개요
숙주 세포 잔류 DNA는 생물학적 제제의 생산에 관여하는 공정 관련 불순물로, 생물학적 제제의 효과를 떨어뜨릴 뿐만 아니라 감염성이나 종양 형성성과 같은 안전 문제를 일으킬 수도 있습니다. 따라서 다양한 국가의 규제 기관은 생물학적 제제의 잔류 DNA 양에 제한을 두었습니다.
현재 WHO와 FDA 가이드라인은 완제품의 잔류 DNA가 10ng/dose를 넘지 않도록 권장하고 있으며, FDA는 또한 생물학적 제제의 숙주 세포 DNA의 잔류 DNA가 100pg/dose를 넘지 않아야 한다고 명시합니다. 유럽 약전의 일반 원칙은 생물학적 제품의 잔류 DNA 한계 대부분이 10ng/dose를 넘지 않아야 한다고 규정하고 있지만, 개별 백신의 잔류 DNA 한계는 더 엄격합니다. 예를 들어, A형 간염에 대한 불활성화 백신의 잔류 DNA는 100pg/dose를 넘지 않아야 하고, B형 간염에 대한 백신의 잔류 DNA는 10pg/dose를 넘지 않아야 합니다. 2020년판 중국약전 제3부에서는 세포 기질에서 생산된 생물학적 제제의 DNA 잔류물은 투여량당 100 pg를 초과해서는 안 되고, 박테리아 또는 진균 기질에서 생산된 백신의 DNA 잔류물은 투여량당 10 ng를 초과해서는 안 된다고 규정하고 있습니다.
또한 외인성 DNA 잔류물 측정 방법에 대해 국가 약전도 지침 권장 사항을 제공합니다. 미국 약전의 2017년판 USP40-NF35 일반 조항 1130은 외인성 DNA 잔류물 측정을 위한 3가지 방법, 즉 DNA 프로브 하이브리다이제이션, 임계값 방법 및 실시간 정량 PCR 방법을 설명합니다. 유럽 약전은 실시간 정량 PCR 및 면역 효소 방법을 제안하는데, 이는 숙주 세포에서 잔류 DNA를 정량화하는 2가지 민감한 분석 방법입니다. 중국 약전 2020년판 3개 일반 규칙 3407도 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 방법이 DNA 프로브 하이브리다이제이션, 형광 염색 및 정량 PCR이라고 규정합니다.
그 중 qPCR법은 민감도, 염기서열 특이성, 정확도가 매우 높아 생물제약 산업에서 완제품의 공정 연구와 품질 관리에 신뢰할 수 있는 검출 수단을 제공할 수 있으며, 현재는 모든 생물학적 제품 제조업체가 선호하는 검출 방법이 되었습니다.
Yeasen Biotechnology 잔류 DNA 검출 키트
형광 프로브 qPCR의 원리를 기반으로,
특징
높은 민감도: LLOD가 0.05fg/µL로 낮은 형광 프로브 qPCR 방법을 기반으로 개발되었습니다.
높은 정확도: 샘플 스파이크 회수율은 70%~130% 범위입니다.
높은 특이성: 관련 없는 DNA와 교차 반응성이 없어 검출 시 거짓 양성 반응이 줄어듭니다.
규정 준수: Chp, USP, ICHQ2(R1) 및 기타 요구 사항에 따라 완벽하게 검증되었으며, 중국 및 해외 규제 표준에 따라 성능이 입증되었습니다.
감사에 협조: 제품 생산은 ISO13485 품질 시스템 표준을 준수하며 완벽한 감사 문서를 갖추고 있습니다.
품질 보증: 키트의 원재료는 모두 독립적으로 개발되었으며, qPCR Mix와 기타 효소 제품은 매우 깨끗한 효소 공장에서 생산됩니다.
