Überblick
Coelenterazin ist ein natürliches Fluorescein, das in der Natur in großen Mengen vorkommt und das Lichtenergie-Speichermolekül der meisten marinen Leuchtorganismen (mehr als 75 %) ist. Coelenterazin kann als Substrat für viele Luciferase-Enzyme verwendet werden, wie etwa Seenieren-Luciferase (Rluc), Gaussia-sekretierte Luciferase (Gluc) und Photoproteine wie Aequorin und Obelia. Anders als das Glühwürmchen-Luciferin/Luciferase-System benötigt das Coelenterazin/Luciferase-System kein Adenosintriphosphat (ATP), was die Untersuchung der Biofluoreszenz in vivo erleichtert. Daher wird Coelenterazin häufig als Leuchtsubstrat für Fluoreszenz-Assays auf der Basis von Reportergen-Assays und Lebendtier-Assays verwendet.
Das derzeit hauptsächlich verwendete kommerzielle Coelenterazin ist das native Coelenterazin. Es werden auch viele Coelenterin-Derivate synthetisiert, wie Coelenterazin h, Coelenterazin 400a, Coelenterazin cp, Coelenterazin f, Coelenterazin hcp, Coelenterazin n und Coelenterazin n. Theoretisch können diese Coelenterine in denselben Experimenten verwendet werden, aber aufgrund ihrer Unterschiede in Lichtwellenlänge, Zellmembrandurchlässigkeit und Lichtquanteneffizienz zeigen sie in derselben Anwendung unterschiedliche experimentelle Effekte.
Arten von Coelenterazin
Auch bekannt als freie Coelenterazinsäure. Es ist das Substrat vieler Luciferase-Enzyme wie Renilla-Luciferase (Rluc) und Gaussia-Luciferase (Gluc) und außerdem der Cofaktor des leuchtenden Quallenproteins.
Anwendungsszenarien: Nachweis der Calciumionenkonzentration in lebenden Zellen, Genberichtsanalyse, BRET-Studie (Biolumineszenz-Resonanz-Energietransfer), ELISA-, HTS- und Chemilumineszenznachweis von ROS-Werten in Geweben oder Zellen usw.
Es ist das Substrat vieler Luciferase-Enzyme wie Renilla-Luciferase (Rluc) und Gaussia-Luciferase (Gluc) und ist außerdem der Cofaktor des leuchtenden Quallenproteins.
Anwendungsszenario: Die Lichtintensität ist mehr als zehnmal höher als bei Coelenterazine Native und eignet sich daher für die Reportergenanalyse und die Erkennung der Calciumionenkonzentration in lebenden Zellen.
Coelenterazin hcp
Es ist eines der Derivate von Coelenterazine Native. Die Fluoreszenzintensität des Coelenterazine hcp-Aequorin-Komplexes ist 190-mal höher als die des Coelenterazine Native-Komplexes, mit hoher Quantenausbeute und schnellem Ca2+ Reaktionsrate, die sich sehr gut für die Erkennung von Calciumionenwerten eignet.
Anwendungsszenario: Geeignet zur Erkennung des Kalziumionenspiegels.
Auch bekannt als DeepBlue CTM, ist es eines der Derivate von Coelenterazine Native. Es ist ein gutes Substrat für Renilla-Luciferase (Rluc) und seine Emissionswellenlänge beträgt etwa 400 nm, was kaum Interferenzen mit dem Signal des GFP-Rezeptorproteins verursacht und nicht durch von Gaussia sezernierte Luciferase (Gluc) oxidiert werden kann.
Anwendungsszenario: Es ist das bevorzugte Coelenterazin-Substrat für die BRET-Forschung (Biolumineszenz-Resonanz-Energie-Transfer).
Es ist das bevorzugte Substrat für Aequorin und der einzige strukturelle Unterschied zu Coelenterazine Native besteht darin, dass die Hydroxylgruppe an seiner R-1-Phenolgruppe durch Fluor (F) ersetzt ist.Im Vergleich zur Gesamtzahl der vom Coelenterazine Native-Apoaequorin-Komplex erzeugten Photonen produziert dieser Komplex nur 80 % der Photonenenergie. Der Vorteil besteht darin, dass die Erzeugung des Aequorin-Komplexes nur sehr wenig Zeit in Anspruch nimmt. Bei Kontakt mit Ca2+, es emittiert Licht schnell und in hoher Ausbeute, mit einer Produktionsintensität, die 20-mal so hoch ist wie die von nativem Coelenterazin. Darüber hinaus verfügt es über eine gute Zelldurchlässigkeit.
