E.coli Набор для обнаружения остатков ДНК клетки-хозяина (2G)
Квалификационное резюме (Кат. №: 4)1308ES60)
- Фон
Данные, обобщенные в этом отчете, получены Yeasen Biotechnology для продукта 'E.coli Host Cell DNA Residue Detection Kit (2G). Обобщенные данные предназначены только для справки пользователя, и пользователю необходимо проверить остаток клетки-хозяина Метод ДНК с использованием собственных образцов для подтверждения того, что метод может соответствовать требованиям пользователя. Всем лабораториям, использующим этот набор, рекомендуется проверить следующие параметры: линейность, диапазон, точность, прецизионность, предел количественного определения, специфичность и надежность.
Yeasen Biotechnology может предоставить подробный отчет о квалификации для этого набора. Если пользователь использует этот отчет, то только пригодность (которая включала точность, Точность и Специфичность) должны быть проверены.
- Экспериментальные материалы и методы
2.1 Набор для обнаружения остатков ДНК в клетках-хозяевах E.coli (2G), поставщик: Yeasen, номер по каталогу: 41308ES60.
2.2 Набор для подготовки образцов остаточной магнитной ДНК MolPure®, производитель: Yeasen, номер по каталогу: 18461ES60.
2.3 Национальный стандарт содержания ДНК E.coli: Кат. 270027, № партии: 201101, концентрация: 96,2 мкг/мл, условия хранения: -70 ℃, приобретен у: Национального института по контролю за продуктами питания и лекарственными средствами.
2.4 Исходные данные: электронная версия была записана в «Экспериментальном отчете». подфайл родительского файла «Набор для определения остатков ДНК клетки-хозяина E.coli (2G)».
2.5 Методы: Материалы и методы работы, используемые для эксперимента, в основном были произведены или установлены компанией Yeasen Biotechnology, которые оценивались и проверялись в течение длительного времени; разработка и производство наборов соответствуют системе ISO 13485.
- Содержание и результаты квалификации
3.1 Дальность обнаружения
Линейный диапазон набора составил 30 фг/мкл~300 пг/мкл с R2=1, а эффективность амплификации составила 101,74% с CV<15% для каждого анализа концентрации.
Рисунок 1. Стандартная кривая количественной ПЦР ДНК E.coli (2G)
3.2 Точность
3.2.1 Отклонение от Национальный стандарт содержания ДНК E.coli
Референсный материал ДНК E.coli в каждой партии набора был откалиброван с использованием Национального стандарта содержания ДНК E.coli. Референсный материал ДНК Yeasen в основном не имел отклонений от Национального стандарта содержания ДНК E.coli. калибровочной кривой, а отклонение значения анализа составило <5%.
3.2.2 Рвосстановление
3.2.2.1 Эксперимент по восстановлению с добавлением холостого образца
Образцы стандартов ДНК E.coli в высоких и низких концентрациях: 300 пг/мкл, 3 пг/мкл и 30 фг/мкл были подготовлены соответственно и проанализированы после экстракции с использованием набора для предварительной обработки образцов остаточной ДНК с помощью метода магнитных частиц (для каждого образца было проведено 2 повторных экстракции и 3 повторных анализа для каждой экстракции), а также были проанализированы показатели извлечения образцов и коэффициенты вариации.
Для различных концентраций образцов ДНК степень извлечения составила от 70% до 130%, а коэффициент вариации составил <20%.
