CHO 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트(3G) 검증 보고서

CHO 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트 ( 3G )

자격 요약 (Cat No.: 41332 ES60)

  1. 배경

이 보고서에 요약된 데이터는 CHO Host Cell DNA Residue Detection Kit(3G) 제품을 위해 Yeasen Biotechnology에서 수행한 것입니다. 요약 데이터는 사용자의 참조용일 뿐이며, 사용자는 자신의 샘플을 사용하여 숙주 세포 잔류물 DNA 방법을 검증하여 해당 방법이 사용자 요구 사항을 충족하는지 확인해야 합니다. 이 키트를 사용하는 모든 실험실은 다음 매개변수를 검증하는 것이 좋습니다. 선형성, 범위, 정확도, 정밀도, 정량 한계, 특이성 및 견고성.

Yeasen Biotechnology는 이 키트에 대한 자세한 자격 보고서를 제공할 수 있습니다. 사용자가 이 보고서를 사용하는 경우 적합성(정밀도, 정확도 및 특이성 포함)만 검증해야 합니다.

  1. 실험재료 및 방법

2.1 CHO 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트(3G), 공급업체: Yeasen, 카탈로그 번호: 41332ES60.

2.2 MolPure 자기 잔류 DNA 샘플 준비 키트, 공급업체: Yeasen, 카탈로그 번호: 18461ES60.

2.3 원본 데이터: 전자 버전은 CHO 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트(3G)의 상위 파일인 하위 파일인 '실험 보고서'에 기록되었습니다.

2.4 방법: 실험에 사용된 재료와 조작 방법은 기본적으로 Yeasen Biotechnology에서 생산 또는 설정하였으며, 장기간 평가 및 검증을 거쳤으며, 키트 개발 및 제조는 ISO 13485 시스템을 따릅니다.

  1. 자격내용 및 결과

3.1 감지 범위

이 키트의 선형 범위는 R 2 =1일 때 3 fg/μL~300 pg/μL이고, 각 농도 분석에 대한 증폭 효율은 CV<15%로 99.09%였습니다.

그림 1 CHO DNA (3G) qPCR 표준 곡선

3.2 정확도

3. 2. 1​ 회복​

3.2.1.1 빈 샘플 스파이킹 회수 실험

고농도 및 저농도(30 pg/μL, 300 fg/μL 및 3 fg/μL)의 CHO DNA 표준 시료를 각각 준비하고 잔류 DNA 시료 전처리 키트를 위한 자기 비드 방법을 사용하여 추출 후 분석했습니다(각 시료에 대해 추출 반복 실험을 3회 수행하고, 각 추출물에 대해 분석 반복 실험을 3회 수행). 그리고 시료 회수율 및 변이계수(CV)를 분석했습니다.

DNA 샘플의 농도에 따라 회수율은 70%~130% 범위였고, CV는 모두 20% 미만이었습니다.

샘플 유형

이론적 집중

1개의 평균을 추출합니다

2개의 평균을 추출하다

3개의 평균을 추출하다

평균 농도

이력서

회복

빈 샘플

/

/

/

/

/

/

복구 샘플 1

30pg/μL

27.07

27.51

28.27

27.62

2.20%

92.06%

복구 샘플 2

300fg/μL

285.53

301.25

295.71

294.16

2.71%

98.05%

복구 샘플 3

3fg/μL

3.50

3.54

3.31

3.45

3.56%

115.00%

표1 빈 샘플 스파이킹 회수

3.2.1.2 시뮬레이션 샘플 스파이킹 복구 실험

동일한 농도(300 fg/μL의 CHO DNA)의 샘플을 추출(각 샘플에 대해 3번의 추출 반복을 수행하고 각 추출물에 대해 3번의 분석 반복을 수행)하고 5가지 다른 배경 용액(고단백질, 고핵산, 고/저 pH, 고염도)을 사용하여 샘플 회수율과 변이계수(CV)를 분석했습니다.

다양한 배경 솔루션에 대한 DNA 샘플 회수율은 70%에서 130% 사이였고, 모든 CV는 20% 미만이었습니다.

