Kapitel 1: PCR-teknologi
1.1 Principper for PCR
PCR (Polymerase Chain Reaction) eller polymerasekædereaktion refererer til DNA-polymerasen katalyseret af moderstrengen af DNA som en skabelon, med en specifik primer til udvidelse af udgangspunktet tilføjes dNTP, Mg2+ og forlængelsesfaktorer, forstærkningsforstærkning faktorer. Gennem denaturerings-, udglødnings- og forlængelsestrin, in vitro-replikationen af datterstrengen er komplementær til stamstrengstemplate-DNA'et, som hurtigt og specifikt kan amplificere ethvert mål-DNA in vitro.
1.2 Klassificering af DNA-polymeraser
DNA pol er en vigtigt enzym for cellulære replikation af DNA. I henhold til termisk stabilitet, synteseevne, hastighed, troskab og specificitet, det kan klassificeres som Taq DNA polymerase, high-fidelity DNA polymerase, hot-start DNA polymerase, direkte ekspansion DNA polymerase, lang-fragmenteret DNA polymerase enzym, hurtig DNA-polymerase, multipel DNA-polymerase og så videre.
Den mest almindelige af disse er Taq DNA-polymerase, som har polymeraseaktivitet i 5'→3'-enden og exonuklease aktivitet i 5'→3'-enden, men nej 3'→5' endekorrektionsaktivitet. Den vigtigste egenskab ved Taq er dens gode varmebestandighed, som kan modstå den termiske denaturering trin af PCR, hvilket gør det unødvendigt at tilføje mere enzym halvvejs i processen. Taq har dog lav troskab, fordi den ikke har nogen korrekturaktivitet. Dens troskab opnås hovedsageligt ved koncentrationen og forholdet mellem magnesiumioner og dNTP'er.
High-fidelity DNA-polymerase indeholder et polymerisationscenter og et spaltningscenter, polymerisationscentret har en 5'→3' DNA-polymeraseaktivitet, som kan katalysere syntesen af DNA i retning af 5'→3'; spaltningscentret har en 3'→5' exonukleaseaktivitet, som kan udføre reparationen af basefejlparring. Ud over egenskaberne ved Taq DNA-polymerase har high-fidelity DNA-polymerase derfor også korrigerende aktivitet, ansvarlig for udskæring det uoverensstemmende nukleotider, hvilket sikrer produktets nøjagtighed.
Diagrammet ovenfor viser, hvordan DNA-polymerase virker [1].
Direkte PCR (Direct PCR) er en reaktion på det bruger urensede prøver til PCR-amplifikation og dyr eller plantevæv til direkte amplifikation. For tiden, Yeasen Direkte PCR-kits kan bruges til PCR-amplifikation af råprøver såsom planter, dyrevæv, blod osv. uden behov for nukleinsyreoprensning, hvilket i høj grad forenkler processen med PCR-eksperimenter.
Ovenstående figur viser Direct PCR-teknikken.
EN. Direkte metode: Tag en lille mængde prøve og tilsæt den direkte til PCR Master Mix til PCR-identifikation;
B. Lyseringsmetode: efter prøven er taget, tilsæt den til lysisopløsningen for at frigive genomet, tag en lille mængde af lysisupernatanten og tilsæt den til PCR Master Mix til PCR-identifikation.
