——Nhiều kiểu gen hơn, ít thời gian hơn và ít thuốc thử hơn
Phân tích kiểu gen dựa trên PCR và các thí nghiệm khác thường yêu cầu tinh chế DNA bộ gen từ các mẫu. Khi có nhiều mẫu cần thử nghiệm, quá trình tinh chế DNA bộ gen tốn thời gian, lặp đi lặp lại và tốn kém.
PCR thông minh: PCR trực tiếp
Hình 1 Quy trình khuếch đại PCR trực tiếp
A. Phương pháp trực tiếp: Lấy một lượng nhỏ mẫu và trực tiếp thêm vào PCR Master Mix để định danh bằng PCR.Ưu điểm kỹ thuật
Trực tiếp: Không cần phải tinh chế DNA tốn kém và mất thời gian.
Nhanh chóng: Chuẩn bị mẫu hoàn tất trong 10 phút và phản ứng PCR hoàn tất chỉ trong 30 phút.
Đơn giản: Mẫu có thể được phân hủy mà không cần cắt hoặc nghiền, và hỗn hợp PCR được trộn sẵn, giúp giảm số bước hút mẫu.
Tiết kiệm: Sử dụng lượng vật liệu ít.
Hiệu suất cao: Phản ứng phân hủy có thể được hoàn thành trong đĩa 96 giếng.
Kháng ức chế: Có khả năng chịu đựng nhiều mẫu động vật và thực vật khác nhau.
Quy trình thử nghiệm bộ dụng cụ PCR trực tiếp
Dòng sản phẩm này sử dụng hệ thống ly giải protease độc đáo để ly giải mẫu. Dung dịch ly giải có thể được sử dụng trực tiếp làm khuôn mẫu và kết hợp với PCR Master Mix có trong bộ dụng cụ để khuếch đại gen.
Hình 2 Quy trình thí nghiệm PCR trực tiếp mô chuột
Quả sung.3 Quy trình thí nghiệm PCR trực tiếp trên mô thực vật
Bảng lựa chọn sản phẩm PCR trực tiếp
| Dòng sản phẩm | PCR trực tiếp chuột thế hệ thứ hai | |||
| Số sản phẩm | 10189ES | 10185ES | 10188ES | 10187ES |
| Thông số kỹ thuật | 20 tấn/50 tấn/200 tấn/500 tấn | 50 tấn/200 tấn | 20 tấn/50 tấn/200 tấn/500 tấn | 50 tấn/200 tấn |
| Đặc trưng | ||||
| Chiều dài Amplicon | ≤5kb | ≤1kb | ≤8kb | ≤1kb |
| Thời gian mở rộng (s/kb) | 3-20 giây | 30 giây | ≤2 kb: 3-5 giây ≤8 kb: 10 giây | 60 giây |
| Sinh vật áp dụng | Chuột, Chuột cống | Chuột, Chuột cống | Con người, Chuột, Dê, Gà, Lợn, v.v. | Gạo, ngô, thuốc lá, hạt cải dầu, lúa mì, đậu nành, v.v. |
| Các loại vải/vật liệu áp dụng | Đuôi chuột, tai chuột, ngón chân (có cơ) và các cơ quan khác | Đuôi chuột, tai chuột, ngón chân (có cơ) và các cơ quan khác | Máu tươi chứa các chất chống đông máu thông thường như EDTA, heparin, citrate, máu đông lạnh và các đốm máu khô thương mại như Whatman903® và FTA® | Lá non, Lá già, Cây con, Thân non |
| Sử dụng mẫu | Mô: 5 mg Đuôi chuột: 1-5 mm | Mô: 5-10 mg Đuôi chuột: 1-5 mm | Máu toàn phần: 0.5%-20% Whatman® đốm máu khô: 1 mm2 | Lá: 1-10 mm Hạt: 1-3 mm |
| Thời gian giải phóng bộ gen | 5-10 phút | 15 phút | 0-3 phút | 0-10 phút |
| Cấu trúc cuối sản phẩm | Đầu cùn | Đầu cùn | Đầu cùn | Đầu cùn |
| Nhiệt độ ủ | Tm-(2~5)℃ | Tm-(2~5)℃ | Tm-(1~2)℃ | Tm-(2~5)℃ |
| Phạm vi cắt GC | 29-70% | 30-70% | 30-75% | 40-65% |
| Hoạt động của exonuclease 5'-3' | Đúng | Đúng | Đúng | Đúng |
| Ứng dụng | ||||
| Kiểu gen | Đúng | Đúng | Đúng | Đúng |
| PCR đa mồi | Lên đến 5x |
| Lên đến 3-4x |
|
| Khuếch đại mẫu trực tiếp | Đúng | Đúng | Đúng | Đúng |
| Các tính năng khác | ||||
| Chỉ số điện di | Không màu | Màu xanh da trời | Không màu | Màu xanh da trời |
| Khởi động nóng | Đúng | Đúng | Đúng | Đúng |
| Đã trộn sẵn/Bộ | Bộ sản phẩm (có Mix) | Bộ sản phẩm (có Mix) | Bộ sản phẩm (có Mix+buffer) | Bộ sản phẩm (có Mix) |
Ưu điểm của sản phẩm
Taq DNA Polymerase được cải tiến là sự đảm bảo cho phản ứng PCR trực tiếp: Nó có khả năng chịu đựng tuyệt vời với chất ức chế.
