Yeasen og molefuture udviklede termotolerant, høj tro T4 DNA -ligase til bekæmpelse af falsk ligering

Yeasen og Molefuture introducerer avanceret T4 DNA-ligase for at overvinde molekylærbiologiske udfordringer

Yeasen og Molefuture har i fællesskab udviklet en banebrydende T4 DNA-ligase ved hjælp af deres ZymeEditor-platform, der adresserer nøgleproblemer inden for molekylærbiologi og DNA-bibliotekskonstruktion til næste generations sekventering (NGS). Traditionel T4 DNA ligase står over for udfordringer såsom dårlig stabilitet, høj adapter dimer dannelse og høj DNA fragment selvligering. Dette nye enzym har til formål at overvinde disse begrænsninger.

T4 DNA-ligase, et ATP-afhængigt enzym, har et kompakt-spiralformet DNA-bindende domæne (DBD), et nukleotidyl-transferase (NTase) domæne og et OB-fold domæne. Ved at analysere proteinstrukturen identificerede forskere nøglerester inden for 5 til 20Å af DNA-substratet. Ved hjælp af avancerede beregningsværktøjer, i silico-screening og struktur-funktionsanalyse, designede de mutanter gennem konsensussekvensjustering, der inkorporerede strukturel-funktionel indsigt.

Ud over rationelt design brugte holdet MTPS-metoden til rettet evolution, screening over 10.000 mutanter for stabilitet, aktivitet og resterende aktivitet. Lovende kandidater gennemgik streng oprensning og test. Detaljeret karakterisering fulgte, evaluering af aktivitet, stabilitet, adaptor-selv-ligering, DNA-fragment-selv-ligering og DNA-udbytte.

Forskerne kombinerede DNA-rationelt design og rettet mutation på G1-mutanter for at udvikle exceptionelle varianter, der er egnede til forskellige anvendelser. Denne omfattende tilgang har resulteret i en yderst effektiv og pålidelig T4 DNA-ligase, klar til at forbedre molekylærbiologisk forskning og DNA-bibliotekskonstruktion i NGS.

Figur 1. Illustrerer udviklingen af ​​Versatility T4 DNA Ligase. (A) Rationelt design af T4 DNA-ligase. (B) Screening af termotolerante T4 DNA-ligasemutanter ved 45 ℃, hvilket fører til identifikation af mutanter med væsentligt forbedret specifik aktivitet. (C) Screening af T4 DNA-ligasemutanter rettet mod at reducere adapterdimerdannelse under forberedelse af DNA-bibliotek. (D) Evalueringen af ​​biblioteket giver retention efter varmebehandling ved 42 ℃ i 1 time ved anvendelse af DNA-biblioteksfremstillingsmetode.
Tabel 1. Yeasen Alsidig T4 DNA-ligase er termostabil. Enzymet blev behandlet ved 30 ℃ i 5 dage og analyseret ved DNA Lib Prep-metoden.
Figur 2. Yeasen Alsidig T4 DNA-ligase har højere troskab sammenlignet med vildtype (WT) T4 DNA-ligase angivet ved mindre adapterdimerdannelse på grund af selvfejlligering (A) og (B) analyseret ved DNA Lib Prep-metoden.
Figur 3. Yeasen Alsidig T4 DNA-ligase viser den laveste adapterdimerdannelse sammenlignet med de kommercielle T4 DNA-ligaser, herunder termotolerante ligaser analyseret ved DNA Lib Prep-metoden.
Dette gennembrud demonstrerer Yeasen og Molefutures engagement i innovation og ekspertise inden for enzymteknologi.

Bestillingsoplysninger

Navn Kat# Noter
Enzym Hieff™ Alsidig T4 DNA Ligase (600 U/µL) 12996ES Termotolerant og High Fidelity til påvisning af tumorgen
DNA Hieff NGS® DNA Library Prep Kit 13577ES Tumor/mekanisk metode
Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V2 12194ES Tumor/enzymetisk metode
Hieff NGS® OnePot II DNA Library Prep Kit til Illumina 13490ES Patogen/enzymetisk/normal tid (140 min)
Hieff NGS® OnePot Flash DNA Library Prep Kit 12316ES Patogen/enzymetisk/ultrahurtig (100 min)
Hieff NGS® DNA&RNA Library Co-Prep Kit V2 12305ES Pathgen/ Enzymetic/ DNA & RNA Co-Prep
RNA Hieff NGS® Ultima Dual-mode mRNA Library Prep Kit 12308ES Uden oligo dT magnetiske perler, 11 rør
Hieff NGS® Ultima Dual-mode mRNA Library Prep Kit 12309ES oligo dT magnetiske perler plus, 14 rør
Hieff NGS® Ultima Dual-mode RNA Library Prep Kit 12310ES Forblandet version, 5 rør
Hieff NGS ® EvoMax RNA Library Prep Kit (forblandet version) (actinomycin D Gratis) 12340ES Forblandet version, (Actinomycin D Gratis)
Hieff NGS® MaxUp rRNA-udtømningssæt (plante) 12254ES Plante
Hieff NGS® MaxUp Human rRNA Depletion Kit (rRNA & ITS/ETS) 12257ES Human

Efterlad venligst en besked for at forespørge om præstationssammenligningsdata mellem dette enzym og andre termostabile og konventionelle T4 DNA-ligaser i topklasse.

Om Molefuture Biotechnology

Molefuture Biotechnology er et datterselskab af Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd., der har specialiseret sig i at levere tilpassede enzymmodifikationsløsninger drevet af enzymevolutionsteknologi. Udnyttelse af Yeasens ressourcer Bioteknologi, Molefuture opererer på seks store teknologiske platforme: ZymeEditor innovative enzymudviklingsplatform, en multi-host højeffektiv ekspressionsplatform, fermenteringsprocesudviklingsplatform, oprensningsprocesudviklingsplatform, ultra-rent enzymproduktionsplatform og enzymanalyse- og kvalitetskontrolplatform. Med disse seks teknologiske platforme kan Molefuture tilbyde et komplet sæt af skræddersyede løsninger, herunder enzymstyret evolution, udvikling af nye enzymer, udvikling af enzymprocesser og GMP-niveau opskalering for at imødekomme applikationskravene til enzymer inden for områder som in vitro-diagnostik, biomedicin, syntetisk biologi, medicinsk æstetik, farmaceutiske mellemprodukter, etiske mellemprodukter. al.

Forespørgsel