Anwendungsszenario: Bei extrem hohem Ca2+ Da für die Untersuchung von Proteinregenerationsexperimenten bei Quallen eine hohe Nachweisempfindlichkeit erforderlich ist, wird die Verwendung von Substraten empfohlen.
Coelenterazin cp
Es ist ein Derivat von Coelenterazine Native. Der mit Apoaequorin-Protein gebildete Photoproteinkomplex ist 15-mal leuchtender als Coelenterazine Native und hat eine schnellere Ca2+ Reaktionsrate.
Anwendungsszenario: Es kann für das Hochdurchsatz-Screening von Arzneimitteln auf der Basis G-Protein-gekoppelter Rezeptoren (GPCRs) verwendet werden.
Coelenterazin n
Die Fluoreszenzintensität ist bei allen Coelenterazin-Derivaten schwächer und die Reaktionsgeschwindigkeit zu Ca2+ ist deutlich niedriger als die von Coelenterazine Native.
Coelenterazin e
Ein Derivat von Coelenterazine Native, das strukturell eine Ethylgruppe mehr als Coelenterazine Native aufweist. Als Substrat für Renilla-Luciferase beträgt seine Fluoreszenzintensität 137 % der von Coelenterazine Native. Coelenterazine e weist eine hohe In-vitro-Reaktivität von Quallen-Leuchtprotein und zwei Emissionsspitzen (405 und 465) auf, was die Bestimmung von Ca ermöglicht.2+ Konzentration im pCa5-7-Bereich durch das Verhältnis der beiden Wellenlängen. Diese Methode ist unabhängig von der Coelenterazinkonzentration und verbessert somit die Nachweisgenauigkeit. Da die Zelldurchlässigkeit dieses Derivats schlecht ist, verfügt es bei intrazellulären Experimenten nicht über diesen Vorteil.
Anwendungsszenario: Sehr nützliches Substrat für Ca2+ Erkennung geringer Empfindlichkeit.
Coelenterazin-2-methyl
Es ist ein starkes zelluläres Antioxidans. Es kann effektiv auf intrazelluläre reaktive Sauerstoffspezies wie Singulett-Sauerstoff und Superoxidanionen einwirken, und oxidativer Stress ist ein Zwischenglied im Prozess der Apoptose. Darüber hinaus weist die Verbindung die Eigenschaften der Ungiftigkeit und Membrandurchlässigkeit auf, sodass sie zur Untersuchung der Apoptose verwendet werden kann.
Produktanwendung:
1) Als wichtiges Instrument zur Untersuchung der Apoptose;
2) Es kann auch zur Chemilumineszenz verwendet werden, um Superoxid-Anionen- und Peroxynitrit-Anionen-Werte zu erkennen.
| Produktname | Molekulargewicht | Summenformel | Em (nm) | RLC* | Relative Intensität | Halbe Anstiegszeit (ms)** |
| 423.46 |
| 466 | 1,00 | 1 | 6-30 | |
| 407,48 |
| 466 | 0,75 | 16 | 6-30 | |
| Coelenterazin hcp | 399,48 |
| 445 | 0,65 | 500 | 2-5 |
| Coelenterazin cp | 415,48 |
| 442 | 0,63 | 28 | 2-5 |
| 425,46 |
| 472 | 0,80 | 20 | 6-30 | |
| Coelenterazin n | 457,52 |
| 468 | 0,25 | 0,15 | 6-30 |
| Coelenterazin e | 449,5 |
| 405 und 465 | 0,5 | 4 | 0,15–0,3 |
| 2-Methyl-Coelenterazin | 331,37 |
| / | / | / | / |
| 391,48 |
| 400 | / | / | / |
Produktinformationen
| Produktname | Katalognummer | Technische Daten |
| 40901ES01/02/03/08 | 100 mg/500 mg/1 g/5 g | |
| 40902ES01/02/03/09 | 100 mg/500 mg/1 g/5 g | |
| 40903ES01/02/03 | 100mg/500mg/1g | |
| 40904ES02/03/08 | 1×500 μg/2×500 μg/5mg | |
| 40905ES02/03 | 1×500 μg/2×500 μg | |
| 40906ES02/03/08 | 1×500 μg/2×500 μg/5mg | |
| 40908ES02/03 | 1×500 μg/2×500 μg |
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