——Más genotipado, menos tiempo y menos reactivos
La genotipificación basada en PCR y otros experimentos a menudo requieren la purificación del ADN genómico de las muestras. Cuando hay muchas muestras para analizar, el proceso de purificación del ADN genómico es lento, repetitivo y costoso. YEASEN Biology ha desarrollado una serie de productos de kit de PCR directa modificando la ADN polimerasa Taq y optimizando el sistema de reacción de PCR, eliminando la necesidad de purificación genómica.
PCR inteligente: PCR directa
El kit de PCR directa de YEASEN comienza directamente con la muestra, utilizando cantidades mínimas de muestras crudas (Figura 1-A) o sus productos lisados (Figura 1-B) sin purificación genómica como plantillas para la genotipificación basada en PCR (Figura 1). En comparación con la genotipificación basada en PCR convencional, el kit de PCR directa utiliza menos muestra, es fácil de operar, tiene un bajo costo experimental y permite una detección de muestras de alto rendimiento.
Fig.1 Flujo de trabajo de amplificación por PCR directa
A. Método directo: Tome una pequeña cantidad de la muestra y agréguela directamente a la mezcla maestra de PCR para la identificación por PCR.Ventajas técnicas
Directo: no es necesaria una purificación de ADN costosa y que requiere mucho tiempo.
Rápido: la preparación de la plantilla se completa en 10 minutos y la reacción de PCR se completa en tan solo 30 minutos.
Simple: las muestras se pueden lisar sin necesidad de cortarlas ni molerlas, y la mezcla de PCR viene en forma premezclada, lo que reduce la cantidad de pasos de pipeteo.
Ahorro: Poca cantidad de materiales utilizados.
Alto rendimiento: las reacciones de lisis se pueden completar en una placa de 96 pocillos.
Resistente a la inhibición: tolerante a diversas muestras animales y vegetales.
Proceso experimental del kit de PCR directa
Esta serie de productos utiliza un sistema de lisis de proteasas exclusivo para lisar las muestras. La solución de lisis se puede utilizar directamente como plantilla y combinarse con la mezcla maestra de PCR incluida en el kit para la amplificación de genes.
Fig.2 Proceso experimental de PCR directa de tejidos de ratón
Higo.3 Proceso del experimento de PCR directa en tejido vegetal
Tabla de selección de productos de PCR directa
| Serie de productos | PCR directa de ratón de segunda generación | |||
| Número de producto | 10189ES | 10185ES | 10188ES | 10187ES |
| Presupuesto | 20 toneladas/50 toneladas/200 toneladas/500 toneladas | 50 toneladas/200 toneladas | 20 toneladas/50 toneladas/200 toneladas/500 toneladas | 50 toneladas/200 toneladas |
| Características | ||||
| Longitud del amplicón | ≤5 kb | ≤1 kb | ≤8 kb | ≤1 kb |
| Tiempo de extensión (s/kb) | 3-20 segundos | 30 segundos | ≤2 kb: 3-5 s ≤8 kb: 10 s | 60 segundos |
| Organismos aplicables | Ratones, ratas | Ratones, ratas | Humanos, ratones, cabras, pollos, cerdos, etc. | Arroz, maíz, tabaco, colza, trigo, soja, etc. |
| Tipos de tejidos/materiales aplicables | Cola de ratón, oreja de ratón, dedos (con músculo) y otros órganos | Cola de ratón, oreja de ratón, dedos (con músculo) y otros órganos | Sangre fresca que contiene anticoagulantes comunes como EDTA, heparina, citrato, sangre refrigerada (congelada) y gotas de sangre seca comerciales como Whatman903® y TLC® | Hojas tiernas, Hojas viejas, Plántulas, Tallos tiernos |
| Ejemplo de uso | Tejido: 5 mg Cola de ratón: 1-5 mm | Tejido: 5-10 mg Cola de ratón: 1-5 mm | Sangre entera: 0.5%-20% papel Whatman® Manchas de sangre seca: 1 mm2 | Hoja: 1-10 mm Semilla: 1-3 mm |
| Tiempo de liberación genómica | 5-10 minutos | 15 minutos | 0-3 minutos | 0-10 minutos |
| Estructura final del producto | Puntas romas | Puntas romas | Puntas romas | Puntas romas |
| Temperatura de recocido | Temperatura-(2~5)℃ | Temperatura-(2~5)℃ | Temperatura-(1~2)℃ | Temperatura-(2~5)℃ |
| Rango de recorte de GC | 29-70% | 30-70% | 30-75% | 40-65% |
| Actividad de la exonucleasa 5'-3' | Sí | Sí | Sí | Sí |
| Aplicaciones | ||||
| Genotipado | Sí | Sí | Sí | Sí |
| PCR multiplexada | Hasta 5x |
| Hasta 3-4x |
|
| Amplificación directa de muestras | Sí | Sí | Sí | Sí |
| Otras características | ||||
| Indicador de electroforesis | Incoloro | Azul | Incoloro | Azul |
| Arranque en caliente | Sí | Sí | Sí | Sí |
| Premezclado/Kit | Kit (con Mix) | Kit (con Mix) | Kit (con Mix+buffer) | Kit (con Mix) |
Ventajas del producto
La ADN polimerasa Taq modificada es la garantía de la PCR directa: tiene súper tolerancia a los inhibidores.
