Capitolo 1: Tecnologia PCR
1.1 Principi della PCR
La PCR (reazione a catena della polimerasi), o reazione a catena della polimerasi, si riferisce alla DNA polimerasi catalizzata dal filamento genitore del DNA come modello, con un primer specifico per l'estensione del punto di partenza, l'aggiunta di dNTP, Mg2+ E fattori di estensione, potenziamento dell'amplificazione fattori. Attraverso fasi di denaturazione, ricottura ed estensione, la replicazione in vitro del filamento figlio è complementare al DNA stampo del filamento padre, che può amplificare rapidamente e specificamente qualsiasi DNA bersaglio in vitro.
1.2 Classificazione delle DNA polimerasi
Il DNA pol è un enzima importante per cellulare replicazione del DNA. In base alla stabilità termica, capacità di sintesi, velocità, fedeltà e specificità, può essere classificata come Taq DNA polimerasi, DNA polimerasi ad alta fedeltà, DNA polimerasi a hot-start, DNA polimerasi a espansione diretta, DNA polimerasi a lunga frammentazione enzima, DNA polimerasi veloce, DNA polimerasi multipla e così via.
La più comune di queste è la Taq DNA polimerasi, che ha attività polimerasica all'estremità 5'→3' e attività esonucleasica all'estremità 5'→3', ma no Attività di correzione dell'estremità 3'→5'. La caratteristica più importante del Taq è la sua buona resistenza al calore, che può sopportare la denaturazione termica fare un passo di PCR, rendendo superfluo aggiungere altro enzima a metà processo. Tuttavia, Taq ha una bassa fedeltà perché non ha attività di correzione di bozze. La sua fedeltà si ottiene principalmente tramite la concentrazione e il rapporto tra ioni magnesio e dNTP.
La DNA polimerasi ad alta fedeltà contiene un centro di polimerizzazione e un centro di scissione, il centro di polimerizzazione ha un'attività di DNA polimerasi 5'→3', che può catalizzare la sintesi del DNA lungo la direzione 5'→3'; il centro di scissione ha un'attività esonucleasica 3'→5', che può effettuare la riparazione di disallineamenti di basi. Pertanto, oltre alle caratteristiche della Taq DNA polimerasi, la DNA polimerasi ad alta fedeltà ha anche un'attività correttiva, responsabile di escissione il non corrispondente nucleotidi, garantendo così l'accuratezza del prodotto.
Il diagramma sopra mostra come funziona la DNA polimerasi [1].
La PCR diretta (PCR diretta) è una reazione che utilizza campioni non purificati per l'amplificazione PCR e animali o tessuti vegetali per amplificazione diretta. Attualmente, Sììì I kit PCR diretti possono essere utilizzati per l'amplificazione PCR di campioni grezzi quali piante, tessuti animali, sangue, ecc. senza la necessità di purificazione dell'acido nucleico, che semplifica notevolmente il processo degli esperimenti PCR.
La figura sopra mostra la tecnica PCR diretta.
UN. Metodo diretto: prelevare una piccola quantità di campione e aggiungerla direttamente alla PCR Master Mix per l'identificazione tramite PCR;
B. Metodo di lisi: Dopo aver prelevato il campione, aggiungerlo alla soluzione di lisi per rilasciare il genoma, prendere una piccola quantità del surnatante di lisi e aggiungerla al PCR Master Mix per l'identificazione tramite PCR.
