HEK293 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트(3G) 검증 보고서

HEK293 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트 ( 3G )

자격 요약 (Cat No.: 4 1331 ES60)

  1. 배경

이 보고서에 요약된 데이터는 Yeasen Biotechnology에서 'HEK293 Host Cell DNA Residue Detection Kit (3G)' 제품을 위해 수행한 것입니다. 요약 데이터는 사용자의 참조용일 뿐이며, 사용자는 자신의 샘플을 사용하여 숙주 세포 잔류물 DNA 방법을 검증하여 해당 방법이 사용자 요구 사항을 충족하는지 확인해야 합니다. 이 키트를 사용하는 모든 실험실은 다음 매개변수를 검증하는 것이 좋습니다. 선형성, 범위, 정확도, 정밀도, 정량 한계, 특이성 및 견고성.

Yeasen Biotechnology는 이 키트에 대한 자세한 자격 보고서를 제공할 수 있습니다. 사용자가 이 보고서를 사용하는 경우 적합성(정밀도, 정확도 및 특이성 포함)만 검증해야 합니다.

  1. 실험재료 및 방법

2.1 HEK293 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트(3G), 공급업체: Yeasen, 카탈로그 번호: 41331ES60.

2.2 MolPure® 자기 잔류 DNA 샘플 준비 키트, 공급업체: Yeasen, 카탈로그 번호: 18461ES60.

2.3 원본 데이터: 전자 버전은 상위 파일 'HEK293 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트(3G)'의 하위 파일인 '실험 보고서'에 기록되었습니다.

2.4 방법: 실험에 사용된 재료와 조작 방법은 기본적으로 Yeasen Biotechnology에서 생산 또는 설정하였으며, 장기간 평가 및 검증을 거쳤으며, 키트 개발 및 제조는 ISO 13485 시스템을 따릅니다.

  1. 자격내용 및 결과

3.1 감지 범위

이 키트의 선형 범위는 R 2 ≥0.998인 30 fg/μL~300 pg/μL이었고, 증폭 효율은 각 농도 분석에 대해 CV<15%인 90%~110% 범위였습니다.

그림 1 HEK293 DNA (3G) qPCR 표준 곡선

3.2 정확도

3. 2. 1​ 회복​

3.2.1.1 빈 샘플 스파이킹 회수 실험

HEK293 DNA 표준 시료를 각각 고농도 및 저농도(300 pg/μL, 3 pg/μL 및 30 fg/μL)로 준비하고, 잔류 DNA 시료 전처리 키트를 위한 자기 비드 방법을 사용하여 추출 후 분석했습니다(각 시료에 대해 추출 반복 실험을 2회 수행하고, 각 추출물에 대해 분석 반복 실험을 3회 수행). 그리고 시료 회수율 및 변이계수(CV)를 분석했습니다.

DNA 샘플의 농도에 따라 회수율은 70%~130% 범위였고, CV는 모두 20% 미만이었습니다.

샘플 유형

이론적 농도

1개의 평균을 추출합니다

2개의 평균을 추출하다

평균 농도

이력서

회복

빈 샘플

/

/

/

/

/

/

복구 샘플 1

300pg/μL

306.81pg/μL

279.57pg/μL

293.82pg/μL

6.56%

97.94%

복구 샘플 2

3pg/μL

3.11pg/μL

2.99 피그/μL

3.09pg/μL

2.75%

103.00%

복구 샘플 3

30fg/μL

31.02fg/μL

30.63fg/μL

30.83fg/μL

0.89%

102.77%

표1 빈 샘플 스파이킹 회수

3.2.1.2 시뮬레이션 샘플 스파이킹 복구 실험

동일한 농도(HEK293 DNA 3 pg/μL)의 샘플을 추출(각 샘플에 대해 추출 반복 2회 수행, 각 추출물에 대해 분석 반복 3회 수행)하고 5가지 다른 배경 용액(고단백질, 고핵산, 고/저 pH, 고염도)을 사용하여 샘플 회수율과 변이계수(CV)를 분석했습니다.

다양한 배경 솔루션에 대한 DNA 샘플 회수율은 70%에서 130% 사이였고, 모든 CV는 20% 미만이었습니다.

샘플 유형

이론적 농도

1개의 평균을 추출합니다

2개의 평균을 추출하다

평균 농도

이력서

회복

기본 샘플

/

/

/

/

/

/

고단백질

3pg/μL

2.65

2.80

2.73

3.80%

90.87%

고핵산

2.82

2.97

2.90

3.71%

96.58%

고염

2.88

2.70

2.79

4.47%

92.89%

높은 pH

2.81

2.93

2.87

2.98%

95.71%

낮은 pH

2.76

2.79

2.77

0.99%

92.48%

표2 기본 샘플 스파이킹 복구

3.3 정밀도

3. 3.1 반복성​

CV <15%로 30 fg/μL의 농도에서 HEK293 DNA 표준에 대해 분석을 10번 반복합니다.