1.3 Ofte stillede spørgsmål og løsninger
| Besvær | Årsag | Løsning |
| Uden forstærkede bånd | Problemer med elektroforesesystemet | Fejlfind nukleinsyrefarvestof, gelkoncentration og elektroforesebuffer. |
| Upræcis denatureringstemperatur | Er den angivne temperatur på PCR-instrumentet i overensstemmelse med den faktiske temperatur? Hvis temperaturen er for høj, er enzymet hurtigt i de første par cyklusser; hvis den er for lav, er skabelondenatureringen ikke fuldstændig. | |
| Kontaminering af protease og nuklease i reaktionssystemet | Reaktionssystemet skal opvarmes ved 95°C i 5-10 minutter før tilsætning af Taq-enzym. | |
| Primer fejl | Tjek primerspecificitet eller redesign primere ved hjælp af BLAST. | |
| Skabelonen indeholder urenheder | Især formaldehyd-fikserede og paraffin-indlejrede væv indeholder ofte myresyre, hvilket forårsager DNA-depurinering og påvirker PCR-resultater. | |
| Primer forringelse og svigt | Bekræft, at de syntetiske primere er korrekte, rensede eller inaktiverede på grund af ukorrekte opbevaringsforhold. | |
| Mindre mængde af PCR-produkt | Uhensigtsmæssig udglødningstemperatur | En gradient PCR-reaktion blev designet til at optimere annealingstemperaturen med en gradient på 2 grader. |
| Tilstedeværelse af inhibitorer i DNA-skabelonen | Sørg for, at DNA-skabelonen er ren. | |
| Langvarig denaturering | Forlænget denaturering fører til inaktivering af DNA-polymerase. | |
| Forlængelse for kort | Forlængelsetiden er for kort. Indstil forlængelsestiden efter princippet 1kb/min. | |
| Mængden af DNA-skabelon for lav | Øg mængden af DNA skabelon. | |
| Utilstrækkelig mængde primere | Øg primerindholdet i systemet. | |
| Utilstrækkeligt antal PCR-cyklusser | Øg antallet af reaktionscyklusser. | |
| Flere bands | Dårlig primerspecificitet | Primerdesignsoftware såsom BLAST og Primer blev brugt til at kontrollere primerspecificitet eller redesigne primere. |
| For stort antal sløjfer | Øg mængden af skabelon passende, og reducer antallet af cyklusser. | |
| Eksogen DNA-kontaminering | Sørg for ren drift. | |
| For stor mængde skabeloner | Mængden af plasmid-DNA skal være <50 ng, mens genomisk DNA bør være <200 ng. | |
| For meget primer | Reducer mængden af primere i reaktionssystemet. | |
| Reaktionsopløsningen er ikke godt blandet | Sørg for, at reaktionsbufferen er fuldstændig smeltet og grundigt blandet. | |
| Mg Høj koncentration | Juster den anvendte koncentration af Mg passende. | |
| Høj enzymdosis eller dårlig enzymkvalitet | Reducer mængden af enzym eller erstat det med en anden kilde. | |
| Lav udglødningstemperatur, lang udglødning og forlængelsestid | Forøg annealingstemperaturen for at reducere denaturerings- og forlængelsestiden, eller design en gradient PCR-reaktion for at optimere annealingstemperaturen. | |
| Problemer med selve PCR-blandingen | Hvis det er PCR premix, kan det være kvaliteten af selve reagenset, det anbefales at skifte batch eller andre mærker. | |
| Forkert størrelse | Contaminering | Rengør bænken med nye reagenser og spidser. |
| Forkert brug af skabeloner eller primere | Udskift primere og skabeloner. | |
| Genotype | Sekvensanalyse og BLAST-undersøgelser blev udført på de undersøgte gener. |
Kapitel 2: Nukleinsyreelektroforese
2.1 Principper for nukleinsyreelektroforese
Bevægelsen af ladede partikler under påvirkning af et elektrisk felt mod en elektrode modsat deres elektriske egenskaber kaldes elektroforese. Brug af de ladede partikler i det elektriske felt bevæge sig med forskellige hastigheder og opnå adskillelse af teknologien kaldes elektroforese. Nukleinsyreelektroforese er en vigtigt værktøj til nukleinsyreforskning og er en integreret del af teknikker som f.eks nukleinsyreprober, nukleinsyreamplifikation og sekvensanalyse. Nukleinsyreelektroforese er normalt udført i agarose el polyacrylamid geler. Forskellige koncentrationer af agarose og polyacrylamid kan danne geler med forskellige molekylsigter maskestørrelser, som kan bruges til at adskille nukleinsyrefragmenter med forskellig molekylvægt.
2.2 Agarosegelelektroforese
Agarose er en lineær polymer udvundet af tang. Agarose opvarmes i en bufferopløsning og smeltes til en klar, gennemsigtig sol, som derefter hældes i en gelatineform og størkner til en fast matrix kendt som en gel, hvis tæthed afhænger af koncentrationen af agarose.