| Тип образца | Теоретическая концентрация | Извлечение 1 означает | Извлечение 2 означает | Средняя концентрация | резюме | Восстановление |
| Пустой образец | / | / | / | / | / | / |
| Образец восстановления 1 | 300 пг/мкл | 250,56 пг/мкл | 262.11 пг/мкл | 256.33 пг/мкл | 4.41% | 85.44% |
| Образец восстановления 2 | 3 пг/мкл | 2.29 пг/мкл | 2.56 пг/мкл | 2.42 пг/мкл | 7.09% | 80,77% |
| Образец восстановления 3 | 30 фг/мкл | 33.62 фг/мкл | 32.61 фг/мкл | 33.12 фг/мкл | 14.28% | 110.39% |
Таблица 1. Восстановление после добавления холостого образца
3.2.2.2 Эксперимент по восстановлению с имитацией добавления образца
Образцы одинаковой концентрации (3 пг/мкл ДНК E.coli) были извлечены (для каждого образца было проведено 2 повторных экстракции и для каждой экстракции было проведено 3 повторных анализа) с 5 различными фоновыми растворами (с высоким содержанием белка, высоким содержанием нуклеиновых кислот, высоким и низким pH, высоким содержанием соли), после чего были проанализированы показатели восстановления образцов и CV.
Степень извлечения образцов ДНК для различных фоновых растворов варьировалась от 70% до 130%, при этом все коэффициенты вариации (CV) составляли <20%.
| Тип образца | Теоретическая концентрация | Извлечение 1 означает | Извлечение 2 означает | Средняя концентрация | резюме | Восстановление |
| Базовый образец | / | / | / | / | / | / |
| Высокое содержание белка | 3 пг/мкл | 2.25 | 2.23 | 2.24 | 1,09% | 74,74% |
| Высокая ядерная кислота | 3.93 | 3.96 | 3.95 | 1,56% | 131,52% | |
| Высокосоленый | 2.69 | 2.67 | 2.68 | 2.63 | 89.20% | |
| Высокий уровень pH | 2.90 | 3.67 | 3.29 | 13,82% | 109,55% | |
| Низкий уровень pH | 2.77 | 2.87 | 2.82 | 3,41% | 94.01% |
Таблица 2 Базовая выборка Spiking Recovery
3.3 Точность
3.3.1 Повторяемость
Повторите анализ 10 раз для стандартов ДНК E.coli в концентрации 3 пг/мкл с CV <15%.
| Повторения | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | Иметь в виду | резюме |
| Значение обнаружения (фг/мкл) | 3.16 | 2.87 | 2.97 | 2.86 | 2.81 | 2.97 | 3.14 | 3.21 | 3.14 | 3.1 | 3.02 | 4,78% |
Таблица 3 Результаты повторяемости
3.3.2 Средняя точность
Три экспериментатора независимо друг от друга протестировали стандартные образцы ДНК E.coli при высоких и низких концентрациях: 300 пг/мкл, 3 пг/мкл и 30 фг/мкл, и для каждой концентрации было сделано по три повтора, а коэффициент вариации всех девяти полученных данных составил <15%.
| Эксп |
Фактическая концентрация Теоретическая концентрация | ДНК E.coli (2G) | ||
| 300 пг/мкл | 3 пг/мкл | 30 фг/мкл | ||
| Опыт 1 | Определение 1 | 295,65 | 3.22 | 26.90 |
| Определение 2 | 287.71 | 3.24 | 32.00 | |
| Определение 3 | 300.23 | 3.17 | 27.50 | |
| Опыт 2 | Определение 4 | 306.06 | 3.13 | 37.30 |
| Определение 5 | 299,76 | 3.02 | 32.70 | |
| Определение 6 | 299.63 | 3.02 | 34.00 | |
| Опыт 3 | Определение 7 | 266.70 | 3.01 | 35.90 |
| Решимость 8 | 272.89 | 3.09 | 40.70 | |
| Решимость 9 | 276.51 | 3.01 | 35.20 | |
| / | Иметь в виду | 289,46 | 3.10 | 33.60 |
| / | резюме | 4,89% | 3,02% | 13,18% |
Таблица 4 Результаты промежуточной точности
3.4 Специфичность
Интерференция клеточной геномной ДНК, обычно используемой при производстве биологических препаратов, была оценена на предмет интерференции с реагентами для обнаружения ДНК E.coli, и группа интерференции перекрывалась с контрольной группой, и никакой интерференции не наблюдалось (на рисунке ниже показаны, в порядке убывания, данные интерференции геномных ДНК HEK293, Vero и CHO с реагентами для обнаружения ДНК E.coli).
