Une percée remarquable dans la préparation de la bibliothèque d'ARN spécifique au brin

Avez-vous déjà eu des doutes lors de la construction d'une bibliothèque d'ARN ? Les inquiétudes concernant la toxicité de certains réactifs et la nécessité de travailler dans un environnement sans lumière peuvent être assez déroutantes, en particulier lorsqu'il s'agit de traiter de nombreux échantillons. L'actinomycine D a souvent été la source de ces inquiétudes, car elle est connue pour sa toxicité et sa sensibilité à la lumière. Mais pourquoi l'actinomycine D est-elle incluse dans les kits de bibliothèque ?

Des découvertes récentes ont révélé que l'actinomycine D possède la capacité d'inhiber la transcription. Elle y parvient en se liant à l'ADN au niveau du complexe d'initiation de la transcription, empêchant ainsi l'élongation des chaînes d'ARN par l'ARN polymérase. Essentiellement, l'actinomycine D interfère avec l'activité de la polymérase, empêchant la synthèse simultanée du deuxième brin pendant le processus de synthèse de l'ADNc. Cela permet d'utiliser le dUTP au lieu du dTTP dans la synthèse à deux brins, ce qui conduit à une spécificité de chaîne améliorée dans la construction de la bibliothèque d'ARN.

L'incorporation de l'actinomycine D dans les kits de construction de bibliothèques d'ARN a indéniablement amélioré la construction de bibliothèques spécifiques à chaque brin, améliorant considérablement la spécificité de la chaîne. Cette innovation a rationalisé le processus expérimental, le simplifiant pour les chercheurs. De plus, elle a considérablement amélioré la spécificité de la chaîne, un aspect essentiel des recherches scientifiques liées à l'ARN.

Cependant, l'actinomycine D présente des inconvénients : elle est toxique et nécessite une protection contre la lumière. Dans le contexte actuel de demande croissante de kits de construction de bibliothèques pré-mélangées et de plaques, la nécessité de se protéger de la lumière limite les avancées des kits de plaques.

Heureusement, il n'y a plus lieu de s'inquiéter de l'actinomycine D. La plateforme Yeasen ZymeEditor a introduit un mutant révolutionnaire de l'enzyme MMLV qui remplace la fonction de l'actinomycine D. Ce nouveau Le kit est inodore, non toxique et nj'ai besoin d'éviter Léger. Il offre une spécificité de chaîne supérieure, éliminant ainsi les problèmes liés à la santé et à la sensibilité à la lumière.

Tableau 1 : Caractéristiques distinctives des kits de préparation d'ARN Lib de Yeasen

Figure 3. Lors de l'utilisation du kit contenant de l'actinomycine D avec le nouveau kit sans actinomycine D, les rendements étaient comparables pour les deux kits à des apports d'ARN de 10 ng et 1 μg. Cependant, à un apport d'ARN de 4 μg, le nouveau kit sans actinomycine D a montré des rendements plus élevés.

Figure 4. L'utilisation du nouveau kit, comprenant un mutant MMLV sans ajout d'actinomycine D, entraîne une spécificité de brin supérieure par rapport au kit qui incorpore l'actinomycine D. Cette distinction devient plus prononcée, en particulier à des apports d'ARN inférieurs de 10 ng.

Yeasen, qui s'engage à améliorer l'expérience client, continue d'innover dans le domaine des kits de bibliothèques d'ARN.

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