Agarose gelelektroforese er en slags elektroforesemetode, der bruger agarose som støttemedium, og hovedforskellen mellem analytisk princip og anden støtte elektroforese er, at den har dobbeltrolle af "molekylsigte" og "elektroforese". De gel placeres i elektrisk felt, under handlingen af elektrisk felt, det ladede nukleinsyrer migrerer til positiv pol ved nettet af de gel. De sats på migration påvirkes af størrelsen af nukleinsyremolekyler, agarosekoncentration, påført spænding, elektrisk felt, elektroforesebuffer og mængden af indlejret farvestof. Efter passende tid med elektroforser under forskellige forhold, vil nukleinsyrefragmenter med forskellige størrelser og konformationer være i forskellige positioner på gelen, hvorved formålet med adskillelse opnås.Adskillelse af agarosegel har en bred vifte, almindeligvis brugt til genvinding af DNA-skærende gel, DNA-isolering og bruges til at understøtte, om DNA'et er rekombinant, plasmid osv. Uanset om plasmidet er skåret eller ej, forskellige koncentrationer af agarosegel kan adskilles fra længden af 200 bp til 50 kb af DNA fragmenter.
2.3 Eksperimentelle metoder
Fremstilling lim
Tag 1% koncentration som et eksempel: vej 1 g agarose, hæld det i en 250 ml konisk kolbe, tilsæt 100 ml 0,5×TBE elektroforesebuffer og bland det godt, kog det i en mikrobølgeovn og så lufttør det til ca. 60 ℃, tilsæt en passende mængde nukleinsyrefarve og ryst det godt og hæld det derefter i en ren gelplade, der allerede er klargjort, tag en kam med begge hænder for at indsæt i gelopløsning lodret, og vent på gel at være køles naturligt ned til den er helt størknet (25-30min).
Fjern limfremstillingskammen
Overfør forsigtigt gelen til elektroforesetanken (enten med gelbakken eller kun gelen), anbring prøvebrøndsiden i den negative pol, og tilsæt 0,5× TBE elektroforesebuffer, indtil gelen er ca. 1 mm under.
Tilføje prøve
Tilføj 10× loading buffer (loading buffer) til DNA-prøverne, bland godt, og tilsæt derefter langsomt prøveblandingen til subsammensmeltet gel brønde med en pipettepistol, tilsætning af 5-10 μL prøve pr. brønd (ikke mere end 40 μL). Generelt skal den første brønd fyldes med DNA-markør, den anden med positiv kontrol (defineret DNA), og den tredje med negativ kontrol (reagens eller vand), og rækkefølgen af prøverne skal registreres.
Elektroforese
Dæk til elektroforesetank, tilslut ledninger, tænd for strømmen, og indstil elektroforesespændingen, strøm og tid parametre. Generelt er spændingen bør ikke overstige 5 v/cm (længden refererer til afstanden mellem positive og negative poler i elektroforesetanken), og elektroforesetiden er generelt 15-30 min.
Slut på elektroforese
Fjerne de gel (uden gelbakke) og billed den under UV-billeddannelsessystemet for at få et klart elektroforetisk billede, og rediger derefter det elektroforetiske billede med billedredigeringssoftwaren og mærke det med prøveoplysningerne, dato og operatør.
2.4 Ofte stillede spørgsmål og løsninger
| Besvær | Årsag | Løsning |
| Manglende målbånd | Lille DNA løber tør for gel | Forkort elektroforesetiden, reducer spændingen, øg gelkoncentrationen. |
| DNA-bånd med lignende molekylvægtsstørrelse er ikke let at skelne | Øg elektroforesetiden for at matche den optimale gelkoncentration. | |
| Målfragmentet er for stort til konventionel elektroforese. | Analyseret på pulseret gelelektroforese. | |