샘플 유형

이론적 집중

1개의 평균을 추출합니다

2개의 평균을 추출하다

3개의 평균을 추출하다

평균 농도

이력서

회복

기본 샘플

/

/

/

/

/

/

고단백질

300fg/μL

302.29

332.86

342.76

325.97

6.47%

108.66%

고핵산

284.47

290.66

308.76

294.63

4.28%

98.21%

고염

272.96

286.25

312.91

290.71

7.00%

96.90%

높은 pH

296.04

320.58

324.56

313.72

4.92%

104.57%

낮은 pH

314.77

327.89

340.26

327.64

3.89%

109.21%

표2 기본 샘플 스파이킹 복구

3.3 정밀도

3. 3.1 반복성​

CV <15%로 3 fg/μL의 농도에서 CHO DNA 표준에 대해 분석을 10번 반복합니다.

반복

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

평균

이력서 %

검출값(fg/μL)

3.13

3.26

2.89

3.16

2.95

2.87

2.88

2.75

2.87

3.15

2.99

5.65%

표3 반복성 결과

3. 3. 2​ 중간 정밀도

3명의 실험자가 높고 낮은 농도(300 pg/μL, 3 pg/μL, 3 fg/μL)에서 CHO DNA 표준 시료를 독립적으로 테스트했으며, 각 농도에 대해 3회 반복 실험했으며, 얻은 9개 데이터의 변이계수는 모두 15% 미만이었습니다.

경험치

실제 농도

이론적 집중

CHO DNA (3G)

300pg/uL

3pg/uL

3fg/uL

경험치 1

결의 1

302.63

2.97

3.40

결의 2

294.54

3.01

3.14

결의 3

287.67

2.99

3.01

경험치2

결의 4

292.27

2.92

3.47

결의 5

299.61

2.90

2.82

결의 6

305.73

2.93

2.90

경험치 3

결의 7

301.06

3.17

3.15

결의 8

299.17

3.00

3.21

결의 9

290.66

2.90

3.05

/

평균

297.04

2.98

3.13

/

이력서 %

2.03

2.80

6.85

표4 중간 정밀도 결과

3.4 특이성

생물학적 제제 생산에 일반적으로 사용되는 세포 유전체 DNA의 간섭을 CHO DNA 검출 시약으로 간섭하는지 평가한 결과, 간섭군이 대조군과 겹치며 간섭이 나타나지 않았습니다(아래 그림은 CHO DNA 검출 시약을 사용한 Mouse, MDCK, HEK293 및 E.coli 유전체 DNA의 간섭 데이터를 순서대로 보여줍니다).

그림 2 간섭 실험 결과

3.5 정량 한계

CHO DNA는 각 농도에 대해 10회 반복하여 3 fg/μL, 1 fg/μL, 0.5 fg/μL, 0.3fg/uL 및 0.1 fg/μL에서 검출되었습니다. 결과는 CV가 0.3 fg/μL 이상의 농도에서 <20%임을 보여주었습니다. 즉, CHO 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트(3G)의 정량 한계는 0.3 fg/μL였습니다.

반복

테스트 항목

CHO DNA (3G) (fg/μL)

수량

재계산 비율%

1

0.28

93.33%

2

0.26

86.67%

3

0.32

106.67%

4

0.30

100.00%

5

0.33

110.00%

6

0.23

76.67%

7

0.29

96.67%

8

0.37

123.33%

9

0.31

103.33%

10

0.28

93.33%

평균

0.30

/

이력서 %

13.09%

/

그림 3. CHO DNA (3G) qPCR 검사 결과

3.6 검출 한계

CHO DNA는 각 농도에 대해 20회 반복하여 0.3 fg/μL, 0.1 fg/μL, 0.05 fg/μL 및 0.01 fg/μL에서 검출되었습니다. 결과는 0.05 fg/μL 이상의 농도에서 20회 반복 웰에서 검출률이 ≥19(즉, 검출률 ≥95%)임을 보여주었습니다. 즉, CHO 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트(3G)의 검출 한계는 0.05 fg/μL였습니다.