Khi sử dụng các mẫu không tinh khiết làm khuôn mẫu, nhiều thành phần ức chế phản ứng PCR được đưa vào. Khó có thể đạt được kết quả lý tưởng, hoặc thậm chí không thể thực hiện khuếch đại PCR, bằng các hệ thống phản ứng PCR thông thường và Taq DNA polymerase. PCR Mix trong loạt bộ dụng cụ này là premix được tối ưu hóa công thức, sử dụng Taq DNA Polymerase đã sửa đổi, giúp tăng khả năng liên kết với DNA khuôn mẫu và có khả năng chịu đựng cao hơn với các chất ức chế PCR thông thường, do đó có khả năng thích ứng với khuôn mẫu rộng hơn.
Hình 4. Hỗn hợp PCR trong Bộ PCR trực tiếp có khả năng chịu đựng tạp chất cao hơn. Cùng một lượng mẫu được sử dụng cho PCR với các hỗn hợp PCR khác nhau và các nồng độ chất ức chế phản ứng PCR khác nhau được thêm vào hệ thống. Lượng sản phẩm PCR trong các điều kiện khác nhau được so sánh.
CóDỄ DÀNG đã phát triển một loạt sản phẩm cho các mẫu khác nhau:
- I. Loại dành riêng cho loài gặm nhấm: Bộ PCR trực tiếp mô chuột Plus (10189ES)
Mẫu áp dụng: Mô chuột (như đuôi chuột, tai chuột, ngón chân chuột, v.v.)
- Hiệu suất khuếch đại cao (chiều dài, tốc độ, khả năng tương thích GC)
Hình 5 Bộ PCR trực tiếp mô chuột Plus khuếch đại các chất phân hủy từ các mô khác nhau. 1: Plasmid; 2: Tai chuột; 3: Đuôi chuột; 4: Gan. Điều kiện phân hủy: phân hủy ở 70°C trong 10 phút, bất hoạt ở 95°C trong 5 phút. Các mảnh mục tiêu là 1 kb, 2 kb, 3 kb và 6 kb, với thời gian mở rộng được đặt lần lượt là 3, 5, 10 và 20 giây/kb. M: 10510ES60 (
- Khả năng tương thích mẫu rộng (10189ES)
Hình 6 Bộ PCR trực tiếp mô chuột Plus được sử dụng để phân hủy trực tiếp (70°C trong 10 phút) và khuếch đại tế bào 293 của người (1), nước bọt (2), và mô da đầu (3). Tất cả các mẫu đều cho thấy các dải mục tiêu rõ ràng, M: 10510ES60 (
- II. Máu đa loài Loại phổ biến: Bộ xét nghiệm PCR trực tiếp nâng cao máu (10188ES)
- Độ dài khuếch đại lên đến 8 kb
Hình 7 Các đoạn DNA có độ dài khác nhau được khuếch đại trực tiếp từ toàn bộ máu người bằng Bộ PCR trực tiếp nâng cao máu. Các mẫu máu được lưu trữ ở -20℃ với EDTA làm chất chống đông. Nồng độ khuôn mẫu máu là 10% và thời gian kéo dài được đặt thành 10 giây/kb. M: 10510ES60 (
- Độ chịu đựng cao
Hình 8 A: Bộ Blood Advanced Direct PCR Kit được sử dụng để khuếch đại một đoạn DNA 2 kb với hàm lượng GC là 71% trực tiếp từ máu toàn phần chống đông EDTA của người. Nồng độ mẫu máu được thiết lập theo gradient từ 0,5-50% và thời gian kéo dài được thiết lập là 10 giây/kb. B: Bộ PCR trực tiếp nâng cao máu được sử dụng để khuếch đại đoạn DNA 2,2 kb với hàm lượng GC là 67% trực tiếp từ máu toàn phần chống đông EDTA của chuột. Nồng độ khuôn mẫu máu được đặt từ 0,5-50% và thời gian kéo dài là 10 giây/kb. M: 10510ES60 (
- III. Loại dành riêng cho thực vật: Bộ PCR trực tiếp mô thực vật (10187ES)
- Đã được xác minh bằng nhiều loại mẫu thực vật
Hình 9 Kết quả khuếch đại trực tiếp từ mô lá của các loại cây khác nhau. M: Thang DNA 100 bp. C: DNA bộ gen tinh khiết từ các cây tương ứng làm khuôn mẫu. 1-2: Mô lá phân hủy làm khuôn mẫu. Số chu kỳ: 30 chu kỳ.
Trường hợp khách hàng
- I. Xác định kiểu gen chuột
Một công ty sinh học ở Quảng Châu:
Hình 10. Khuếch đại đuôi chuột bằng Bộ PCR trực tiếp chuột (10189ES). Gen mục tiêu: 500 bp; Thời gian phân hủy: 10 phút; Hệ thống phản ứng PCR: 25 μL, thời gian kéo dài: 5 giây/kb.
- II. Khuếch đại trực tiếp gen lúa
XX Trường đại học
Hình 11 Bộ dụng cụ PCR trực tiếp từ thực vật (10187ES) được sử dụng để khuếch đại các gen liên quan đến lúa.
Rphấn khởi Psản phẩm
| Định vị sản phẩm | Tên sản phẩm | Số sản phẩm | Thông số kỹ thuật sản phẩm |
| Agarose chất lượng cao | 10208ES60/76 | 100g/500g | |
| Vết ố axit nucleic (Dưới đèn UV) | 10202ES76 | 500 μL | |
| Nâng cấp PCR nhanh, có thể là PCR khuẩn lạc và phù hợp với khuếch đại khuôn mẫu phức tạp | 10167ES03/08 | 1 mL/5×1 mL |