Catégorie de produit

Principe

Avantages

Inconvénients

Réactif de transfection de liposomes

1. Les réactifs de transfection de liposomes contiennent des lipides chargés positivement qui se lient aux acides nucléiques chargés négativement pour former des complexes lipides-acides nucléiques.

2. Ces complexes sont attirés par la membrane cellulaire chargée négativement.

3. La cellule engloutit les complexes dans les endosomes par endocytose.

4. L'effet « éponge à protons » des lipides dans les complexes empêche l'acidification des endosomes, entraînant une déstabilisation et une rupture de la membrane, libérant les complexes dans le cytoplasme.

5. Les petits acides nucléiques comme l’ARNsi, l’ARNmi ou l’ARNm peuvent fonctionner dans le cytoplasme, tandis que l’ADN doit pénétrer dans le noyau pour être exprimé.

6. Une fois dans le noyau, l’ADN est transcrit en ARNm et traduit en protéines, exprimant le gène étranger.

1. Les réactifs de transfection de liposomes offrent une efficacité élevée avec diverses lignées cellulaires, y compris les cellules primaires difficiles à transfecter.

2. Ils sont polyvalents, compatibles avec les cellules adhérentes et en suspension, ainsi qu'avec divers acides nucléiques comme l'ADN, l'ARNsi et l'ARNmi.

3. Ces réactifs fonctionnent bien dans les milieux contenant du sérum, évitant ainsi la nécessité de retirer le sérum et minimisant ainsi les dommages cellulaires.

1. Les réactifs de transfection de liposomes peuvent être toxiques pour les cellules, en particulier à des concentrations élevées ou sur de longues périodes, affectant potentiellement la survie et la fonction des cellules.

2. Elles sont plus chères que les méthodes traditionnelles comme la transfection au phosphate de calcium.

3. Leur application in vivo est limitée en raison de la clairance sérique, de l’accumulation dans les tissus pulmonaires et du potentiel à provoquer de fortes réponses inflammatoires et une toxicité élevée.

Île-du-Prince-Édouard réactif de transfection

1. Le PEI, un polymère chargé positivement, se lie à l'ADN chargé négativement pour former des complexes PEI-ADN par le biais d'interactions électrostatiques.

2. Ces complexes se fixent à la membrane cellulaire chargée négativement.

3. Les cellules engloutissent les complexes PEI-ADN par endocytose, formant des endosomes.

4. L'effet « éponge à protons » du PEI provoque le gonflement et l'éclatement des endosomes dans l'environnement acide, libérant les complexes dans le cytoplasme.

5.Dans le cytoplasme, les liaisons PEI-ADN se brisent, permettant à l'ADN de pénétrer dans le noyau, où il est transcrit et traduit en protéines.

1. Les réactifs de transfection PEI forment des complexes stables avec l’ADN, améliorant ainsi l’efficacité de la transfection.

2. Ils ont une cytotoxicité inférieure à celle des autres polymères cationiques, préservant ainsi la viabilité et la fonction cellulaire.

3. Les réactifs PEI offrent une solution rentable, en particulier pour les transfections à grande échelle comme la production de vecteurs viraux.

4. Les réactifs PEI sont disponibles en qualité GMP pour la production clinique et commerciale, garantissant qualité et conformité.

1. Les réactifs de transfection PEI ont une polyvalence limitée, principalement utilisés pour l'ADN et moins efficaces avec d'autres acides nucléiques comme l'ARNm, l'ARNsi et l'ARNmi.

2. Ils présentent une grande efficacité dans des types de cellules spécifiques, tels que les cellules HEK293, pour l’emballage des virus et l’expression des protéines, mais sont peu performants avec les cellules difficiles à transfecter.

Réactif de transfection au phosphate de calcium

1. Des coprécipités d'ADN/phosphate de calcium se forment dans le tampon HEPES avec le phosphate, où la charge négative de l'ADN se lie aux ions calcium positifs.

2. Les cellules engloutissent ces coprécipités, qui adhèrent à leur surface, par endocytose, une étape critique pour l'efficacité de la transfection.

3. À l’intérieur des cellules, les coprécipités libèrent de l’ADN, ce qui peut conduire à une expression transitoire ou à une intégration stable dans le génome.

1. La transfection au phosphate de calcium est rentable et adaptée aux laboratoires disposant de budgets limités.

2. Il est facile à réaliser, nécessitant des étapes simples et des compétences techniques minimales.

3. Il peut être utilisé à la fois pour l’expression transitoire de protéines et pour la création de lignées cellulaires stables.

1. L’efficacité de la transfection au phosphate de calcium est variable et sensible à des facteurs tels que le pH et la pureté de l’ADN, ce qui peut conduire à des transfections ratées, en particulier avec de l’ADN impur.

2. Il ne convient pas à tous les types de cellules, principalement utilisé pour les cellules HEK293, et moins efficace pour les cellules primaires et certains autres types de cellules.