1.3 Domande frequenti e soluzioni
| Guaio | Motivo | Soluzione |
| Senza bande amplificate | Problemi del sistema di elettroforesi | Risolvere i problemi relativi al colorante degli acidi nucleici, alla concentrazione del gel e al tampone di elettroforesi. |
| Temperatura di denaturazione imprecisa | La temperatura indicata dello strumento PCR è coerente con la temperatura effettiva? Se la temperatura è troppo alta, l'enzima viene rapidamente nei primi cicli; se è troppo basso, la denaturazione del modello non è completa. | |
| Contaminazione di proteasi e nucleasi nel sistema di reazione | Il sistema di reazione deve essere riscaldato a 95°C per 5-10 minuti prima dell'aggiunta dell'enzima Taq. | |
| Perrore di rimatore | Controllare la specificità del primer o riprogettare i primer utilizzando BLAST. | |
| Il modello contiene impurità | In particolare, i tessuti fissati in formaldeide e inclusi in paraffina contengono spesso acido formico, che causa la depurinazione del DNA e influenza i risultati della PCR. | |
| Deterioramento e guasto del primer | Verificare che i primer sintetici siano corretti, purificati o inattivati a causa di condizioni di conservazione non idonee. | |
| Minore quantità di prodotto PCR | Temperatura di ricottura non appropriata | È stata progettata una reazione PCR a gradiente per ottimizzare la temperatura di annealing con un gradiente di 2 gradi. |
| Presenza di inibitori nel modello del DNA | Assicuratevi che il modello del DNA sia pulito. | |
| Denaturazione prolungata | La denaturazione prolungata porta all'inattivazione della DNA polimerasi. | |
| Estensione troppo corta | Il tempo di estensione è troppo breve. Impostare il tempo di estensione sul principio di 1 kb/min. | |
| Quantità di modello di DNA troppo bassa | Aumentare la quantità di modello di DNA. | |
| Quantità insufficiente di primer | Aumentare il contenuto di primer nel sistema. | |
| Numero insufficiente di cicli PCR | Aumentare il numero di cicli di reazione. | |
| Bande multiple | Scarsa specificità del primer | Per verificare la specificità dei primer o riprogettarli sono stati utilizzati software di progettazione di primer come BLAST e Primer. |
| Numero eccessivo di loop | Aumentare opportunamente la quantità di modello e ridurre il numero di cicli. | |
| Contaminazione del DNA esogeno | Garantire un funzionamento pulito. | |
| Quantità eccessiva di modelli | La quantità di DNA plasmidico dovrebbe essere <50ng, mentre quella di DNA genomico dovrebbe essere <200ng. | |
| Troppo primer | Ridurre la quantità di primer nel sistema di reazione. | |
| La soluzione di reazione non è ben miscelata | Assicurarsi che il tampone di reazione sia completamente sciolto e accuratamente miscelato. | |
| mg. Alta concentrazione | Adattare opportunamente la concentrazione di Mg utilizzata. | |
| Dosaggio elevato di enzimi o scarsa qualità degli enzimi | Ridurre la quantità di enzima o sostituirlo con un'altra fonte. | |
| Bassa temperatura di ricottura, lungo tempo di ricottura e di estensione | Aumentare la temperatura di ricottura per ridurre il tempo di denaturazione ed estensione oppure progettare una reazione PCR a gradiente per ottimizzare la temperatura di ricottura. | |
| Problemi con la miscela PCR stessa | Se si tratta di un premiscelato PCR, potrebbe dipendere dalla qualità del reagente stesso; si consiglia di cambiare lotto o di utilizzare altre marche. | |
| Taglia sbagliata | Ccontaminazione | Pulisci il banco con nuovi reagenti e punte. |
| Uso non corretto di modelli o primer | Sostituire primer e modelli. | |
| Genotipo | Sono stati eseguiti studi di analisi delle sequenze e studi BLAST sui geni studiati. |
Capitolo 2: Elettroforesi degli acidi nucleici
2.1 Principi dell'elettroforesi degli acidi nucleici
Il movimento di particelle cariche sotto l'azione di un campo elettrico verso un elettrodo opposto alle loro proprietà elettriche è chiamato elettroforesi. Utilizzando le particelle cariche nel campo elettrico muoversi a velocità diverse e ottenere la separazione della tecnologia è chiamata elettroforesi. L'elettroforesi degli acidi nucleici è un strumento importante per la ricerca sugli acidi nucleici ed è un parte integrante di tecniche quali sonde di acidi nucleici, amplificazione di acidi nucleici e analisi di sequenza. L'elettroforesi degli acidi nucleici è solitamente eseguito in agarosio o gel di poliacrilammide. Diverse concentrazioni di L'agarosio e la poliacrilammide possono formare gel con maglie di setacci molecolari di diverse dimensioni, che possono essere utilizzati per separare frammenti di acidi nucleici di diverso peso molecolare.