애플리케이션
항체 약물숙주세포 잔류 불순물 검출백신숙주세포 잔류불순물 검출
재조합 단백질 약물숙주 세포 잔류 불순물 검출
사양
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테스트 및 검증 프로그램 |
참조 표준 또는 요구 사항 |
메모 |
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1. 키트 표준(참조 표준) |
국가 표준 또는 준비된 표준에 대한 벤치마킹 |
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2. 선형 범위 |
표준곡선의 범위 |
매뉴얼이나 실제 상황을 참조하세요 (예: 30fg/μL~300pg/μL) |
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알 2 |
≥0.98 (Ps |
중국 약전 2020년판 3407호의 HCD에 대한 요구 사항 일반 조항 |
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경사 |
-3.1~-3.8 (Ps |
중국 약전 2020년판 3407호의 HCD에 대한 요구 사항 일반 조항 |
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증폭 효율 |
90%~110%（（Ps대응경사도 -3.1~-3.6, 업계내 요구사항） |
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3. 정확성 |
국가 표준 DNA와의 편차 |
＜15% |
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샘플 스파이킹 회수율 |
50%~150%（업계내 요구사항 70~130%) |
중국 약전 2020년판 3407호의 HCD에 대한 요구 사항 일반 조항 |
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4. 정밀도 |
반복 가능 |
CV＜15% |
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중간 정밀도 |
CV＜15% |
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5. 특별 함 |
외인성 DNA 간섭 없음 |
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6. 정량화의 한계 |
fg/μL 수준 |
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7. 안정성 |
반복적인 동결과 해동 |
10번 |
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가속 안정성 |
2~8℃ 30일, 37℃ 14일 |
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유효기간 |
-20°C 보관시 2년간 보관 가능 |
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그림
높은 감도: LLOQ는 최저 0.3 fg/µL, LLOD는 최저 0.05 fg/µL입니다.
1. CHO Host Cell Residual DNA Detection Kit (3G)의 선형 범위는 3fg/μL~300pg/μL, R 2 =1, 증폭 효율은 99.29%, 각 농도별 검출값의 CV는 <15%였습니다.
그림 1. CHO DNA(3G) 교정 그래프(좌) 및 증폭 곡선 선형 매핑(우)
2. 표준화된 노래의 가장 낮은 농도 지점에서 CHO DNA(3G)를 3fg/uL 이하의 농도에서 검출하고, 농도당 10회 반복합니다. 결과는 0.3 fg/uL 이상의 농도에서 CV가 <20%, 즉 CHO Host Cell DNA Residue Assay Kit(3G)의 정량 한계가 0.3 fg/uL임을 보여주었습니다.
그림 3. 0.05fg/μL CHO DNA(3G) qPCR 분석 결과
높은 특이성: 다른 숙주 세포 DNA와 교차 반응성이 없습니다.
CHO DNA(3G)에 높은 친화성을 지닌 마우스 종의 게놈 DNA와 생물학적 제제 생산에 일반적으로 사용되는 세포의 게놈 DNA가 CHO DNA 검출 시약에 미치는 간섭을 평가한 결과, 간섭 군과 대조군의 증폭 곡선이 겹치며 간섭이 나타나지 않았습니다(다음 그래프는 CHO DNA 검출 시약에 대한 마우스, HEK293 및 대장균 게놈 DNA의 간섭 데이터를 순서대로 보여줍니다).
그림 4. CHO DNA(3G) 키트를 이용한 간섭실험 결과
제품 정보
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분류 |
품목 번호 |
제품 이름 |
사양 |
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샘플 전처리 |
18461ES |
25톤/100톤 |
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18467ES |
MolPure® Mag48 샘플 준비 키트 FN |
3×16T/6×16T |
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핵산 추출 장비 |
80511ES |
48채널 자동 핵산 추출기 |
48 플럭스 |
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잔류 DNA 검출 |
41307ES |
50톤/100톤 |
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41308ES |
50톤/100톤 |
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41310ES |
SV40LTA&E1A 잔류 DNA 검출 키트 |
50톤/100톤 |
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41317ES |
Hansenula polymorpha 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트 |
50톤/100톤 |
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41319ES |
MDCK 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트 |
50톤/100톤 |
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41323ES |
플라스미드 DNA 잔류물 검출 키트 |
50톤/100톤 |
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41324ES |
S. cerevisiae 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트 |
50톤/100톤 |
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41325ES |
인간 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트 |
50톤/100톤 |
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41328ES |
Pichia pastoris 숙주 세포 DNA 잔류물 검출 키트 |
50톤/100톤 |
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41330ES |
Sf9 및 바큘로바이러스 DNA 잔류물 검출 키트 |
50톤/100톤 |
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41331ES |
50톤/100톤 |
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41332ES |
50톤/100톤 |