HEK293 Host Cell DNA Rest Detection Kit (3G) Valideringsrapport

HEK293 Värdcells-DNA-restdetektionskit (3G)

Kvalifikationssammanfattning (Katnummer: 41331ES60)

1. Bakgrund

Uppgifterna som sammanfattas i denna rapport är utförda av Yeasen Biotechnology för 'HEK293 Värdcells-DNA Residue Detection Kit (3G)' produkt. Sammanfattningsdata är endast för användarens referens, och användaren måste verifiera värdcellsresten DNA-metoden genom att använda sina egna prover för att bekräfta att metoden kan uppfylla användarens krav. Alla laboratorier som använder detta kit rekommenderas att verifiera följande parametrar: Linjäritet, Område, Noggrannhet, Precision, Kvantifieringsgräns, Specificitet och Robusthet.

Yeasen Biotechnology kan tillhandahålla den detaljerade kvalificeringsrapporten för detta kit. Om användaren använder den här rapporten är det bara lämpligheten (som inkluderade Precision, Noggrannhet och specificitet) bör verifieras.

2. Experimentella material och metoder

2.1 HEK293 Värdcells DNA-restdetektionskit (3G), leverantör: Yeasen, Kat.nr.: 41331ES60.

2.2 MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit, leverantör: Yeasen, Kat.nr.: 18461ES60.

2.3 Originaldata: den elektroniska versionen registrerades i "Experimentell rapport" underfilen till den överordnade filen 'HEK293 Värdcells-DNA-restdetektionskit (3G)'.

2.4 Metoder: Materialen och operationsmetoderna som användes för experimentet har i princip producerats eller satts av Yeasen Biotechnology, vilka utvärderades och verifierades under lång tid, utvecklingen och tillverkningen av satsen följs ISO 13485-systemet.

3. Kvalifikationens innehåll och resultat

3.1 Detektionsområde

Det linjära området för kitet var 30 fg/μL~300 pg/μL med R²≥0,998, och amplifieringseffektiviteten var 90%~110% intervall med CV <15% för varje koncentrationsanalys.

Figur 1 HEK293 DNA (3G) qPCR Standard Curve

3.2 Noggrannhet

3.2.1 Råterhämtning

3.2.1.1 Experiment för återhämtning av tomprovsspik

Prover på HEK293 DNA-standarder vid höga och låga koncentrationer: 300 pg/μL, 3 pg/μL och 30 fg/μL bereddes respektive och analyserades efter extraktion med hjälp av den magnetiska pärlmetoden för resterande DNA-prov Pre-treatment Kit (2 extraktionsreplikat utfördes för varje prov, och 3 provextraheringar gjordes för varje provextraktion, och CV-proverna analyserades och återupptogs).

För olika koncentrationer av DNA-prov varierade återvinningarna från 70 % till 130 %, och CV:n var alla <20 %.

Provtyp	Teoretisk koncentration	Extrahera 1 medelvärde	Extrahera 2 medelvärde	Genomsnittlig koncentration	CV	Återhämtning
Tomt prov	/	/	/	/	/	/
Återvinningsprov 1	300 pg/μL	306,81 pg/μL	279,57 pg/μL	293,82 pg/μL	6,56 %	97,94 %
Återvinningsprov 2	3 pg/μL	3.11 pg/μL	2,99 pg/μL	3.09 pg/μL	2,75 %	103,00 %
Återvinningsprov 3	30 fg/μL	31.02 fg/μL	30,63 fg/μL	30,83 fg/μL	0,89 %	102,77 %

Tabell 1 Återställning av tomprovsspik

3.2.1.2 Simulerat provspikåterställningsexperiment

Prover av samma koncentration (3 pg/μL HEK293 DNA) extraherades (2 extraktionsreplikat utfördes för varje prov och 3 analysreplikat gjordes för varje extraktion) med 5 olika bakgrundslösningar (högt protein, hög nukleinsyra, högt och lågt pH, högt salt) och provåtervinning och CV analyserades.

DNA-prover för olika bakgrundslösningar varierade från 70 % till 130 %, med alla CV:n <20 %.

Provtyp	Teoretisk koncentration	Extrahera 1 medelvärde	Extrahera 2 medelvärde	Genomsnittlig koncentration	CV	Återhämtning
Grundprov	/	/	/	/	/	/
Högt protein	3 pg/μL	2,65	2,80	2,73	3,80 %	90,87 %
Hög kärnsyra		2,82	2,97	2,90	3,71 %	96,58 %
Högsalt		2,88	2,70	2,79	4,47 %	92,89 %
Högt pH		2,81	2,93	2,87	2,98 %	95,71 %
Lågt pH		2.76	2,79	2,77	0,99 %	92,48 %

Tabell 2 Grundläggande prov återhämtning av spik

3.3 Precision

3.3.1 Repeterbarhet

Upprepa analysen 10 gånger för HEK293 DNA-standarder vid en koncentration av 30 fg/μL med en CV <15%.

