Yeasen और molefuture ने थर्मोटोलरेंट, उच्च निष्ठा T4 डीएनए लिगेज को झूठे बंधाव का मुकाबला करने के लिए विकसित किया

येसेन और मोलफ्यूचर ने आणविक जीव विज्ञान की चुनौतियों से निपटने के लिए उन्नत टी4 डीएनए लाइगेस पेश किया

येसेन और मोलफ्यूचर ने संयुक्त रूप से अपने ज़ाइमएडिटर प्लेटफ़ॉर्म का उपयोग करके एक अत्याधुनिक T4 DNA लाइगेज विकसित किया है, जो अगली पीढ़ी के अनुक्रमण (NGS) के लिए आणविक जीव विज्ञान और DNA लाइब्रेरी निर्माण में प्रमुख मुद्दों को संबोधित करता है। पारंपरिक T4 DNA लाइगेज को खराब स्थिरता, उच्च एडेप्टर डिमर गठन और उच्च DNA खंड स्व-लिगेशन जैसी चुनौतियों का सामना करना पड़ता है। इस नए एंजाइम का उद्देश्य इन सीमाओं को दूर करना है।

टी4 डीएनए लाइगेज, एक एटीपी-निर्भर एंजाइम है, जिसमें एक कॉम्पैक्ट-हेलिकल डीएनए-बाइंडिंग डोमेन (डीबीडी), एक न्यूक्लियोटिडाइल-ट्रांसफरेज (एनटीएएस) डोमेन और एक ओबी-फोल्ड डोमेन होता है। प्रोटीन संरचना का विश्लेषण करके, शोधकर्ताओं ने डीएनए सब्सट्रेट के 5 से 20Å के भीतर प्रमुख अवशेषों की पहचान की। उन्नत कम्प्यूटेशनल टूल, सिलिको स्क्रीनिंग और संरचना-कार्य विश्लेषण का उपयोग करके, उन्होंने संरचनात्मक-कार्यात्मक अंतर्दृष्टि को शामिल करते हुए सर्वसम्मति अनुक्रम संरेखण के माध्यम से म्यूटेंट डिज़ाइन किए।

तर्कसंगत डिजाइन के अलावा, टीम ने निर्देशित विकास के लिए MTPS पद्धति का उपयोग किया, स्थिरता, गतिविधि और अवशिष्ट गतिविधि के लिए 10,000 से अधिक उत्परिवर्ती की जांच की। होनहार उम्मीदवारों को कठोर शुद्धिकरण और परीक्षण से गुजरना पड़ा। गतिविधि, स्थिरता, एडाप्टर सेल्फ-लिगेशन, डीएनए खंड सेल्फ-लिगेशन और डीएनए उपज का मूल्यांकन करते हुए विस्तृत लक्षण वर्णन किया गया।

शोधकर्ताओं ने डीएनए तर्कसंगत डिजाइन और जी1 म्यूटेंट पर निर्देशित उत्परिवर्तन को संयोजित करके विविध अनुप्रयोगों के लिए उपयुक्त असाधारण वेरिएंट विकसित किए हैं। इस व्यापक दृष्टिकोण के परिणामस्वरूप एक अत्यधिक कुशल और विश्वसनीय टी4 डीएनए लाइगेज प्राप्त हुआ है, जो एनजीएस में आणविक जीव विज्ञान अनुसंधान और डीएनए लाइब्रेरी निर्माण को बढ़ाने के लिए तैयार है।