| Klip uden formål | PCR-processen var defekt og forstærkede ikke målproduktet. | |
| Slørede DNA-bånd | Forældet elektroforesebuffer | Når elektroforesebuffer bruges i mange gange, vil ionstyrken blive reduceret, PH-værdien vil stige langsomt, og skylleevnen vil blive svækket, hvilket påvirker elektroforeseeffekten, så det anbefales at skifte elektroforesebuffer ofte. |
| DNA nedbrydning | Undgå nukleasekontamination. | |
| De anvendte elektroforesebetingelser er ikke egnede til elektroforese | elektroforesespændingen bør ikke overstige 20V/cm, og temperaturen bør være <30°C; temperaturen ved elektroforese af store DNA-strenge skal være <15°C; kontrollere, om den anvendte elektroforesebuffer har tilstrækkelig bufferkapacitet. | |
| Overdreven DNA-prøvetagning | Reducer mængden af DNA opsamlet i gelen. | |
| DNA-prøver er for salte | Overskydende salt blev fjernet ved ethanolpræcipitation før elektroforese. | |
| proteinforurening | Phenolekstraktion før elektroforese fjerner proteiner. | |
| Prøvekoncentrationen er for høj | Koncentrationen af den øverste prøve skal være mindre end 500ng/brønd, koncentrationen er for høj vil påvirke hastigheden af elektroforese, løb, hvilket resulterer i træk og sløring. | |
| Svage eller ingen bånd | Utilstrækkelig prøvestørrelse af DNA | Forøgelse af mængden af DNA-optagelse |
| DNA nedbrydning | Undgå nukleasekontamination af DNA | |
| Upassende lyskilde til nukleinsyrefarvestoffer | Vælg den passende bølgelængde lyskilde i henhold til instruktionerne for nukleinsyrefarvestoffet. | |
| Bånd ikke adskilt | mangel på tid | Øg elektroforesetiden |
| Forkert gelkoncentration | Koncentrationen af lim er for høj, hvilket resulterer i for stor modstand mod adskillelse. | |
| Koncentrationen af saltioner i prøven er for høj | Høj koncentration af saltioner øger den elektroforetiske modstand og forhindrer adskillelse af bånd, f.eks. fordøjede prøver, der indeholder endonukleasebuffer. | |
| Ikke-specifikke bånd | RNA-kontaminering | Genforberedelse af prøver |
| Kontaminering mellem prøver | Udskiftning af spidsen under påfyldning; undgå spild af prøver med volumen >40 μl. |
2.5 Polyacrylamidgelelektroforese
Polyacrylamidgeler dannes ved den kemiske reaktion mellem akrylamidmonomer, kædepolymerisationskatalysatorer N,N,N',N'-tetramethylethylendiamin (TEMED) og ammoniumpersulfat og tværbindingsmidlet N,N'-methylenbisacrylamid. Acrylamidmonomeren polymeriserer i nærværelse af en katalysator for at danne lang kæder, som er tværbundet ved et tværbindingsmiddel til dannelse af en gel, hvis porestørrelse bestemmes af kædelængden og graden af tværbinding. Porestørrelsen bestemmes af kædelængden og graden af tværbinding. Kædelængden afhænger af koncentrationen af akrylamid og graden af tværbinding af polymeren kan ændres ved at justere forholdet mellem akrylamid og tværbindingsmiddel.
Polyacrylamidgelelektroforese kan bruges til adskille prøver baseret på forskelle i oplade, molekylær størrelse og form af de elektroforeserede prøver. Den kombinerer molekylær sigtning og elektrostatisk og har en højere opløsningsevne end agarosegelelektroforese. DNA-fragmenter kun adskiller sig et nukleotid kan adskilles.
Polyacrylamidgelelektroforese bruges til at analysere og fremstille DNA-fragmenter på mindre end 1 kb i længden. Afhængig af størrelsen af nukleinsyrefragmenterne, der skal isoleres, geler af anderledes kan forberedes.