2.2 Elettroforesi su gel di agarosio
L'agarosio è un polimero lineare estratto dalle alghe. L'agarosio viene riscaldato in una soluzione tampone e sciolto in un sol trasparente e limpido, che viene poi versato in uno stampo di gelatina e si solidifica formando una matrice solida nota come gel, la cui densità dipende da la concentrazione di agarosio.
Agarosio l'elettroforesi su gel è un tipo di metodo di elettroforesi che utilizza l'agarosio come mezzo di supporto, e la differenza principale tra analitico principio e altro supporto elettroforesi è che ha il doppio ruolo di "setaccio molecolare" e "elettroforesi". il gel viene posto nel campo elettrico, Sotto l'azione del campo elettrico, la carica gli acidi nucleici migrano verso positivo palo Attraverso la maglia Di IL gel. IL tasso di la migrazione è influenzata dalla dimensione di molecole di acido nucleico, concentrazione di agarosio, tensione applicata, campo elettrico, tampone di elettroforesi e quantità di colorante incorporato. Dopo un tempo appropriato di elettroforoSÈ Sotto condizioni diverse, frammenti di acido nucleico con diverse dimensioni e conformazioni saranno in posizioni diverse sul gel, ottenendo così lo scopo della separazione.La separazione del gel di agarosio ha un'ampia gamma, comunemente utilizzato nel recupero del gel di taglio del DNA, nell'isolamento del DNA e utilizzato per supportare se il DNA è ricombinante, plasmide, ecc. Sia che il plasmide sia tagliato o meno, diverse concentrazioni di gel di agarosio può essere separato dalla lunghezza di 200 punti base A 50kb Di Il DNA frammenti.
2.3 Metodi sperimentali
Fabbricazione colla
Prendiamo come esempio la concentrazione dell'1%: pesare 1 g di agarosio, versarlo in una beuta conica da 250 ml, aggiungere 100 ml di tampone per elettroforesi 0,5×TBE e mescolate bene, fate bollire nel forno a microonde e poi lasciarlo asciugare all'aria a circa 60℃, aggiungere una quantità appropriata di colorante di acido nucleico e agitare bene, quindi versarlo in una piastra di gel pulita che è già stata preparata, prendere un pettine con entrambe le mani per inserire nella soluzione di gel verticalmente e attendere gel essere lasciato raffreddare naturalmente fino a completa solidificazione (25-30 min).
Togliere la colla che fa il pettine
Trasferire con attenzione il gel nel serbatoio di elettroforesi (con il vassoio del gel o solo il gel)), posizionare il lato del pozzetto del campione sul polo negativo e aggiungere 0,5× TBE tampone di elettroforesi fino a quando il gel non si trova a circa 1 mm sotto.
Aggiungere campione
Aggiungere buffer di caricamento 10× (caricamento tampone) ai campioni di DNA, mescolare bene, quindi aggiungere lentamente la miscela campione al suBgel unito pozzi con una pistola a pipetta, aggiungendo 5-10 μL di campione per pozzetto (non più di 40 μL). In genere, il primo pozzetto dovrebbe essere riempito con il marcatore del DNA, il secondo con il controllo positivo (definito DNA), E il terzo con controllo negativo (reagente o acqua), E l'ordine dei campioni deve essere registrato.
Elettroforesi
Coprire il vasca di elettroforesi, collegare il fili, accendere l'alimentazione e impostare la tensione e la corrente dell'elettroforesi e il tempo parametri. In genere, il la tensione non deve superare i 5 V/cm (la lunghezza si riferisce a la distanza tra i poli positivo e negativo della vasca di elettroforesi), E il tempo di elettroforesi è generalmente circa 15-30 minuti
Fine dell'elettroforesi
Rimuovere IL gel (senza vassoio gel) e visualizzarlo sotto il sistema di imaging UV per ottenere un'immagine elettroforetica chiara, quindi modificare l'immagine elettroforetica con il software di modifica delle immagini e etichettarlo con le informazioni del campione, la data e l'operatore.