반복

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

평균

이력서 %

검출값(fg/μL)

29.51

30.02

30.13

30.16

27.99

31.01

31.05

30.95

31.02

29.86

30.17

3.15%

표3 반복성 결과

3. 3. 2​ 중간 정밀도

3명의 실험자가 HEK293 DNA 표준 시료를 높은 농도와 낮은 농도(300 pg/μL, 3 pg/μL, 30 fg/μL)에서 독립적으로 테스트했으며, 각 농도에 대해 3회 반복 실험했으며, 얻은 9개 데이터의 변이계수는 모두 15% 미만이었습니다.

경험치

실제 농도

이론적 집중

HEK293 DNA(3G)

300pg/uL

3pg/uL

30fg/uL

경험치 1

결의 1

319.58

3.026

32.02

결의 2

309.76

3.051

37.01

결의 3

309.24

3.067

36.03

경험치 2

결의 4

308.34

2.909

29.91

결의 5

308.54

2.9

29.67

결의 6

305.83

2.921

28.85

경험치 3

결의 7

299.11

3.035

29.36

결의 8

300.07

2.833

31.14

결의 9

302.03

3.033

33.07

/

평균

306.95

2.975

31.90

/

이력서 %

2.03%

2.83%

9.26%

표4 중간 정밀도 결과

3.4 특이성

생물학적 제제 생산에 일반적으로 사용되는 세포 유전체 DNA의 간섭을 HEK293 DNA 검출 시약으로 간섭을 평가한 결과, 간섭군이 대조군과 겹치고 간섭이 나타나지 않았습니다(아래 그림은 HEK293 DNA 검출 시약을 사용한 CHO, E.coli 및 Pichia Pastoris 유전체 DNA의 간섭 데이터를 순서대로 보여줍니다).

그림 2 간섭 실험 결과

3.5 정량 한계

HEK293 DNA는 30 fg/μL, 20 fg/μL, 10 fg/μL 및 5 fg/μL에서 검출되었으며, 각 농도에 대해 10회 반복되었습니다. 결과는 CV가 10 fg/μL 이상의 농도에서 <20%임을 보여주었습니다. 즉, HEK293 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트(3G)의 정량 한계는 10 fg/μL였습니다.

반복

테스트 항목

HEK293 DNA(3G)(fg/μL)

수량

재계산 비율%

1

11.04

110.40%

2

9.97

99.70%

3

11.12

111.20%

4

11.07

110.70%

5

11월 21일

112.10%

6

9.93

99.30%

7

10.25

102.50%

8

10.16

101.60%

9

10.08

100.80%

10

10.11

101.10%

평균

10.49

/

이력서 %

5.14%

/

그림 3 10fg/μL HEK293 DNA (3G) qPCR 검사 결과

3.6 견고성

이 키트는 테스트를 거쳤으며 다음 기기에 적합하지만 이에 국한되지는 않습니다.

공급업체

계기 모델

증폭 효율

알 2

정량 한계(fg/μL)

이력서 %

열

에이비비7500

102.84%

1

10

7%

열

ABI 퀀트스튜디오5

104.70%

0.999

10

9%

상하이 홍시

슬랜

101.46%

0.999

10

8%

표5 기기적합성 시험 결과

3.7 안정성

3. 7 .1 동결-융해 안정성

HEK293 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트(3G)는 10회 반복적인 동결 및 해동을 통해 테스트되었으며, 키트의 성능에 영향을 미치지 않았습니다.

테스트 지표

동결-해동 시간

매개변수

T0 시간

동결-해동 10회

표준 곡선 매개변수

증폭 효율

99.34%

100.78%

알 2

1

1

정량 한계(30 fg/μL)

이력서

11%

7%

Table6 동결융해 안정성 결과 분석

3. 7. 2​ 가속된 안정성

HEK293 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트(3G)는 각각 2~8°C에서 30일, 37°C에서 14일 동안 보관되었습니다. 키트 성능에는 영향이 없었습니다.

테스트 지표

가속 온도 및 시간

매개변수

T0 시간

37℃ 7일

37℃ 14일

표준 곡선 매개변수

증폭 효율

103.83%

101.58%

100.47%

알 2

0.999

1

1

정량 한계(30 fg/μL)

이력서 %

8%

5%

5%

Table7 가속안정성 결과 분석

3.8 공백의 한계

템플릿 없는 대조군(NTC)은 CT 값이 32보다 큰 96회 반복된 템플릿 희석물입니다(ROX 교정 임계값 선을 0.06으로 설정).

그림 4 NTC 실험 결과

  1. 4 . 참조

4.1 중국 약전위원회(ChPC). 중화인민공화국 약전(Vol III) [S]. 베이징: 중국의학과학기술출판사, p.542-543, 2020.

4.2 NMPA, 2007: 생물학적 제품의 품질 관리를 위한 분석 방법 검증의 기술적 검토를 위한 일반 원칙.

4.3 ICH(2022) 《분석방법 검증 Q2》, 초안 버전.

주문 정보

설명

부품 번호

CHO 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트(3G)

41332ES

HEK293 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트(3G)

41331ES

Vero 호스트 세포 DNA 잔류물 검출 키트(2G)

41307ES

대장균 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트(2G)

41308ES

MolPure® 자기 잔류 DNA 샘플 준비 키트

18461ES

MycAway™ 마이코플라스마 qPCR 검출 키트(2G) 40619ES

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