Yeasen et Molefuture ont développé une ligase ADN T4 thermotolérante, haute fidélité pour lutter contre la fausse ligature

Yeasen et Molefuture présentent une ADN ligase T4 avancée pour surmonter les défis de la biologie moléculaire

Yeasen et Molefuture ont développé conjointement une ADN ligase T4 de pointe à l'aide de leur plateforme ZymeEditor, abordant ainsi des problèmes clés en biologie moléculaire et en construction de bibliothèques d'ADN pour le séquençage de nouvelle génération (NGS). L'ADN ligase T4 traditionnelle est confrontée à des défis tels qu'une faible stabilité, une formation élevée de dimères d'adaptateurs et une auto-ligature élevée des fragments d'ADN. Cette nouvelle enzyme vise à surmonter ces limitations.

L'ADN ligase T4, une enzyme dépendante de l'ATP, présente un domaine de liaison à l'ADN hélicoïdal compact (DBD), un domaine de nucléotidyltransférase (NTase) et un domaine de repliement OB. En analysant la structure des protéines, les chercheurs ont identifié des résidus clés à 5 à 20 Å du substrat ADN. À l'aide d'outils informatiques avancés, de criblage in silico et d'analyses structure-fonction, ils ont conçu des mutants par alignement de séquences consensus, intégrant des informations structurelles et fonctionnelles.

En plus de la conception rationnelle, l'équipe a utilisé la méthode MTPS pour l'évolution dirigée, en sélectionnant plus de 10 000 mutants pour la stabilité, l'activité et l'activité résiduelle. Les candidats prometteurs ont subi une purification et des tests rigoureux. Une caractérisation détaillée a suivi, évaluant l'activité, la stabilité, l'auto-ligature de l'adaptateur, l'auto-ligature des fragments d'ADN et le rendement en ADN.

Les chercheurs ont combiné la conception rationnelle de l'ADN et la mutation dirigée sur les mutants G1 pour développer des variantes exceptionnelles adaptées à diverses applications. Cette approche globale a permis de mettre au point une ADN ligase T4 hautement efficace et fiable, destinée à améliorer la recherche en biologie moléculaire et la construction de bibliothèques d'ADN dans le NGS.

Figure 1. Illustre l'évolution de la ligase ADN T4 Versatility. (A) Conception rationnelle (B) Criblage de mutants de l'ADN ligase T4 thermotolérants à 45 ℃, conduisant à l'identification de mutants avec une activité spécifique significativement améliorée. (C) Criblage de mutants de l'ADN ligase T4 visant à réduire la formation de dimères adaptateurs lors de la préparation de la bibliothèque d'ADN. (D) Évaluation du rendement de la bibliothèque après traitement thermique à 42 ℃ pendant 1 heure en utilisant la méthode de préparation de la bibliothèque d'ADN.
Tableau 1. L'ADN ligase T4 polyvalente de Yeasen est thermostable. L'enzyme a été traitée à 30 ℃ pendant 5 jours et analysée par la méthode DNA Lib Prep.
Figure 2. L'ADN ligase T4 polyvalente de Yeasen présente une fidélité plus élevée par rapport à l'ADN ligase T4 de type sauvage (WT) indiquée par une formation moindre de dimères adaptateurs en raison d'une auto-ligature erronée (A) et (B) analysée par la méthode DNA Lib Prep.
Figure 3. La ligase ADN T4 polyvalente Yeasen présente la formation de dimères adaptateurs la plus faible par rapport aux ligases ADN T4 commerciales, y compris les ligases thermotolérantes analysées par la méthode DNA Lib Prep.
Cette avancée démontre l’engagement de Yeasen et Molefuture en faveur de l’innovation et de l’excellence en ingénierie enzymatique.

Informations de commande

Nom Chat# Remarques
Enzyme Ligase ADN T4 polyvalente Hieff™ (600 U/µL) 12996ES Thermotolérant et haute fidélité pour la détection des gènes tumoraux
ADN Kit de préparation de bibliothèque d'ADN Hieff NGS® 13577ES Méthode tumorale/mécanique
Kit de préparation de bibliothèque d'ADN Hieff NGS® OnePot Pro V2 12194ES Tumeur/Méthode enzymatique
Système Hieff NGS® OnePot Kit de préparation de bibliothèque d'ADN II pour Illumina 13490ES Pathgen/Enzymatique/temps régulier (140min)
Kit de préparation de bibliothèque d'ADN Flash Hieff NGS® OnePot 12316ES Pathgen/ Enzymatique/ Ultrarapide (100min)
Kit de co-préparation de bibliothèque d'ADN et d'ARN Hieff NGS® V2 12305ES Pathgen/Co-préparation enzymatique/ADN et ARN
ARN Kit de préparation de bibliothèque d'ARNm bimode Hieff NGS® Ultima 12308ES Sans billes magnétiques oligo dT, 11 tubes
Kit de préparation de bibliothèque d'ARNm bimode Hieff NGS® Ultima 12309ES billes magnétiques oligo dT plus, 14 tubes
Kit de préparation de bibliothèque d'ARN bimode Hieff NGS® Ultima 12310ES Version pré-mélangée, 5 tubes
Kit de préparation de bibliothèque d'ARN Hieff NGS ® EvoMax (version prémélangée) (actinomycine D Gratuit) 12340ES Version pré-mélangée, (Actinomycine D Gratuit)
Kit de déplétion d'ARNr Hieff NGS® MaxUp (plante) 12254ES Usine
Kit de déplétion d'ARNr humain Hieff NGS® MaxUp (ARNr et ITS/ETS) 12257ES Humain

Veuillez laisser un message pour vous renseigner sur les données de comparaison des performances entre cette enzyme et d'autres ligases ADN T4 thermostables et conventionnelles de premier ordre.

À propos de Molefuture Biotechnology

Molefuture Biotechnology est une filiale de Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd., spécialisée dans la fourniture de solutions personnalisées de modification d'enzymes basées sur la technologie de l'évolution enzymatique. Tirer parti des ressources de Yeasen Biotechnologie, Molefuture opère sur six plateformes technologiques majeures : la plateforme innovante d'évolution enzymatique ZymeEditor, une plateforme d'expression multi-hôtes à haute efficacité, une plateforme de développement de processus de fermentation, une plateforme de développement de processus de purification, une plateforme de production d'enzymes ultra-propres et une plateforme d'analyse et de contrôle qualité des enzymes. Avec ces six plateformes technologiques, Molefuture peut offrir un ensemble complet de solutions personnalisées comprenant l'évolution dirigée par les enzymes, le développement de nouvelles enzymes, le développement de processus enzymatiques et la production à grande échelle au niveau des BPF pour répondre aux exigences d'application des enzymes dans des domaines tels que le diagnostic in vitro, la biomédecine, la biologie synthétique, l'esthétique médicale, les intermédiaires pharmaceutiques, etc.

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