2.4 Domande frequenti e soluzioni
| Guaio | Motivo | Soluzione |
| Banda bersaglio mancante | Il piccolo DNA finisce il gel | Ridurre il tempo di elettroforesi, ridurre la tensione, aumentare la concentrazione del gel. |
| Le bande di DNA di dimensioni di peso molecolare simili non sono facilmente distinguibili | Aumentare il tempo di elettroforesi per ottenere la concentrazione ottimale del gel. | |
| Il frammento bersaglio è troppo grande per l'elettroforesi convenzionale. | Analizzato tramite elettroforesi su gel pulsata. | |
| Nessuna clip di scopo | Il processo PCR era difettoso e non amplificava il prodotto target. | |
| Bande di DNA sfocate | Tampone di elettroforesi stantio | Quando il tampone di elettroforesi viene utilizzato più volte, la forza ionica si riduce, il valore del pH aumenta lentamente e la capacità di lavaggio si indebolisce, influenzando così l'effetto dell'elettroforesi, pertanto si consiglia di cambiare frequentemente il tampone di elettroforesi. |
| Degradazione del DNA | Evitare la contaminazione da nucleasi. | |
| Le condizioni di elettroforesi utilizzate non sono adatte per l'elettroforesi | la tensione dell'elettroforesi non deve superare i 20 V/cm e la temperatura deve essere <30°C; la temperatura dell'elettroforesi di grandi filamenti di DNA deve essere <15°C; verificare che il tampone di elettroforesi utilizzato abbia una capacità tampone sufficiente. | |
| Campionamento eccessivo del DNA | Ridurre la quantità di DNA sovracampionato nel gel. | |
| I campioni di DNA sono troppo salati | Il sale in eccesso è stato rimosso mediante precipitazione con etanolo prima dell'elettroforesi. | |
| contaminazione proteica | L'estrazione del fenolo prima dell'elettroforesi rimuove le proteine. | |
| Concentrazione del campione troppo alta | La concentrazione del campione superiore deve essere inferiore a 500 ng/pozzetto; una concentrazione troppo elevata influirà sulla velocità dell'elettroforesi, provocando trascinamento e sfocatura. | |
| Bande deboli o assenti | Dimensione del campione di DNA insufficiente | Aumentare la quantità di assorbimento del DNA |
| Degradazione del DNA | Evitare la contaminazione del DNA da parte della nucleasi | |
| Sorgente luminosa inappropriata per i coloranti degli acidi nucleici | Selezionare la sorgente luminosa con la lunghezza d'onda appropriata in base alle istruzioni per il colorante dell'acido nucleico. | |
| Bande non separate | mancanza di tempo | Aumentare il tempo di elettroforesi |
| Concentrazione del gel non corretta | La concentrazione di colla è troppo elevata e ciò determina un'eccessiva resistenza alla separazione. | |
| La concentrazione di ioni di sale nel campione è troppo alta | Un'elevata concentrazione di ioni salini aumenta la resistenza elettroforetica e impedisce la separazione delle bande, ad esempio nel caso di campioni digeriti contenenti tampone endonucleasi. | |
| Bande non specifiche | Contaminazione dell'RNA | Ri-preparazione dei campioni |
| Contaminazione tra campioni | Sostituzione della punta durante il riempimento; evitando la fuoriuscita di campioni con volumi >40 μl. |
2.5 Elettroforesi su gel di poliacrilammide
I gel di poliacrilammide si formano tramite la reazione chimica tra il monomero di acrilammide, i catalizzatori di polimerizzazione a catena N,N,N',N'-tetrametiletilendiammina (TEMED) e persolfato di ammonio e l'agente di reticolazione N,N'-metilenbisacrilammide. Il monomero di acrilammide polimerizza in presenza di un catalizzatore per formare lunghe catene, che sono reticolato di un agente di reticolazione per formare un gel, la cui dimensione dei pori è determinata dalla lunghezza della catena e dal grado di reticolazione. La dimensione dei pori è determinata dalla lunghezza della catena e il grado di reticolazione. La lunghezza della catena dipende da la concentrazione di acrilammide e il grado di reticolazione del polimero possono essere modificati regolando il rapporto tra acrilammide e agente reticolante.
L'elettroforesi su gel di poliacrilammide può essere utilizzata per separato campioni basati su differenze in carica, dimensione molecolare e forma di i campioni sottoposti a elettroforesiCombina la setacciatura molecolare e l'elettrostatica e ha un potere di risoluzione più elevato rispetto all'elettroforesi su gel di agarosio. Frammenti di DNA differendo solo per un nucleotide può essere separato.
