Phiên mã ngược là quá trình chuyển đổi RNA thành DNA bổ sung (cDNA), được trung gian bởi enzyme phiên mã ngược. Với sự hiện diện của các đoạn mồi gắn, phiên mã ngược đầu tiên liên kết với khuôn mẫu RNA. Hoạt động DNA polymerase phụ thuộc RNA của phiên mã ngược tổng hợp cDNA bằng cách kết hợp dNTP từ hỗn hợp phản ứng. Quá trình này dẫn đến sự hình thành sợi lai cDNA:RNA, được gọi là tổng hợp cDNA sợi đầu tiên.
Phiên mã ngược của virus gây bệnh bạch cầu ở chuột Moloney (M-MLV) là một trong những phiên mã ngược thường được sử dụng trong các quy trình xét nghiệm sinh học phân tử. Để đạt được hiệu quả phiên mã ngược cao hơn, độ ổn định nhiệt tốt hơn và tốc độ tổng hợp cDNA tăng lên, phiên mã ngược ban đầu thường được biến đổi gen. Hiện nay, các thuốc thử phiên mã ngược có trên thị trường thường yêu cầu thời gian phản ứng từ 15 đến 30 phút, tương đối dài. Khi số lượng mẫu phản ứng lớn, tổng thời gian sử dụng có thể tăng đáng kể. Các sản phẩm phiên mã ngược 5 phút hiện có của YESSEN có thể hoàn tất quy trình phiên mã ngược chỉ trong vòng 5 phút, giúp tiết kiệm thời gian và đạt hiệu quả cao.
| Psản phẩm Pvị trí | Tên sản phẩm | Con mèo# |
| Hỗn hợp phiên mã ngược nhanh, hiệu quả và năng suất cao | Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix cho qPCR | 11156ES |
| Hỗn hợp phiên mã ngược nhanh, hiệu quả và năng suất cao (có loại bỏ gDNA) | Hifair™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix cho qPCR (DNA digester plus) | 11155ES |
| Hoàn thành nhanh chóng một bước loại bỏ gDNA và trộn phiên mã ngược | Hifair™ AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix cho qPCR | 11151ES |
| Bộ dụng cụ phiên mã ngược nhanh chóng lựa chọn mồi linh hoạt (có loại bỏ gDNA) | 11150ES | |
| Bộ dụng cụ phiên mã ngược nhanh chóng lựa chọn mồi linh hoạt (có thuốc nhuộm theo dõi và loại bỏ gDNA) | Hifair™ Bộ tổng hợp cDNA sợi 1 AdvanceFast | 11149ES |
Khuyến nghị của Boutique Một
Hỗn hợp phiên mã ngược nhanh, hiệu quả và năng suất cao (có loại bỏ gDNA) (Mã số #11155ES)
Năng suất phiên mã ngược cao từ các khuôn mẫu khác nhau
| Vật mẫu | 293T Tế bào | Cây Arabidopsis thaliana | Chuột | Gan cá |
| 11155ES | 23,4↓ | 19.6↓ | 24.9↓ | 21.1↓ |
| Thương hiệu A | 24,9 | 21.3 | 27,5 | 21.3 |
| Thương hiệu B | 26,1 | 20,5 | 27,1 | 23.1 |
| Thương hiệu C | 25,7 | 19.8 | 27,3 | 21,9 |
| Thương hiệu D | 24.3 | 21.3 | 28,1 | 24,5 |
Hình. Phiên mã ngược được thực hiện bằng cách sử dụng các khuôn mẫu RNA từ tế bào 293T của người, Arabidopsis thaliana, gan chuột và gan cá. Các nhãn hiệu A, B, C và D đều là thuốc thử phiên mã ngược tiêu hóa hai bước với thời gian phiên mã ngược thay đổi từ 15 đến 20 phút. Kết quả thử nghiệm cho thấy bộ dụng cụ phiên mã ngược 5 phút Hifair 11155ES vượt trội với năng suất cao hơn so với các nhãn hiệu khác và giá trị Ct thấp hơn.
Khuyến nghị của Boutique Hai
Tiêu hóa một bước 5 phút & Premix phiên mã ngược (Mã số #11151ES)
Năng suất phiên mã ngược cao
Hình. Sử dụng RNA tế bào 293T của người làm khuôn mẫu, ba gen đã được thử nghiệm tương ứng. Các nhãn hiệu A, B và C đều là thuốc thử loại bỏ gDNA một bước & phiên mã ngược. Kết quả thử nghiệm cho thấy với lượng đầu vào là 1 μg và 10 ng RNA tổng số, sản lượng phiên mã ngược với bộ dụng cụ 11151ES cao hơn các nhãn hiệu khác, với giá trị Ct nhỏ hơn.
Hình. Sử dụng RNA Arabidopsis thaliana làm khuôn mẫu, các nhãn hiệu A, B và C đều là thuốc thử loại bỏ gDNA một bước & phiên mã ngược. Kết quả thử nghiệm cho thấy với lượng đầu vào là 1 μg và 10 ng RNA tổng số, sản lượng phiên mã ngược với bộ dụng cụ 11151ES cao hơn các nhãn hiệu khác, với giá trị Ct nhỏ hơn.
Độ nhạy tuyệt vời
Hình. Sử dụng RNA tế bào 293T của người làm khuôn mẫu, các gen có hàm lượng GC 30%, GC 50%, GC 60% và GC 70% đã được khuếch đại. Tổng lượng RNA đầu vào là 100 pg, 1 ng, 10 ng, 100 ng và 1 μg đã được sử dụng để phiên mã ngược sau đó là phát hiện định lượng huỳnh quang. Kết quả cho thấy 11151ES có thể chứa phiên mã ngược cho các đầu vào RNA trong khoảng từ 100 pg đến 1 μg.