De effektive adskillelsesintervaller for forskellige koncentrationer af akrylamid og DNA er vist i tabellen nedenfor:
| Konc. (%) | Effektivt separationsområde (bp) |
| 3.5 | 100 til 2000 |
| 5 | 80 til 500 |
| 8 | 60 til 400 |
| 12 | 40 til 200 |
| 15 | 25 til 150 |
| 20 | 10 til 100 |
2.4 Retningslinjer for valg af relaterede produkter
Konventionel PCR | ||||
| Specifikation | 10167ES | 10102ES | 10103ES | 10108ES |
| Forstærkningslængde | ≤10-15 kb | ≤5 kb | ≤5 kb | ≤4 kb |
| Forlængelsestid | 1-10 sek/kb | 30 sek/kb | 30 sek/kb | 30 sek/kb |
| Produktets slutstruktur | 3'-dA | 3'-dA | 3'-dA | 3'-dA |
| Udglødningstemperatur | 60℃ | Tm-(2~5)℃ | Tm-(2~5)℃ | Tm-(2~5)℃ |
| GC-kompatibilitetsområde | 30-70 % | 40-70 % | 40-70 % | 30-70 % |
| 5'-3' exonukleaseaktivitet | Nuværende | Nuværende | Nuværende | Nuværende |
| Koloni PCR | Egnet | Egnet | Egnet | Egnet |
| Genidentifikation | Egnet | Egnet | Egnet | Egnet |
| Multiplex PCR | Ikke egnet | Ikke egnet | Ikke egnet | 3-4 plex PCR |
| Elektroforeseindikator | Lilla-rød | Blå | Farveløs | Blå |
| Hot Start | Hot Start | Ikke Hot Start | Ikke Hot Start | Hot Start |
| Forblanding/kit | Forblanding | Forblanding | Forblanding | Forblanding |
Direkte PCR | ||||
| Specifikation | 10185ES | 10188ES | 10187ES | |
| Produkttype | Direkte museforstærkning | Blod direkte amplifikation | Plant direkte amplifikation | |
| Forstærkningslængde | ≤1 kb | ≤8 kb | ≤1 kb | |
| Forlængelsestid | 30 s/kb | 3-5 s/kb for ≤2 kb, | 60 s/kb | |
| 10 s/kb for ≤8 kb | ||||
| Prøvelyseringstid | 15 min | 0-3 min | 0-10 min | |
| Produktets slutstruktur | stump ende | stump ende | stump ende | |
| Udglødningstemperatur | Tm-(2~5)℃ | Tm-(1~2)℃ | Tm-(2~5)℃ | |
| GC-kompatibilitetsområde | 30-70 % | 30-75 % | 40-65 % | |
| 5'-3' exonukleaseaktivitet | √ | √ | √ | |
| Genidentifikation | √ | √ | √ | |
| Multiplex PCR | 3-4 plex | |||
| Direkte prøveforstærkning | √ | √ | √ | |
| Elektroforeseindikator | Blå | Farveløs | Blå | |
| Hot Start | √ | √ | √ | |
| Forblanding/kit | Kit (med blanding) | Kit (med mix + buffer) | Kit (med blanding) | |
| Egnede organismer | Mus, rotte | Menneske, mus, ged, kylling, gris osv. | Ris, majs, tobak, raps, hvede, sojabønner osv. | |
| Egnet væv/materiale | Hale, øre, tå (med muskler) og andre organer | Frisk blod med EDTA, heparin, citrat osv., nedkølet (frosset) blod, kommercielle tørre blodpletter | Unge blade, gamle blade, frøplanter, unge stængler | |
| Eksempel input | Væv: 5-10 mg; Hale: 1-5 mm | Fuldblod: 0,5%-20%, tør blodplet: 1 mm² | Blad: 1-10 mm, Frø: 1-3 mm | |
High-Fidelity PCR | ||||
| Specifikation | 10164ES | 10153ES | 10154ES | |
| Forstærkningslængde | ≤10 kb gDNA, ≤10 kb cDNA, ≤16 kb λDNA | ≤10 kb gDNA, ≤10 kb cDNA, ≤13 kb λDNA | ≤10 kb gDNA, ≤10 kb cDNA, ≤13 kb λDNA | |
| Forlængelsestid | 5 sek/kb | 30 sek/kb | 30 sek/kb | |
| Fidelity (Taq) | 83× | 83× | 83× | |
| Produktets slutstruktur | stump ende | stump ende | stump ende | |
| Udglødningstemperatur | 60℃ | 68℃ | 68℃ | |
| GC-kompatibilitetsområde | 20-80 % | 30-60 % | 30-60 % | |
| 5'-3' exonukleaseaktivitet | Fraværende | Fraværende | Fraværende | |
| Elektroforeseindikator | Blå | Farveløs | Blå | |
| Enkelt enzym/forblanding | Forblanding | Enkelt enzym | Forblanding | |
