Yeasen och Molefuture utvecklade termotoleranta, hög trovärdighet T4 DNA -ligas för att bekämpa falsk ligering

Yeasen och Molefuture introducerar avancerad T4 DNA-ligas för att övervinna molekylärbiologiska utmaningar

Yeasen och Molefuture har tillsammans utvecklat ett banbrytande T4 DNA-ligas med hjälp av deras ZymeEditor-plattform, som tar itu med nyckelfrågor inom molekylärbiologi och DNA-bibliotekskonstruktion för nästa generations sekvensering (NGS). Traditionellt T4 DNA-ligas står inför utmaningar som dålig stabilitet, hög adapterdimerbildning och hög DNA-fragmentsjälvligering. Detta nya enzym syftar till att övervinna dessa begränsningar.

T4 DNA-ligas, ett ATP-beroende enzym, har en kompakt spiralformad DNA-bindande domän (DBD), en nukleotidyltransferas (NTas) domän och en OB-faldig domän. Genom att analysera proteinstrukturen identifierade forskare nyckelrester inom 5 till 20Å från DNA-substratet. Med hjälp av avancerade beräkningsverktyg, i silico-screening och struktur-funktionsanalys, designade de mutanter genom konsensussekvensanpassning, med strukturell-funktionella insikter.

Förutom rationell design använde teamet MTPS-metoden för riktad evolution, screening över 10 000 mutanter för stabilitet, aktivitet och kvarvarande aktivitet. Lovande kandidater genomgick rigorös rening och testning. Detaljerad karaktärisering följde, utvärdering av aktivitet, stabilitet, adaptersjälvligering, DNA-fragmentsjälvligering och DNA-utbyte.

Forskarna kombinerade DNA-rationell design och riktade mutationer på G1-mutanter för att utveckla exceptionella varianter som lämpar sig för olika tillämpningar. Detta omfattande tillvägagångssätt har resulterat i ett mycket effektivt och pålitligt T4 DNA-ligas, redo att förbättra molekylärbiologisk forskning och DNA-bibliotekskonstruktion i NGS.