L'elettroforesi su gel di poliacrilammide viene utilizzata per analizzare e preparare frammenti di DNA di lunghezza inferiore a 1 kb. A seconda la dimensione di i frammenti di acido nucleico da isolare, gel di diverso può essere preparato.
Gli intervalli di separazione efficaci per diverse concentrazioni di acrilammide e DNA sono riportati nella tabella seguente:
| Concentrazione (%) | Intervallo di separazione efficace (bp) |
| 3.5 | Da 100 a 2000 |
| 5 | Da 80 a 500 |
| 8 | Da 60 a 400 |
| 12 | Da 40 a 200 |
| 15 | Da 25 a 150 |
| 20 | Da 10 a 100 |
2.4 Linee guida per la selezione dei prodotti correlati
PCR convenzionale | ||||
| Specificazione | 10167ES | 10102ES | 10103ES | 10108ES |
| Lunghezza di amplificazione | ≤10-15 chicco di caffè | ≤5Kb | ≤5Kb | ≤4Kb |
| Tempo di estensione | 1-10 secondi/kb | 30 secondi/kb | 30 secondi/kb | 30 secondi/kb |
| Struttura finale del prodotto | 3'-dA | 3'-dA | 3'-dA | 3'-dA |
| Temperatura di ricottura | 60℃ | Temperatura -(2~5)℃ | Temperatura -(2~5)℃ | Temperatura -(2~5)℃ |
| Intervallo di compatibilità GC | 30-70% | 40-70% | 40-70% | 30-70% |
| Attività esonucleasica 5'-3' | Presente | Presente | Presente | Presente |
| PCR di colonia | Adatto | Adatto | Adatto | Adatto |
| Identificazione genetica | Adatto | Adatto | Adatto | Adatto |
| PCR multipla | Non adatto | Non adatto | Non adatto | PCR a 3-4 plex |
| Indicatore di elettroforesi | Rosso porpora | Blu | Incolore | Blu |
| Avvio a caldo | Avvio a caldo | Non avvio a caldo | Non avvio a caldo | Avvio a caldo |
| Premiscela/Kit | Premiscela | Premiscela | Premiscela | Premiscela |
PCR diretto | ||||
| Specificazione | 10185ES | 10188ES | 10187ES | |
| Tipo di prodotto | Amplificazione diretta del topo | Amplificazione diretta del sangue | Amplificazione diretta della pianta | |
| Lunghezza di amplificazione | ≤1Kb | ≤8Kb | ≤1Kb | |
| Tempo di estensione | 30 secondi/kb | 3-5 s/kb per ≤2 kb, | 60 secondi/kb | |
| 10 s/kb per ≤8 kb | ||||
| Tempo di lisi del campione | 15 minuti | 0-3 minuti | Da 0 a 10 minuti | |
| Struttura finale del prodotto | Punta smussata | Punta smussata | Punta smussata | |
| Temperatura di ricottura | Tm-(2~5)℃ | Tm-(1~2)℃ | Tm-(2~5)℃ | |
| Intervallo di compatibilità GC | 30-70% | 30-75% | 40-65% | |
| Attività esonucleasica 5'-3' | √ | √ | √ | |
| Identificazione genetica | √ | √ | √ | |
| PCR multipla | 3-4 plessi | |||
| Amplificazione diretta del campione | √ | √ | √ | |
| Indicatore di elettroforesi | Blu | Incolore | Blu | |
| Avvio a caldo | √ | √ | √ | |
| Premiscela/Kit | Kit (con mix) | Kit (con miscela + tampone) | Kit (con mix) | |
| Organismi adatti | Topo, Ratto | Umano, topo, capra, pollo, maiale, ecc. | Riso, mais, tabacco, colza, grano, soia, ecc. | |
| Tessuto/materiale adatto | Coda, orecchio, dito del piede (con muscolo) e altri organi | Sangue fresco con EDTA, eparina, citrato, ecc., sangue refrigerato (congelato), campioni di sangue secco commerciali | Foglie giovani, foglie vecchie, piantine, steli giovani | |
| Esempio di input | Tessuto: 5-10 mg; Coda: 1-5 mm | Sangue intero: 0,5%-20%, macchia di sangue secco: 1 mm² | Foglia: 1-10 mm, Seme: 1-3 mm | |
PCR ad alta fedeltà | ||||
