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Vantagens

Desvantagens

Reagente de transfecção de lipossomas

1. Os reagentes de transfecção de lipossomas têm lipídios com carga positiva que se ligam a ácidos nucleicos com carga negativa para formar complexos lipídio-ácido nucleico.

2. Esses complexos são atraídos pela membrana celular carregada negativamente.

3. A célula engloba os complexos em endossomos por meio de endocitose.

4. O efeito "esponja de prótons" dos lipídios nos complexos previne a acidificação do endossomo, levando à desestabilização e ruptura da membrana, liberando os complexos no citoplasma.

5. Pequenos ácidos nucleicos como siRNA, miRNA ou mRNA podem atuar no citoplasma, enquanto o DNA precisa entrar no núcleo para ser expresso.

6. Uma vez no núcleo, o DNA é transcrito em mRNA e traduzido em proteínas, expressando o gene estranho.

1. Os reagentes de transfecção de lipossomas oferecem alta eficiência com várias linhas celulares, incluindo células primárias difíceis de transfectar.

2. Eles são versáteis, compatíveis com células aderentes e em suspensão, e vários ácidos nucleicos como DNA, siRNA e miRNA.

3. Esses reagentes funcionam bem em meios contendo soro, evitando a necessidade de remoção do soro e, assim, minimizando os danos às células.

1. Os reagentes de transfecção de lipossomas podem ser tóxicos para as células, especialmente em altas concentrações ou por longos períodos, afetando potencialmente a sobrevivência e a função das células.

2. Eles são mais caros quando comparados aos métodos tradicionais, como a transfecção com fosfato de cálcio.

3. Sua aplicação in vivo é limitada devido à depuração sérica, acúmulo no tecido pulmonar e potencial para causar fortes respostas inflamatórias e alta toxicidade.

Ilha do Príncipe Eduardo reagente de transfecção

1. O PEI, um polímero carregado positivamente, liga-se ao DNA carregado negativamente para formar complexos PEI-DNA por meio de interações eletrostáticas.

2. Esses complexos se ligam à membrana celular carregada negativamente.

3. As células englobam os complexos PEI-DNA por meio de endocitose, formando endossomos.

4. O efeito "esponja de prótons" do PEI faz com que os endossomos inchem e se rompam no ambiente ácido, liberando os complexos no citoplasma.

5.No citoplasma, as ligações PEI-DNA se rompem, permitindo que o DNA entre no núcleo, onde é transcrito e traduzido em proteínas.

1. Os reagentes de transfecção PEI formam complexos estáveis ​​com o DNA, aumentando a eficiência da transfecção.

2. Apresentam menor citotoxicidade em comparação a outros polímeros catiônicos, preservando a viabilidade e a função celular.

3. Os reagentes PEI oferecem uma solução econômica, especialmente para transfecções em larga escala, como a produção de vetores virais.

4. Os reagentes PEI estão disponíveis em grau GMP para produção clínica e comercial, garantindo qualidade e conformidade.

1. Os reagentes de transfecção PEI têm versatilidade limitada, sendo usados ​​principalmente para DNA e menos eficazes com outros ácidos nucleicos, como mRNA, siRNA e miRNA.

2. Eles mostram alta eficiência em tipos específicos de células, como células HEK293, para empacotamento de vírus e expressão de proteínas, mas apresentam baixo desempenho com células difíceis de transfectar.

Reagente de transfecção de fosfato de cálcio

1. Os coprecipitados de DNA/fosfato de cálcio se formam no tampão HEPES com fosfato, onde a carga negativa do DNA se liga aos íons de cálcio positivos.

2. As células englobam esses coprecipitados, que aderem à sua superfície, por meio de endocitose, uma etapa crítica para a eficiência da transfecção.

3. Dentro das células, os coprecipitados liberam DNA, o que pode levar à expressão transitória ou à integração estável no genoma.

1. A transfecção com fosfato de cálcio é econômica e adequada para laboratórios com orçamentos limitados.

2. É fácil de executar, exigindo etapas simples e habilidade técnica mínima.

3. Pode ser usado tanto para expressão proteica transitória quanto para criação de linhas celulares estáveis.

1. A eficiência da transfecção de fosfato de cálcio é variável e sensível a fatores como pH e pureza do DNA, o que pode levar a transfecções malsucedidas, especialmente com DNA impuro.

2. Não é adequado para todos os tipos de células, usado principalmente para células HEK293 e menos eficaz para células primárias e alguns outros tipos de células.