그림 4. CHO DNA (3G) qPCR 검사 결과

3.7 견고성

이 키트는 테스트를 거쳤으며 다음 기기에 적합하지만 이에 국한되지는 않습니다.

공급업체

계기 모델

증폭 효율

알 2

정량화의 한계

이력서

검출 한계

감지율

열

에이비비7500

99.69%

1

0.3fg/μL

12.40%

0.05fg/μL (최소 0.05μg/μL)

95.65%

열

ABI 퀀트스튜디오5

99.26%

1

0.3fg/μL

15.30%

0.05fg/μL (최소 0.05μg/μL)

100.00%

로슈

라이트사이클러480

2.05%

0.978

0.3fg/μL

/

0.05fg/μL (최소 0.05μg/μL)

/

상하이 홍시

슬랜

101.14%

0.999

0.3fg/μL

14.41%

0.05fg/μL (최소 0.05μg/μL)

95.65%

표5 기기적합성 시험 결과

3.8 안정성

3. 8 .1 동결-융해 안정성

CHO Host Cell DNA Residue Detection Kit (3G)는 10회에 걸쳐 동결과 해동을 반복하여 테스트 하였으며, 키트의 성능에 영향이 없었습니다.

테스트 지표

동결-해동 시간

매개변수

T0 시간

동결-해동 10회

표준 곡선 매개변수

증폭 효율

95.70%

98.62%

알 2

1

1

정량 한계(0.3 fg/μL)

이력서

15.31%

17.16%

검출 한계(0.05 fg/μL)

감지율

95.65%

100%

Table6 동결융해 안정성 결과 분석

3. 7. 2​ 가속된 안정성

CHO Host Cell DNA Residue Detection Kit(3G)는 각각 2~8°C에서 30일, 37°C에서 14일 동안 보관되었습니다. 키트 성능에는 영향이 없었습니다.

테스트 지표

가속 온도 및 시간

매개변수

실험 1

실험 2

T0 시간

2~8℃ 30일

T0 시간

37℃ 14일

표준 곡선 매개변수

증폭 효율

100.53%

102.61%

101.76%

101.84%

알 2

1

1

1

1

정량 한계(0.3 fg/μL)

이력서

17.16%

12.63%

16.27%

12시 49분

검출 한계(0.05 fg/μL)

감지율

95.65%

100%

95.57%

100%

Table7 가속안정성 결과 분석

3.9 공백의 한계

3. 9 .1 템플릿 제어 없음(NTC)

NTC(템플릿 대조군)는 qPCR 정량 분석을 위해 96회 반복한 DNA 희석이었고, 96회 반복 웰에서 테스트한 모든 CT 값은 >40이었습니다.


그림 5 NTC 실험 결과

3. 9. 2​ 음성 추출 제어 샘플(NCS)

음성 추출 대조 샘플(NCS)은 DNA 희석액이었으며, 먼저 샘플 전처리를 통해 추출한 다음 qPCR을 수행했습니다. 테스트한 48회 반복 웰 위의 모든 CT 값은 >40이었습니다.

그림 6 NCS 실험 결과

  1. 4 . 참조

4.1 중국 약전위원회(ChPC). 중화인민공화국 약전(Vol III) [S]. 베이징: 중국의학과학기술출판사, p.542-543, 2020.

4.2 NMPA, 2007: 생물학적 제품의 품질 관리를 위한 분석 방법 검증의 기술적 검토를 위한 일반 원칙.

4.3 ICH(2022) 《분석방법 검증 Q2》, 초안 버전.

주문 정보

설명

부품 번호

CHO 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트(3G)

41332ES

HEK293 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트(3G)

41331ES

Vero 호스트 세포 DNA 잔류물 검출 키트(2G)

41307ES

대장균 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트(2G)

41308ES

MolPure® 자기 잔류 DNA 샘플 준비 키트

18461ES

MycAway™ 마이코플라스마 qPCR 검출 키트(2G) 40619ES

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