| Specificazione | 10164ES | 10153ES | 10154ES | |
| Lunghezza di amplificazione | ≤10 kb di DNA genico, ≤10 kb di DNA genico, ≤16 kb di λDNA | ≤10 kb di DNA genico, ≤10 kb di DNA genico, ≤13 kb di λDNA | ≤10 kb di DNA genico, ≤10 kb di DNA genico, ≤13 kb di λDNA | |
| Tempo di estensione | 5 secondi/kb | 30 secondi/kb | 30 secondi/kb | |
| Fedeltà (Taq) | 83× | 83× | 83× | |
| Struttura finale del prodotto | Punta smussata | Punta smussata | Punta smussata | |
| Temperatura di ricottura | 60℃ | 68℃ | 68℃ | |
| Intervallo di compatibilità GC | 20-80% | 30-60% | 30-60% | |
| Attività esonucleasica 5'-3' | Assente | Assente | Assente | |
| Indicatore di elettroforesi | Blu | Incolore | Blu | |
| Enzima singolo/Pre-miscela | Premiscela | Singolo enzima | Premiscela | |
| Tolleranza | / | / | Sangue, lisato di tessuto di topo | |
Elettroforesi degli acidi nucleici | ||||
| Categoria di prodotto | Cat N. | Nome del prodotto | Applicazione | |
| Agarosio | 10208ES | Agarosio | Elettroforesi di routine degli acidi nucleici | |
| 10221ES | Agarosio ad alta setacciatura (grado PCR) | Adatto per la separazione di frammenti di DNA da 20 bp a 800 bp, paragonabile al gel di poliacrilammide | ||
| 10226ES | Compresse di agarosio (0.5 g/compressa) | Conveniente per applicazioni di routine di agarosio | ||
| Colorante acido nucleico | 10202ES | Colorante per gel di acido nucleico YeaRed (10.000× in acqua) | Solubile in acqua, con proprietà spettrali simili all'EB, eccitabile alla luce UV a 300 nm | |
| Marcatore del DNA | 10510ES | Scala del DNA GoldBand da 1 kb | 250-12000 bp (13 bande) | |
| 10515ES | Scala del DNA GoldBand 50 bp | 50-1000 bp (14 bande) | ||
| 10507ES | Scala del DNA GoldBand 100bp | 100-1500 bp (12 bande) | ||
| 10516ES | GoldBand 100 bp più scala del DNA | 100-3000 bp (14 bande) | ||
| 10517ES | Scala del DNA GoldBand da 200 bp | 200-5000 bp (12 bande) | ||
| 10518ES | Scala del DNA GoldBand da 500 bp | 500-5000 bp (8 bande) | ||
| 10501ES | Marcatore DNA GoldBand DL2000 | 100-2000 bp (6 bande) | ||
| 10504ES | Marcatore DNA GoldBand DL5000 | 100-5000 bp (9 bande) | ||
| 10505ES | Marcatore DNA GoldBand DL10.000 | 100-10000 bp (10 bande) | ||
| 10511ES | Scala del DNA GoldBand a grandezza naturale | 100-12000 bp (20 bande) | ||
| 10512ES | Marcatore DNA GoldBand DL15000 | 250-15000 bp (7 bande) |
2.5 Pubblicazioni che utilizzano prodotti di elettroforesi degli acidi nucleici (P(artificiale)
[1] Luo J, Yang Q, Zhang X, et al. TFPI è un recettore della cripta del colon per TcdB dal clade ipervirulento 2 C. difficile. Cellulare. 2022;185(6):980-994. e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010 (IF:41.584)
[2] Huang N, Chen H, Gong H, et al. SeHed, un nuovo sistema di espressione genica con perossido di idrogeno evocato dallo stress proprietà di eliminazione dell'ide ed effetto anti-invecchiamento. Trasduzione del segnale e terapia mirata. 2022, 7, 235. doi: 10.1038/s41392-022-01047-2. (IF: 38.1)
[3] Zhang C, Zhou B, Gu F, et al. L'inibizione del micropeptide PACMP provoca effetti letali sintetici diminuendo il CtIP e poli(ADP-ribosilazione). mol Cell. 2022;82(7):1297-1312.e8. doi:10.1016/j.molcel.2022.01.020 (IF:(17.970)