Cuando se utilizan muestras no purificadas como plantillas, se introducen muchos componentes que inhiben las reacciones de PCR. Es difícil lograr resultados ideales, o incluso imposible, realizar la amplificación por PCR con los sistemas de reacción de PCR ordinarios y la ADN polimerasa Taq. La mezcla de PCR de esta serie de kits es una premezcla optimizada en cuanto a fórmula, que utiliza una ADN polimerasa Taq modificada, que aumenta la capacidad de unión al ADN de plantilla y tiene una mayor tolerancia a los inhibidores de PCR comunes, por lo que tiene una adaptabilidad de plantilla más amplia.
Fig.4 La mezcla de PCR en el kit de PCR directa tiene una mayor tolerancia a las impurezas. Se utiliza la misma cantidad de plantilla para la PCR con diferentes mezclas de PCR y se añaden al sistema distintas concentraciones de inhibidores de la reacción de PCR. Se compara la cantidad de productos de PCR en diferentes condiciones.
YFACILITAR Ha desarrollado una serie de productos para diferentes muestras:
- I. Tipo específico de roedores: Kit de PCR directa de tejido de ratón Plus (10189ES)
Muestras aplicables: tejidos de ratón (como cola de ratón, orejas de ratón, dedos de ratón, etc.)
- Alta eficiencia de amplificación (longitud, velocidad, compatibilidad con GC)
Fig.5 El kit PCR directo de tejido de ratón Plus amplifica lisados de diferentes tejidos. 1: plásmido; 2: oreja de ratón; 3: cola de ratón; 4: hígado. Condiciones de lisis: lisis a 70 °C durante 10 min, inactivación a 95 °C durante 5 min. Los fragmentos objetivo son 1 KB, 2 KB, 3 kb, y 6 kb, con tiempos de extensión establecidos en 3, 5, 10 y 20 segundos/kb, respectivamente. M: 10510ES60 (YEASEN).
- Amplia compatibilidad de plantillas (10189ES)
Figura 6 Se utilizó el kit Mouse Tissue Direct PCR Kit Plus para lisar directamente (70 °C durante 10 min) y amplificar células humanas 293. (1), saliva (2) y tejido del cuero cabelludo (3) Todas las muestras mostraron bandas objetivo claras, M: 10510ES60 (YEASEN).
- II. Kit de PCR directa avanzada para sangre de múltiples especies (10188ES)
- Longitud de amplificación hasta 8 kb
Fig.7 Se amplificaron fragmentos de ADN de longitudes variables directamente de sangre humana completa utilizando el kit Blood Advanced Direct PCR. Las muestras de sangre se almacenaron a -20 ℃ con EDTA como anticoagulante. La concentración de la plantilla de sangre fue del 10 % y el tiempo de extensión se estableció en 10 s/kb. M: 10510ES60 (YEASEN).
- Alta tolerancia
Figura 8 A: El kit de PCR directa avanzada de sangre se utiliza para amplificar un fragmento de ADN de 2 kb con un contenido de GC del 71 % directamente de sangre entera humana anticoagulada con EDTA. La concentración de la plantilla de sangre se establece mediante un gradiente de 0,5 a 50 %, y el tiempo de extensión se establece en 10 s/kb. B: El kit de PCR directa avanzada de sangre se utiliza para amplificar un fragmento de ADN de 2,2 kb con un contenido de GC del 67 % directamente a partir de sangre completa anticoagulada con EDTA de ratón. La concentración de la plantilla de sangre se establece entre el 0,5 y el 50 %, y el tiempo de extensión es de 10 s/kb. M: 10510ES60 (YEASEN).
- III. Tipo específico de planta: Kit de PCR directa de tejido vegetal (10187ES)
- Verificado con múltiples tipos de muestras de plantas.
Fig.9 Resultados de la amplificación directa a partir de tejidos de hojas de diferentes tipos de plantas. M: escalera de ADN de 100 pb. C: ADN genómico purificado de las plantas correspondientes como plantilla. 1-2: lisado de tejido de hoja como plantilla. Número de ciclos: 30 ciclos.
Caso de cliente
- I. Identificación del genotipo del ratón
Una empresa biológica en Guangzhou:
Fig.10 Amplificación de la cola del ratón utilizando el kit Mouse Direct PCR (10189ES). Gen diana: 500 pb; tiempo de lisis: 10 min; sistema de reacción de PCR: 25 μL, tiempo de extensión: 5 s/kb.
- segundo.Amplificación directa del gen del arroz
XX Universidad
Fig.11 El kit Plant Direct PCR (10187ES) se utiliza para amplificar genes relacionados con el arroz.
Rexaltado PAGproductos
| Posicionamiento del producto | Nombre del producto | Número de producto | Especificaciones del producto |
| Agarosa de alta calidad | 10208ES60/76 | 100 gramos/500 gramos | |
| Tinciones de ácidos nucleicos (bajo luz ultravioleta) | 10202ES76 | 500 μL | |
| Actualización rápida de PCR, puede ser PCR de colonias y adecuada para amplificación de plantillas complejas | 10167ES03/08 | 1 ml/5 x 1 ml |