Khuyến nghị của Boutique Tđây
Bộ xét nghiệm phiên mã ngược nhanh 5 phút (Mã số mèo #11149/11150ES)
Độ nhạy cao, với giới hạn phát hiện tối thiểu xuống tới 10 pg
Hình. Sử dụng tổng RNA từ tế bào 293T làm khuôn mẫu, phiên mã ngược được thực hiện với 11149ES và cDNA thu được được đưa vào phân tích định lượng qPCR. Kết quả cho thấy 11149ES có thể phiên mã ngược thành công các đầu vào RNA trong khoảng từ 10 pg đến 1 μg, đảm bảo kết quả định lượng chính xác.
Hiệu suất khuếch đại tốt, với khả năng khuếch đại dài nhất của một đoạn 14 kb
Nhân vật.Sử dụng tổng RNA từ tế bào 293T làm khuôn mẫu, phiên mã ngược được thực hiện với 11149ES và cDNA thu được được tiến hành phát hiện bằng PCR. Kết quả cho thấy 11149ES có khả năng tổng hợp các đoạn cDNA có chiều dài từ 1 kb đến 14 kb, với PCR tiếp theo có một số tình huống áp dụng nhất định. Nếu cần phiên mã ngược trực tiếp các đoạn dài hơn 10 kb, nên kéo dài thời gian phiên mã ngược lên 20-30 phút để đảm bảo thu được các đoạn cuối cùng.
So sánh hiệu quả phiên mã ngược
| Lượng đầu vào RNA | Giá trị Ct | |
| 11149ES | Thương hiệu A | |
| 1 μg | 15.2 | 15,5 |
| 100 ng | 18.0 | 18,5 |
| 10 ng | 21 | 21,7 |
| 1 ng | 24,5 | 25,1 |
| 100 trang | 29.1 | 29,7 |
| 10 trang | 32,7 | 34,3 |
Hình. Sử dụng tổng RNA từ tế bào 293T làm khuôn mẫu, phiên mã ngược được thực hiện với 11149ES và Brand A, trong đó 11149ES không trải qua bước loại bỏ gDNA. cDNA thu được đã được đưa vào phân tích định lượng qPCR. Kết quả cho thấy thời gian phiên mã ngược của Brand A là 13 phút, trong khi đối với 11149ES là 5 phút. Phân tích định lượng các sản phẩm khác nhau cho thấy giá trị Ct của 11149ES nhỏ hơn hoặc tương tự như giá trị của thương hiệu cạnh tranh, cho thấy hiệu quả phiên mã ngược trong 5 phút của 11149ES cao hơn hoặc gần bằng hiệu quả của Brand A.
| Lượng đầu vào RNA | Giá trị Ct | |
| 11149ES | Thương hiệu B | |
| 1 μg | 16.2 | 17.4 |
| 100 ng | 19.0 | 20,5 |
| 10 ng | 22 | 23,8 |
| 1 ng | 26 | 27,9 |
| 100 trang | 31,4 | 33.2 |
| 10 trang | 32,9 | 35,6 |
Nhân vật.Sử dụng tổng RNA từ tế bào 293T làm khuôn mẫu, phiên mã ngược được thực hiện với 11149ES và Brand B, trong đó 11149ES không trải qua bước loại bỏ gDNA. cDNA thu được đã được đưa vào phân tích định lượng qPCR. Kết quả cho thấy thời gian phiên mã ngược của Brand B là 20 phút, trong khi đối với 11149ES là 5 phút. Phân tích định lượng các lượng chất nền khác nhau cho thấy giá trị Ct của 11149ES nhỏ hơn hoặc tương tự như giá trị của Brand B, cho thấy hiệu quả phiên mã ngược trong 5 phút của 11149ES cao hơn hoặc gần bằng hiệu quả của Brand B.
Sản phẩm liên quan được đề xuất
| Phương pháp | Psản phẩm Pvị trí | Tên sản phẩm | Con mèo# |
| qPCR dựa trên thuốc nhuộm | Premix định lượng phổ biến có độ đặc hiệu cao (Dựa trên thuốc nhuộm) | Hieff UNICON™ qPCR SYBR Master Mix tiên tiến | 11185ES |
| Hỗn hợp định lượng phổ biến có độ nhạy cao (Dựa trên thuốc nhuộm) | 11184ES | ||
| Phiên mã ngược | Tiêu hóa một bước 5 phút và hỗn hợp phiên mã ngược (cho qPCR) | Hifair™ AdvanceFast One-step RT-gDNA Digestion SuperMix cho qPCR | 11151ES |
| Phiên mã ngược nhanh trong 5 phút, có khả năng tổng hợp cDNA lên đến 14 kb, với việc loại bỏ gDNA (cho PCR/qPCR) - Phiên bản Tracer | Hifair™ Bộ tổng hợp cDNA sợi 1 AdvanceFast | 11149ES | |
| Phiên mã ngược nhanh trong 5 phút, có khả năng tổng hợp cDNA lên đến 14 kb, với việc loại bỏ gDNA (cho PCR/qPCR) | Hifair™ Bộ tổng hợp cDNA sợi 1 AdvanceFast (Không nhuộm) | 11150ES | |
| Premix tổng hợp cDNA sợi đầu tiên chất lượng cao, có loại bỏ gDNA (cho qPCR) | Hifair™ III 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix cho qPCR (gDNA digester plus) | 11141ES |