Рисунок 2 Результаты эксперимента по интерференции
3.5 Предел количественного определения
ДНК E.coli была обнаружена при 50 фг/мкл, 40 фг/мкл, 30 фг/мкл, 10 фг/мкл и 5 фг/мкл, с 10 повторениями для каждой концентрации. Результаты показали, что CV был <20% при концентрациях 30 фг/мкл и выше. То есть предел количественного определения набора для обнаружения остатков ДНК клетки-хозяина E.coli (2G) составил 30 фг/мкл.
|
Повторения Тестовый элемент | ДНК E.coli (2G) (фг/мкл) | |
| Количество | Коэффициент пересчета | |
| 1 | 29.43 | 98.09% |
| 2 | 29.51 | 98.35% |
| 3 | 32.04 | 106.79% |
| 4 | 26.07 | 86.89% |
| 5 | 34.06 | 113,53% |
| 6 | 33.54 | 111,79% |
| 7 | 26.95 | 89,82% |
| 8 | 27.38 | 91.26% |
| 9 | 27.04 | 90.13% |
| 10 | 26.10 | 87.02% |
| Иметь в виду | 29.21 | / |
| резюме | 10.40% | / |
Рисунок 3 Результат теста qPCR 30fg/μL E.coli DNA (2G)
3.6 Надежность
Этот комплект был протестирован и подходит, среди прочего, для следующих инструментов:
| Продавец | Модели инструментов | Эффективность усиления | Р2 | Предел количественного определения (фг/мкл) | резюме |
| Термо | АБИ 7500 | 101.74% | 1 | 30 | 13.30% |
| Термо | ABI QuantStudio5 | 100.46% | 1 | 30 | 12.40% |
| Био-Рад | CFX96 | 99.20% | 0,999 | 30 | 13,76% |
| Шанхай Хунши | СЛАН | 100.40% | 0,999 | 30 | 11,67% |
Таблица 5 Результаты испытаний пригодности инструментов
3.7 Стабильность
3.7.1 Стабильность при замораживании-оттаивании
Набор для обнаружения остатков ДНК клеток-хозяев E.coli (2G) был протестирован путем повторного замораживания и оттаивания 10 раз, и эффективность набора не пострадала.
|
Тестирование индикаторов Время замораживания-оттаивания | Параметр | время Т0 | Замораживание-оттаивание 10 раз |
| Параметр стандартной кривой | Эффективность усиления | 98.23% | 100.20% |
| Р2 | 1 | 0,999 | |
| Предел количественного определения (30 фг/мкл) | резюме | 15.07% | 9,66% |
Таблица 6 Анализ результатов стабильности при замораживании-оттаивании
3.7.2 Ускоренная стабильность
Э.Набор для обнаружения остатков ДНК клеток-хозяев coli (2G) хранился при температуре 2~8°C в течение 30 дней и 37°C в течение 14 дней соответственно. Ни одна из характеристик набора не была затронута.
|
Тестирование индикаторов Ускорение Температура и Время | Параметр | Эксперимент 1 | Эксперимент 2 | ||
| время Т0 | 2~8℃ 30 Дни | время Т0 | 37℃ 14 дней | ||
| Параметр стандартной кривой | Эффективность усиления | 97,77% | 99,81% | 98.39% | 98,65% |
| Р2 | 1 | 1 | 1 | 1 | |
| Предел количественного определения (30 фг/мкл) | резюме | 11.04% | 13,79% | 9,55% | 14,55% |
Таблица 7 Ускоренный анализ результатов стабильности
- 4.Ссылка
4.1 Китайская фармакопейная комиссия (ChPC). Фармакопея Китайской Народной Республики (т. Ⅲ) [S]. Пекин: China Medical Science and Technology Press, стр. 542-543, 2020.
4.2 NMPA, 2007: Общие принципы технического обзора валидации аналитических методов для контроля качества биологических продуктов.
4.3 ICH(2022)《Валидация аналитического метода Q2》, черновая версия.
Информация о заказе