Yeasen e molefuture ha sviluppato termotollerante, ad alta fedeltà t4 ligasi per combattere la falsa legatura

Yeasen e Molefuture presentano la DNA ligasi T4 avanzata per superare le sfide della biologia molecolare

Yeasen e Molefuture hanno sviluppato congiuntamente una DNA ligasi T4 all'avanguardia utilizzando la loro piattaforma ZymeEditor, affrontando questioni chiave nella biologia molecolare e nella costruzione di librerie di DNA per il sequenziamento di nuova generazione (NGS). La DNA ligasi T4 tradizionale affronta sfide come scarsa stabilità, elevata formazione di dimeri adattatori e elevata autolegatura di frammenti di DNA. Questo nuovo enzima mira a superare queste limitazioni.

La DNA ligasi T4, un enzima ATP-dipendente, presenta un dominio di legame al DNA a elica compatta (DBD), un dominio nucleotidil-transferasi (NTase) e un dominio OB-fold. Analizzando la struttura proteica, i ricercatori hanno identificato residui chiave entro 5-20Å del substrato del DNA. Utilizzando strumenti computazionali avanzati, screening in silico e analisi struttura-funzione, hanno progettato mutanti tramite allineamento di sequenze consensuali, incorporando approfondimenti strutturali-funzionali.

Oltre alla progettazione razionale, il team ha impiegato il metodo MTPS per l'evoluzione diretta, esaminando oltre 10.000 mutanti per stabilità, attività e attività residua. I candidati promettenti sono stati sottoposti a rigorose purificazioni e test. È seguita una caratterizzazione dettagliata, valutando attività, stabilità, autolegatura dell'adattatore, autolegatura del frammento di DNA e resa del DNA.

I ricercatori hanno combinato la progettazione razionale del DNA e la mutazione diretta sui mutanti G1 per sviluppare varianti eccezionali adatte a diverse applicazioni. Questo approccio completo ha prodotto una DNA ligasi T4 altamente efficiente e affidabile, pronta a migliorare la ricerca in biologia molecolare e la costruzione di librerie di DNA in NGS.

Figura 1. Illustra l'evoluzione della DNA ligasi Versatility T4. (A) Progettazione razionale della DNA ligasi T4. (B) Screening di mutanti della DNA ligasi T4 termotolleranti a 45℃, che porta all'identificazione di mutanti con attività specifica significativamente migliorata. (C) Screening di mutanti della DNA ligasi T4 finalizzato a ridurre la formazione di dimeri adattatori durante la preparazione della libreria di DNA. (D) La valutazione dei risultati della libreria prevede il trattamento termico di ritenzione a 42℃ per 1 ora utilizzando il metodo di preparazione della libreria del DNA.
Tabella 1. La DNA ligasi Yeasen Versatile T4 è termostabile. L'enzima è stato trattato a 30℃ per 5 giorni e analizzato con il metodo DNA Lib Prep.
Figura 2. La DNA ligasi Yeasen Versatile T4 ha una fedeltà più elevata rispetto alla DNA ligasi T4 di tipo selvatico (WT) indicata da una minore formazione di dimeri adattatori dovuta ad auto-misligazione (A) e (B) analizzati con il metodo DNA Lib Prep.
Figura 3. La DNA ligasi Yeasen Versatile T4 mostra la più bassa formazione di dimeri adattatori rispetto alle DNA ligasi T4 commerciali, comprese le ligasi termotolleranti analizzate con il metodo DNA Lib Prep.
Questa svolta dimostra l'impegno di Yeasen e Molefuture verso l'innovazione e l'eccellenza nell'ingegneria enzimatica.

Informazioni per l'ordinazione

Nome Gatto# Appunti
Enzima Ligasi del DNA T4 versatile Hieff™ (600 U/µL) 12996ES Termotollerante e ad alta fedeltà per il rilevamento dei geni tumorali
Il DNA Kit di preparazione della libreria DNA Hieff NGS® 13577ES Metodo Tumore/Meccanico
Kit di preparazione della libreria DNA Hieff NGS® OnePot Pro V2 12194ES Metodo tumorale/enzimatico
Hieff NGS® OnePot II Kit di preparazione della libreria del DNA per Illumina 13490ES Patogeno/enzimatico/tempo regolare (140 min)
Kit di preparazione della libreria DNA Flash OnePot Hieff NGS® 12316ES Patogeno/Enzimatico/Ultraveloce (100 minuti)
Kit di co-preparazione della libreria Hieff NGS® DNA&RNA V2 12305ES Co-preparazione di patogeni/enzimatici/DNA e RNA
RNA Kit di preparazione della libreria mRNA a doppia modalità Hieff NGS® Ultima 12308ES Senza sfere magnetiche oligo dT, 11 tubi
Kit di preparazione della libreria mRNA a doppia modalità Hieff NGS® Ultima 12309ES perle magnetiche oligo dT plus, 14 tubi
Kit di preparazione della libreria RNA a doppia modalità Hieff NGS® Ultima 12310ES Versione premiscelata, 5 tubi
Kit di preparazione della libreria RNA Hieff NGS ® EvoMax (versione premiscelata) (actinomicina D Gratuito) 12340ES Versione premiscelata, (Actinomicina D Gratuito)
Kit di deplezione dell'rRNA Hieff NGS® MaxUp (pianta) 12254ES Pianta
Kit di deplezione dell'rRNA umano Hieff NGS® MaxUp (rRNA e ITS/ETS) 12257ES Umano

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Informazioni su Molefuture Biotechnology

Molefuture Biotechnology è una sussidiaria di Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd., specializzata nella fornitura di soluzioni personalizzate di modifica degli enzimi guidate dalla tecnologia di evoluzione degli enzimi. Sfruttando le risorse di Yeasen Biotecnologia, Molefuture opera su sei principali piattaforme tecnologiche: la piattaforma innovativa di evoluzione enzimatica ZymeEditor, una piattaforma di espressione multi-host ad alta efficienza, una piattaforma di sviluppo del processo di fermentazione, una piattaforma di sviluppo del processo di purificazione, una piattaforma di produzione di enzimi ultra-puliti e una piattaforma di analisi e controllo qualità degli enzimi. Con queste sei piattaforme tecnologiche, Molefuture può offrire un set completo di soluzioni personalizzate, tra cui evoluzione guidata dagli enzimi, sviluppo di nuovi enzimi, sviluppo di processi enzimatici e produzione su scala GMP per soddisfare le esigenze applicative degli enzimi in aree quali diagnostica in vitro, biomedicina, biologia sintetica, estetica medica, intermedi farmaceutici, et. al.

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