- RT-qPCR mit hocheffizienter Reverse Transkriptase
Reverse Transkriptase (RT-Enzym) ist ein Enzym, das RNA-Vorlagen in komplementäre DNA (cDNA) umwandeln kann. In der molekularbiologischen Forschung wird Reverse Transkriptase häufig verwendet und spielt insbesondere im Bereich der molekularen Diagnostik eine unverzichtbare Rolle. Durch den Prozess der Reversen Transkription kann das RNA-Genom von Viren in cDNA umgewandelt werden, die dann mit Techniken wie qPCR amplifiziert und nachgewiesen werden kann. Diese Eigenschaft ermöglicht eine genaue Diagnose von RNA-Viren wie HIV, Influenza A und Influenza B.
Abbildung 1. Schematische Darstellung des Reverse-Transkriptionsprozesses
Die Suche nach schnelleren, empfindlicheren und einfacher zu handhabenden molekulardiagnostischen Reagenzien für RT-qPCR ist derzeit der wichtigste Entwicklungstrend. Als einer der wichtigsten Rohstoffe im RT-qPCR-Prozess muss die Reverse Transkriptase eine schnellere Reverse-Transkriptionsgeschwindigkeit, eine höhere Syntheseausbeute und eine bessere Hitzebeständigkeit aufweisen. Um eine für RT-qPCR besser geeignete Reverse Transkriptase zu erhalten, hat
Abbildung 2. Schematische Darstellung der Reverse-Transkription
Hifair™Reverse Transkriptasen
| Produktname (Produktnummer ) | Produktmerkmale | Empfohlene Anwendung |
| Thermisch stabil (bis 65°C), geeignet für komplexe Vorlagen | RT-LAMP | |
| Starke Kompatibilität, hohe Geschwindigkeit und hohe Syntheseausbeute | Ein Schritt RT-PCR/qPCR |
Hinweis: Alle oben genannten Enzyme sind in hochkonzentrierten oder glycerinfreien Formulierungen erhältlich.
Wir stellen nun eine Reverse Transkriptase vor, die in RT-qPCR-Reagenzien für die molekulare Diagnostik verwendet wird: HifairTM V Reverse Transkriptase. Dieses Enzym zeichnet sich durch seine hohe Kompatibilität, hohe Geschwindigkeit und hohe Syntheseausbeute aus und kann Reaktionstemperaturen bis zu 58 °C standhalten. Es eignet sich besonders gut für die Entwicklung von RT-qPCR-Reagenzien für die molekulare Diagnostik.
Leistungsdemonstration von Hifair™ V Reverse Transkriptase
1.Da es einer Reaktionstemperatur von 58°C standhält, eignet es sich für die Reverse Transkription komplexer RNA-Vorlagen.
Abbildung 3. Die Reverse Transkriptase von HifairTM V Reverse Transkriptase und die Marke T* wurden 30 Minuten lang bei 55 °C bzw. 58 °C inkubiert, um die verbleibende Enzymaktivität festzustellen. Die Ergebnisse zeigten, dass HifairTM Die V-Reverse-Transkriptase konnte nach 30-minütiger Inkubation bei 58 °C immer noch eine Aktivität von 70 % aufrechterhalten, was deutlich über dem Wert der Marke T* lag.
2.Die Nachweisrate von RT-qPCR war besser als die anderer Marken,und tDer Nachweisbereich betrug 1 pg-1 μg.
Abbildung 4. Unter Verwendung von 1 pg-1 μg (7 Gradienten) Gesamt-RNA von 293T-Zellen als Vorlage wurde die Reverse Transkription mit Hifair durchgeführt.TM V Ein-Schritt-RT-gDNA-Verdau SuperMix für qPCR (Kat.-Nr. 11142), V*, T*. Die erhaltene cDNA wurde quantitativ mittels qPCR analysiert. Die Ergebnisse zeigten, dass die Sensitivität von 11142ES 1 pg erreichen konnte, was besser war als bei anderen Marken.
Die Reverse-Transkriptase-Mutantenbibliothek von Yeasen
Tabelle 2. Der Leitfaden zur Auswahl von Reverse-Transkriptase-Mutanten von
Empfohlene Produkte
| Produktklassifizierung | Produktname | Katalog-Nr. |
| Hochleistungs-PCR-Enzymserie | 10726ES | |
| 11300ES | ||
| 14455ES | ||
| 10603ES | ||
| 10125ES |