Upprepningar	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	Betyda	CV %
Detektionsvärde (fg/μL)	29,51	30.02	30.13	30.16	27,99	31.01	31.05	30,95	31.02	29,86	30.17	3,15 %

Tabell 3 Upprepningsresultat

3.3.2 Mellanprecision

Tre experimentörer testade oberoende HEK293 DNA-standardprover vid höga och låga koncentrationer: 300 pg/μL, 3 pg/μL och 30 fg/μL, och tre replikat gjordes för varje koncentration, och CV:n för alla nio erhållna data var <15%.

Exp	Faktisk koncentration Teoretisk koncentration	HEK293 DNA (3G)
		300 pg/uL	3 pg/ul	30 fg/uL
Exp 1	Beslutsamhet 1	319,58	3,026	32.02
	Beslutsamhet 2	309,76	3,051	37.01
	Beslutsamhet 3	309,24	3,067	36.03
Exp 2	Beslutsamhet 4	308,34	2,909	29,91
	Beslutsamhet 5	308,54	2.9	29,67
	Beslutsamhet 6	305,83	2,921	28.85
Exp 3	Beslutsamhet 7	299,11	3,035	29,36
	Beslutsamhet 8	300,07	2,833	31.14
	Beslutsamhet 9	302.03	3,033	33.07
/	Betyda	306,95	2,975	31,90
/	CV %	2,03 %	2,83 %	9,26 %

Tabell 4 Resultat med medelprecision

3.4 Specificitet

Interferensen av cellulärt genomiskt DNA som vanligtvis används i produktionen av biologiska läkemedel bedömdes med avseende på interferens med HEK293 DNA-detektionsreagens, och interferensgruppen överlappade kontrollgruppen och ingen interferens sågs (figuren nedan visar, i ordning, interferensdata för CHO, E.coli och Pichia Pastoris genomiska DNA med HEK293-detektionsreagens-DNA).

Figur 2 Interferensexperimentresultat

3.5 Kvantifieringsgräns

HEK293 DNA detekterades vid 30 fg/μL, 20 fg/μL, 10 fg/μL och 5 fg/μL, med 10 replikat för varje koncentration. Resultaten visade att CV var <20 % vid koncentrationer på 10 fg/μL och över. Det vill säga gränsen för kvantifiering av HEK293-värdcells-DNA-resterdetektionskit (3G) var 10 fg/μL.

Upprepningar Testobjekt	HEK293 DNA (3G) (fg/μL)
	Kvantitet	Omräkningskvot %
1	11.04	110,40 %
2	9,97	99,70 %
3	11.12	111,20 %
4	11.07	110,70 %
5	11.21	112,10 %
6	9,93	99,30 %
7	10.25	102,50 %
8	10.16	101,60 %
9	10.08	100,80 %
10	10.11	101,10 %
Betyda	10.49	/
CV %	5,14 %	/

Figur 3 10fg/μL HEK293 DNA (3G) qPCR-testresultat

3.6 Robusthet

Detta kit har testats och är lämpligt för, men inte begränsat till, följande instrument:

Försäljare	Instrumentmodeller	Amplifieringseffektivitet	R2	Kvantifieringsgräns (fg/μL)	CV %
Termo	ABI 7500	102,84 %	1	10	7 %
Termo	ABI QuantStudio5	104,70 %	0,999	10	9 %
Shanghai Hongshi	SLAN	101,46 %	0,999	10	8 %

Tabell 5 Testresultat för instrumentets lämplighet

3.7 Stabilitet

3.7.1 Frys-tina stabilitet

HEK293 Host Cell DNA Residue Detection Kit (3G) testades genom upprepad frysning och upptining 10 gånger, och satsens prestanda påverkades inte.

Testindikatorer Frys-tina tider	Parameter	T0 tid	Frys-tina 10 gånger
Standardkurvaparameter	Amplifieringseffektivitet	99,34 %	100,78 %
	R2	1	1
Kvantifieringsgräns (30 fg/μL)	CV	11 %	7 %

Tabell 6 Analys av frys-upptining stabilitetsresultat

3.7.2 Accelererad stabilitet

HEK293 Host Cell DNA Residue Detection Kit (3G) förvarades vid 2~8°C i 30 dagar respektive 37°C i 14 dagar. Ingen av satsens prestanda påverkades.

Testindikatorer Accelerationstemperatur och tid	Parameter	T0 tid	37℃ 7 dagar	37℃ 14 dagar
Standardkurvaparameter	Amplifieringseffektivitet	103,83 %	101,58 %	100,47 %
	R2	0,999	1	1
Kvantifieringsgräns (30 fg/μL)	CV %	8 %	5 %	5 %

Tabell 7 Accelererad stabilitetsresultatanalys

3.8 Gräns ​​för tomt

Ingen mallkontroll (NTC) var en mallspädning med 96 repetitioner av CT-värden >32 (plus ROX-kalibreringströskellinjen satt till 0,06).

Figur 4 NTC-experimentresultat

4. 4.Hänvisning

4.1 Chinese Pharmacopoeia Commission (ChPC). Farmakopén för Folkrepubliken Kina (Vol Ⅲ) [S]. Peking: China Medical Science and Technology Press, s. 542-543, 2020.

4.2 NMPA, 2007: Allmänna principer för teknisk granskning av analytisk metodvalidering för kvalitetskontroll av biologiska produkter.

4.3 ICH(2022)《Analytisk metodvalidering Q2》, utkastversion.

Beställningsinformation