | 30.17 | 3,15% |
Таблица 3 Результаты повторяемости
3.3.2 Средняя точность
Три экспериментатора независимо друг от друга протестировали стандартные образцы ДНК HEK293 при высоких и низких концентрациях: 300 пг/мкл, 3 пг/мкл и 30 фг/мкл, и для каждой концентрации было сделано по три повтора, а коэффициенты вариации всех девяти полученных данных составили <15%.
| Эксп |
Фактическая концентрация Теоретическая концентрация | ДНК HEK293 (3G) | ||
| 300 пг/мкл | 3 пг/мкл | 30 фг/мкл | ||
| Опыт 1 | Определение 1 | 319,58 | 3.026 | 32.02 |
| Определение 2 | 309,76 | 3.051 | 37.01 | |
| Определение 3 | 309.24 | 3.067 | 36.03 | |
| Опыт 2 | Определение 4 | 308.34 | 2.909 | 29.91 |
| Определение 5 | 308.54 | 2.9 | 29.67 | |
| Определение 6 | 305,83 | 2.921 | 28.85 | |
| Опыт 3 | Определение 7 | 299.11 | 3.035 | 29.36 |
| Решимость 8 | 300.07 | 2.833 | 31.14 | |
| Решимость 9 | 302.03 | 3.033 | 33.07 | |
| / | Иметь в виду | 306.95 | 2.975 | 31.90 |
| / | РЕЗЮМЕ% | 2.03% | 2.83% | 9,26% |
Таблица 4 Результаты промежуточной точности
3.4 Специфичность
Интерференция клеточной геномной ДНК, обычно используемой при производстве биологических препаратов, была оценена на предмет интерференции с реагентами для обнаружения ДНК HEK293, и группа интерференции перекрывалась с контрольной группой, и никакой интерференции не наблюдалось (на рисунке ниже показаны, в порядке убывания, данные по интерференции геномных ДНК CHO, E.coli и Pichia Pastoris с реагентами для обнаружения ДНК HEK293).
Рисунок 2 Результаты эксперимента по интерференции
3.5 Предел количественного определения
ДНК HEK293 была обнаружена при 30 фг/мкл, 20 фг/мкл, 10 фг/мкл и 5 фг/мкл, с 10 повторениями для каждой концентрации. Результаты показали, что CV был <20% при концентрациях 10 фг/мкл и выше. То есть предел количественного определения набора для обнаружения остатков ДНК клетки-хозяина HEK293 (3G) составил 10 фг/мкл.
|
Повторения Тестовый элемент | ДНК HEK293 (3G) (фг/мкл) | |
| Количество | Коэффициент пересчета% | |
| 1 | 11.04 | 110.40% |
| 2 | 9.97 | 99,70% |
| 3 | 11.12 | 111.20% |
| 4 | 11.07 | 110.70% |
| 5 | 11.21 | 112.10% |
| 6 | 9.93 | 99.30% |
| 7 | 10.25 | 102.50% |
| 8 | 10.16 | 101.60% |
| 9 | 10.08 | 100.80% |
| 10 | 10.11 | 101.10% |
| Иметь в виду | 10.49 | / |
| РЕЗЮМЕ% | 5.14% | / |
Рисунок 3 Результат теста qPCR 10fg/μL ДНК HEK293 (3G)
3.6 Надежность
Этот комплект был протестирован и подходит, среди прочего, для следующих инструментов:
| Продавец | Модели инструментов | Эффективность усиления | Р2 | Предел количественного определения (фг/мкл) | РЕЗЮМЕ% |
| Термо | АБИ 7500 | 102.84% | 1 | 10 | 7% |
| Термо | ABI QuantStudio5 | 104.70% | 0,999 | 10 | 9% |
| Шанхай Хунши | СЛАН | 101.46% | 0,999 | 10 | 8% |
Таблица 5 Результаты испытаний пригодности инструментов
3.7 Стабильность
3.7.1 Стабильность при замораживании-оттаивании
Набор для обнаружения остатков ДНК в клетках-хозяевах HEK293 (3G) был протестирован путем повторного замораживания и оттаивания 10 раз, и эффективность набора не пострадала.
|
Тестирование индикаторов Время замораживания-оттаивания | Параметр | время Т0 | Замораживание-оттаивание 10 раз |
| Параметр стандартной кривой | Эффективность усиления | 99,34% | 100,78% |
| Р2 | 1 | 1 | |
| Предел количественного определения (30 фг/мкл) | резюме | 11% | 7% |
Таблица 6 Анализ результатов стабильности при замораживании-оттаивании
3.7.2 Ускоренная стабильность
Набор для обнаружения остатков ДНК клетки-хозяина HEK293 (3G) хранился при температуре 2~8°C в течение 30 дней и 37°C в течение 14 дней соответственно. Ни одна из характеристик набора не была затронута.
|
Тестирование индикаторов Ускорение Температура и Время | Параметр | время Т0 | 37℃ 7 дней | 37℃ 14 дней |
| Параметр стандартной кривой | Эффективность усиления | 103,83% | 101.58% | 100.47% |
| Р2 | 0,999 | 1 | 1 | |
| Предел количественного определения (30 фг/мкл) | РЕЗЮМЕ% | 8% | 5% | 5% |
Таблица 7 Ускоренный анализ результатов стабильности
3.8 Предел пробела
Контроль без шаблона (NTC) представлял собой разбавление шаблона с 96 повторениями значений CT >32 (плюс пороговая линия калибровки ROX, установленная на 0,06).
Рисунок 4 Результаты эксперимента NTC
- 4.Ссылка
4.1 Китайская фармакопейная комиссия (ChPC). Фармакопея Китайской Народной Республики (т. Ⅲ) [S]. Пекин: China Medical Science and Technology Press, стр. 542-543, 2020.
4.2 NMPA, 2007: Общие принципы технического обзора валидации аналитических методов для контроля качества биологических продуктов.
4.3 ICH(2022)《Валидация аналитического метода Q2》, черновая версия.
Информация о заказе