| Tolerance | / | / | Blod, musevævslysat | |
Nukleinsyreelektroforese | ||||
| Produktkategori | Kat NR. | Produktnavn | Anvendelse | |
| Agarose | 10208ES | Agarose | Rutinemæssig nukleinsyreelektroforese | |
| 10221ES | Højsigtende agarose (PCR-kvalitet) | Velegnet til adskillelse af DNA-fragmenter på 20 bp-800 bp, sammenlignelig med polyacrylamidgel | ||
| 10226ES | Agarose tabletter (0.5 g/tablet) | Praktisk til rutinemæssige agaroseapplikationer | ||
| Nukleinsyrefarvestof | 10202ES | ÅrRød Nukleinsyre Gel-farve (10.000× i vand) | Vandopløselig, med spektrale egenskaber svarende til EB, exciterbar ved 300 nm UV-lys | |
| DNA markør | 10510ES | GoldBand 1 kb DNA-stige | 250-12000 bp (13 bånd) | |
| 10515ES | GoldBand 50 bp DNA-stige | 50-1000 bp (14 bånd) | ||
| 10507ES | GoldBand 100bp DNA-stige | 100-1500 bp (12 bånd) | ||
| 10516ES | GoldBand 100 bp plus DNA-stige | 100-3000 bp (14 bånd) | ||
| 10517ES | GoldBand 200 bp DNA-stige | 200-5000 bp (12 bånd) | ||
| 10518ES | GoldBand 500 bp DNA-stige | 500-5000 bp (8 bånd) | ||
| 10501ES | GoldBand DL2000 DNA-markør | 100-2000 bp (6 bånd) | ||
| 10504ES | GoldBand DL5000 DNA-markør | 100-5000 bp (9 bånd) | ||
| 10505ES | GoldBand DL10.000 DNA-markør | 100-10000 bp (10 bånd) | ||
| 10511ES | GoldBand fuldskala DNA-stige | 100-12000 bp (20 bånd) | ||
| 10512ES | GoldBand DL15000 DNA-markør | 250-15000 bp (7 bånd) |
2.5 Publikationer, der anvender nukleinsyreelektroforeseprodukter (sartial)
[1] Luo J, Yang Q, Zhang X, et al. TFPI er en colonkrypt-receptor for TcdB fra hypervirulent clade 2 C. dificile. Celle. 2022;185(6):980-994. e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010 (IF:41.584)
[2] Huang N, Chen H, Gong H, et al. SeHed, et nyt genekspressionssystem med stress-fremkaldt hydrogenperox ide eliminerende egenskaber og anti-aldringseffekt. signaltransduktion og målrettet terapi. 2022, 7, 235. doi: 10.1038/s41392-022-01047-2. (IF: 38,1)
[3] Zhang C, Zhou B, Gu F, et al. Mikropeptid PACMP-hæmning fremkalder syntetiske dødelige effekter ved at reducere CtIP og poly(ADP-ribosyl)-ation. mol Celle. 2022;82(7):1297-1312.e8. doi:10.1016/j.molcel.2022.01.020 (IF:17.970)
[4] Zhu M, DaiX. Vækstundertrykkelse af ændrede (p)ppGpp-niveauer skyldes ikke-optimale ressourceallokering i Escherichia coli. Nucleic Acids Res. 2019;47(9):4684-4693. doi:10.1093/nar/gkz211 (IF:11.147)
[5] Rizwan HM, Zhimin L, HarsonowatiW, et al. Identifikation af svampepatogener til kontrol efter høst Passionsfrugt (Passiflora edulis) henfald og multi-omics komparativ vejanalyse afslører Lilla er mere Resista nt til Patogener end en Gul Kultivar. j Svampe (Basel). 2021;7(10):879. Udgivet 2021 19. okt. doi:10.3390/jof 7100879 (IF:5.816)
[6] LiT, Zhou B, Luo Z, et al. Strukturel karakterisering af en Neutralisering af nanobody med bred aktivitet imod SARS-CoV-2 varianter. Front Microbiol. 2022;13:875840. Udgivet 2. juni 2022. doi:10.3389/fmicb.2022.875840 (IF:5.640)
[7] Wang T, Ren D, Guo H, et al. CgSCD1 er afgørende for melaninbiosyntese og patogenicitet af Colletotrichum gloeosporioides. patogener. 2020;9(2):141. offentliggjort 20. februar 2020. doi:10.3390/pathogens9020141(IF:3.018) :141. Udgivet 2020 20. feb. doi:10.3390/pathogens9020141 (IF:3.018)