[4] Zhu M, DaiX. La soppressione della crescita dovuta a livelli alterati di (p)ppGpp deriva da condizioni non ottimali allocazione delle risorse in Escherichia coli. Acidi nucleici Res. 2019;47(9):4684-4693. doi:10.1093/nar/gkz211 (IF:11.147)
[5] Rizwan HM, Zhimin L, Harsonowati W, et al. Identificazione di agenti patogeni fungini per il controllo post-raccolta Il frutto della passione (Passiflora edulis) decade e l'analisi comparativa del percorso multi-omico rivela Il viola è più resistente nt ai patogeni rispetto a una cultivar gialla. j Fungi (Basilea). 2021;7(10):879. Pubblicato il 19 ottobre 2021. doi:10.3390/jof 7100879 (IF:5.(816)
[6] LiT, Zhou B, Luo Z, et al. Caratterizzazione strutturale di un Nanobody neutralizzante con ampia attività contro Varianti di SARS-CoV-2. Front Microbiol. 2022;13:875840. Pubblicato il 2 giugno 2022. doi:10.3389/fmicb.2022.875840 (IF:5.640)
[7] Wang T, Ren D, Guo H, et al. CgSCD1 è essenziale per la biosintesi e la patogenicità della melanina di Colletotrichum gloeosporioides. patogeni. 2020;9(2) :141. pubblicato il 20 febbraio 2020. doi:10.3390/pathogens9020141(IF:3.018) :141. Pubblicato il 20 febbraio 2020. doi:10.3390/patogeni9020141 (IF:3.018)
[8] Lv Y, LiX, Zhang H, Zou F, Shen B. Profili di espressione del CircRNA nei pazienti sensibili e resistenti alla deltametrina
pipiens pallens (Ditteri: Culicidae). Comp Biochimica Physiol B Biochem Mol Biol. 2022;261:110750. doi:10.1016 /j.cbpb.2022.110750 (IF:2.231)
[9] Hu M, DaiX. Soppressione della crescita da parte di (p) ppGpp alterato livelli derivano da un'allocazione non ottimale delle risorse in Escherichia coli[J]. Ricerca sugli acidi nucleici, 2019, 47(9): 4684-4693.(IF11.6)
[10] Guo L, Yang W, Huang Q, et al. La spettrometria di massa specifica della selenocisteina rivela selenoproteomi distinti per tessuto e selenoproteine candidate[J ]. Chimica cellulare biologia, 2018, 25(11): 1380-1388. e4. (IF6.762)
2.6 Pubblicazioni che utilizzano prodotti PCR (parziale)
[1] Wang Y, Fu La Z, LiX, e altri Citoplasmatico Rilevamento del DNA di KU complesso In invecchiato Cellule T CD4+ cella potenzia T cella attiva zione E correlato all'invecchiamento autoimmune infiammazione. Immunità. 2021;54(4):632-647.e9. deve:10.1016/j.immu
ni.2021.02.003(IF:31.745)
[2] Yang X, Gao F, Zhang W., e altri "Stella" miR-34a E CXCR4 antagonista basato nanoplex per binarioe cooperativa trattamento di migrazione controT metastatico seno cancro. Controllare Pubblicazione. 2020;326:615-627. doi:10.1016/j. jconrel.2020.07.029(IF:7.727)
[3] QiaoY, Du J, Io R, e altri Campione E Rilevamento Microago Toppa per Psoriasi MicroRNA Biomarcatore
Analisi In Interstiziale Fluido. Anale Chimica 2022;94(14):5538-5545. doi:10.1021/acs.analchem.1c04401(IF:6.986)
[4] Linea D, Sì X, Umano La Z, e altri Grafene A base di ossido Soppressione Di Non specificità In Mediato da loop isotermico malAmplificazione Abilitare i sensibili Rilevamento della Cicloossigenasi-2 mRNA In Colorettale Cancro. Anale Chimica 2019;91(24):15694-15702. doi:10.1021/acs.analchem.9b03861(IF:6.350)
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Citazione:
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