Reverse Transkriptase, auch bekannt als RNA-abhängige DNA-Polymerase, ist ein DNA-Polymerase-Enzym, das einzelsträngige RNA in DNA umschreibt. Die Leistung der Reversen Transkriptase wirkt sich direkt auf die endgültige Leistung molekulardiagnostischer Reagenzien aus. Als Reaktion auf die Probleme der Hersteller molekulardiagnostischer Reagenzien hat Yeasen die Richtungsumwandlung der Reversen Transkriptase durchgeführt. Reverse Transkriptase weist eine hervorragende Leistung auf und wird von den Kunden gut angenommen!

1. Was ist die Funktion der Reversen Transkriptase?
2. Wie wählt man die Reverse Transkriptase aus?
3. Warum sollten Sie sich für die Reverse Transkriptase von Yeasen entscheiden?
4. Verwandte Produkte und Leistung
5. Verwandte Produkte

1. Was ist die Funktion der Reversen Transkriptase?

Reverse Transkriptase ist eine RNA-abhängige DNA-Polymerase. Sie kann die Matrizen-RNA transkribieren und komplementäre DNA (cDNA) bilden. Einzelsträngige cDNA wird mithilfe der DNA-Polymerase in doppelsträngige DNA umgewandelt. Reverse Transkriptasen werden daher häufig verwendet, um den Grad der mRNA-Synthese zu quantifizieren, wenn sie mit der Polymerase-Kettenreaktionstechnik, genannt RT-PCR, kombiniert werden. Quantitative RT-PCR-Tests werden häufig zur Krankheitsdiagnose verwendet. Daher spielt die Reverse Transkriptase eine wichtige Rolle in der wissenschaftlichen Forschung und praktischen Anwendung.

2. Wie wählt man die Reverse Transkriptase aus?

Gängige Reverse Transkriptasen sind M-MLV und AMV, wobei M-MLV besser ist als AMV. Herkömmliche RT-Enzyme haben jedoch zwei aktive Stellen, eine für die Polymeraseaktivität und eine für die Ribonuklease-H-Aktivität. RNase H ist eine Endonuklease, die den RNA-Anteil der DNA-RNA-Hybridfamilie abbauen kann. Daher ist eine Reverse Transkriptase ohne RNase-H-Aktivität für die cDNA-Synthese von Vorteil. Darüber hinaus ist die Verwendung einer thermostabilen Version von RT von Vorteil, um die unspezifische Nukleinsäureamplifikation zu verringern und den Einfluss komplexer Sekundärstrukturen zu minimieren.

3. Warum sollten Sie sich für die Reverse Transkriptase von Yeasen entscheiden?

Yeasen hat eine gerichtete Modifikation der Reversen Transkriptase durchgeführt, die die RNase H-Aktivität entfernt und so die Fähigkeit zur cDNA-Synthese verbessert. Einsatz der Proteinevolutionstechnologie zur Verbesserung der Thermostabilität der Reversen Transkription.

Die Reverse Transkriptase von Yeasen verfügt nicht nur über eine starke Synthesefähigkeit, sondern auch über eine starke Toleranzfähigkeit. Darüber hinaus stellt Yeasen strenge Anforderungen an die Qualität. Es ist die beste Wahl für Reverse Transkriptase.

4. Verwandte Produkte und Leistung

4.1 Hochtemperaturbeständig bis 65°C

Unter Verwendung von 500 ng Gesamt-RNA aus 293T-Zellen als Vorlage wurde die Reverse Transkription bei 42–65 °C unter Verwendung von Hifair™ Ⅲ Reverse Transkriptase durchgeführt. Nehmen Sie 1 μL cDNA als Vorlage, um das TFRC-Gen (4,4 kb) zu amplifizieren.

Abbildung 1. Reverse Transkription bei 42°C-65℃ durchführen

4.2 Kompatibel mit komplexen Vorlagen

Eine Reaktionstemperatur von 55 °C genügt der Reverse-Transkription herkömmlicher Vorlagen und Vorlagen für Sekundärstrukturen, und die Reaktionstemperatur von Vorlagen mit hoher GC-Zahl kann entsprechend auf 65 °C erhöht werden.

Abbildung 2.Geeignet für GC-reiche Vorlagen und Sekundärstrukturvorlagen

4.3 Hervorragende Erweiterungsleistung

Unter Verwendung von 500 ng Gesamt-RNA von 293T-Zellen als Vorlage und Oligo(dT) als Primer wurde cDNA mithilfe von Hifair™ Ⅲ Reverse Transkriptase synthetisiert. Nehmen Sie 1 μL cDNA als Vorlage, um 500 bp von 5' des DY1C1N1-Gens (19,9 kb) zu amplifizieren. Die Ergebnisse zeigten, dass Hifair™ Ⅲ Reverse Transkriptase cDNA bis zu 19,8 kb synthetisieren kann.

Abbildung 3. Bis zu 19,8 kb cDNA können synthetisiert werden

4.4 Schnelle Synthese

Unter Verwendung der RNA von 293T-Zellen als Vorlage wurde die Reverse Transkription gemäß dem Standardverfahren im Handbuch durchgeführt und die Reverse Transkriptionszeit auf 5, 10, 15, 30, 45 bzw. 60 Minuten eingestellt. Hifair™ III Reverse Transkriptase kann innerhalb von 5 Minuten eine 6 kb cDNA synthetisieren und ihre Spezifität und Ausbeute sind denen der Marke V überlegen.

Abbildung 4. 6kb cDNA kann innerhalb von 5 Minuten synthetisiert werden

4.5 Großer linearer Bereich

Unter Verwendung von 5 pg-5 μg Gesamt-RNA von 293T-Zellen als Vorlage wurde cDNA mithilfe von Hifair™ III Reverse Transkriptase synthetisiert. 1 μL cDNA wurde als Vorlage verwendet und qPCR wurde an den vier Genen durchgeführt. Die Ergebnisse zeigten, dass die Amplifikationseffizienzen alle zwischen 98 % und 100,10 % lagen. Dies zeigt, dass cDNA in einem breiten linearen Bereich von Vorlagen effizient synthetisiert werden kann.

Abbildung 5. cDNA kann effizient in einem breiten Vorlagenbereich synthetisiert werden

4.6 Strenge Qualitätskontrolle

Um die stabile Leistung des Reverse-Enzyms von Yeasen sicherzustellen, setzt Yeasen die Anforderungen im Produktionsprozess strikt um, um den Produktionsprozess zu stabilisieren und die Chargenstabilität sicherzustellen. Gleichzeitig wird die Qualitätskontrolle verstärkt, um Rückstände wie Exonuklease, Nickase, RNase usw. zu erkennen, um Stellen Sie sicher, dass keine Rückstände vorhanden sind, um nachfolgende Experimente nicht zu beeinträchtigen.

Abbildung 6. Rückstandserkennung

5. Verwandte Produkte

Die von Yeasen bereitgestellten Produkte sind wie folgt.

Tabelle 1. Ähnliche Produkte

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Die Richtlinie zur Auswahl der reversen Transkriptase

YEASEN UDG: Der „Antifouling-Experte“ für PCR-Reaktionen