[8] Lv Y, LiX, Zhang H, Zou F, Shen B. CircRNA-ekspressionsprofiler i deltamethrin-modtagelige og -resistente
pipiens pallens (Diptera: Culicidae). Comp. Biochem Physiol B Biochem. Mol Biol. 2022;261:110750. doi:10.1016 /j.cbpb.2022.110750 (IF:2.231)
[9] Hu M, DaiX. Vækstundertrykkelse ved ændret (p) ppGpp niveauer er resultatet af ikke-optimal ressourceallokering i Escherichia coli[J]. Nukleinsyreforskning, 2019, 47(9): 4684-4693.(IF11.6)
[10] Guo L, Yang W, Huang Q, et al. Selenocystein-specifik massespektrometri afslører vævs-distinkte selenopro teomer og kandidatselenoproteiner[J]. Cellekemikalie biologi, 2018, 25(11): 1380-1388. e4. (IF6.762)
2.6 Publikationer, der bruger PCR-produkter (delvis)
[1] Wang Y, Fu Z, LiX, et al. Cytoplasmatisk DNA sansning ved KU kompleks i alderen CD4+ T celle potenserer T celle aktivere tion og ældningsrelateret autoimmun betændelse. Immunitet. 2021;54(4):632-647.e9. doi:10.1016/j.immu
ni.2021.02.003(IF:31.745)
[2] Yang X, Gao F, Zhang W, et al. "Stjerne" miR-34a og CXCR4 antagonist baseret nanoplex til binæry samarbejdsvillig migrationsbehandling igent metastatisk bryst kræft. J Kontrollere Frigøre. 2020;326:615-627. doi:10.1016/j. jconrel.2020.07.029(IF:7.727)
[3] QiaoY, Du J, Ge R, et al. EN Prøve og Opdagelse Mikronål Lappe for Psoriasis MicroRNA Biomarkør
Analyse i Mellemliggende annonce Væske. Anal Chem. 2022;94(14):5538-5545. doi:10.1021/acs.analchem.1c04401(IF:6.986)
[4] Lin Q,Yee X, Huang Z, et al. Grafen Oxid-baseret Undertrykkelse af Uspecificitet i Loop-medieret Isother fejlforstærkning Aktivering af det følsomme Opdagelse af cyclooxygenase-2 mRNA i Kolorektal Kræft. Anal Chem. 2019;91(24):15694-15702. doi:10.1021/acs.analchem.9b03861(IF:6.350)
[5] Lin Q, Huang Z,Ye X, et al. Lab i -en rør: Isolation, udvinding, og erandet forstærkning opdagelse af exosomal lang ikke-kodning RNA af gastrisk kræft. Talanta. 2021;225:122090.
doi:10.1016/j.tta.2021.122090(IF:6.057)
[6] Liu C, Zou G, et al. 5-formyluracil som -en Multifunktionelle Bygning Blok i Biosensor Designs[J]. Angew Chem Int Ed Engl. 26. juli 2018;57(31):9689-9693.（IF 11.992）
[7] Wang M, Zhang S, Zheng G, et al. Gain-of-Function Mutation af kort14 fører til Spontan Psoriasis-lignende Hud Inflammation igennem Forbedret Keratinocyt svar på IL-17A. Immunitet. 2018;49(1):66-79.e5.
doi:10.1016/j.immuni.2018.05.012(IF:19.734)
[8] Zhang Y, Ding H, Wang X, et al. MK2 fremmer Tfcp2l1 nedbrydning via β-TrCP ubiquitin ligase til regulere mus embryonal stilk celle selvfornyelse. Celle Rep. 2021;37(5):109949. doi:10.1016/j.celrep.2021,109949 (IF:9.423)
[9] Lin Q,Ye X, Yang B, et al. Realtid fluorescens loop-medieret isotermisk forstærkendeation assay for hurtig og følsom opdagelse af Streptococcus gallolyticus subsp. gallolyticus forbundet med kolorektal kræft[J].
Analytisk og bioanalytisk kemi, 2019, 411(26): 6877-6887.（IF6.35）
[10] Lin Q,Yee X, Huang Z, et al. Grafen Oxid-baseret Undertrykkelse af Uspecificitet i Loop-medieret Isother fejlforstærkning Aktiverer Sensitive Opdagelse af cyclooxygenase-2 mRNA i Farvectal Kræft[J]. Analyti cal kemi, 2019.（IF6.35）
Citation:
[1] Loeb LA, Jr. R. DNA-polymeraser og human sygdom[J]. Naturanmeldelser Genetik.