Bioteknikens snabba framsteg har haft en djupgående inverkan på att bekämpa infektionssjukdomar som COVID-19 genom skapandet av mRNA-vacciner producerade via in vitro RNA-syntesteknologi. Många företag, inklusive Moderna i USA, CureVac i Tyskland och BioNTech i Tyskland, har inte bara utvecklat terapeutiska mRNA-vacciner utan även behandlingar för tillstånd som tumörer, infektionssjukdomar och kroniska sjukdomar.
Forskningen och formuleringen av mRNA-vacciner kräver en mångfald av råvaror för att säkerställa deras framgångsrika utveckling. Som en pionjär inom den molekylära enzymindustrin har Yeasen nått framgång i att skapa olika molekylära enzymer och reagens genom avancerad molekylär enzymbioteknik och storskalig proteinjäsning och reningsteknik.
För att garantera både produktkvalitet och produktionskapacitet har Yeasen etablerat en produktionsanläggning på GMP-nivå i Wuhan, som fullt ut kan tillgodose produktionskraven i industriell skala med en årlig kapacitet som överstiger 5 miljarder enheter. Yeasen står dessutom som det första kinesiska företaget att erhålla ISO 13485-certifieringen för forskning, utveckling, tillverkning och distribution av molekylära enzymer. Denna certifiering säkerställer kvaliteten, konsistensen och spårbarheten för alla deras reagens.
1. Fördel med GMP
2. Yeasen kan tillhandahålla GMP-klassade produkter
3. Yeasen förvärvade DMF-nummer för många produkter
4. Tillämpningsscenarier för Yeasen-produkter
5. Råmaterial för beredning av mRNA-vaccin från Yeasen
6. Beställningsinformation
1. Fördel med GMP
"GMP-grade" är en varumärkesterm som Yeasen använder för att beskriva reagenser tillverkade vid ISO 13485-certifierade anläggningar. Yeasens reagenser av GMP-grad tillverkas i enlighet med ISO 13485 kvalitetsledningssystemstandarder och med strängare processkontroller och kompletta dokumentationshandlingar. Yeasen kan inte bara erbjuda högkvalitativa reagenser utan också tillhandahålla dokument, platsrevisioner och annan support till våra kunder.
Tabell 1. Fördelen med GMP
| Kvalitetskontroller | Forskningsnivå | GMP-klass |
| Djurfri | Material som härrör från djur kan användas | Djurfria certifikat kan tillhandahållas vid behov |
| Cellbankskarakterisering | Mindre strikt | Stringent (överensstämmer med GMP-regler) |
| Spårbarhetsinformation för råvaror och färdig produkt | Mindre strikt | Stringent (överensstämmer med GMP-regler) |
| Endotoxinnivåkontroll | / | Stringent |
| Steril kontroll | / | Stringent |
| Satsregister för tillverkning och testning | Mindre strikt | Stringent (batchposter kan tillhandahållas om det behövs) |
| Processvalideringsrapport | / | Rapporten kan tillhandahållas vid behov |
| Byt styrsystem | Självutvärdering | Stringent (överensstämmer med GMP-regler) |
| Kvalitetsledningssystem | Självutvärdering | ISO 13485 certifiering |
| DMF-nummer | / | Ja (rapportering) |
2. Yeasen kan tillhandahålla GMP-klassade produkter
Med hjälp av omfattande expertis och teknisk spetskompetens inom enzymutveckling och produktion i industriell skala har Yeasen etablerat en banbrytande anläggning känd som "mRNAtools." Denna anläggning, som spänner över 50 000 kvadratfot, följer GMP-reglerna och har toppmoderna funktioner, inklusive 2×1500L automatiserade fermenteringsenheter, storskalig reningsutrustning och lyofiliseringsmöjligheter. mRNAtools är dedikerade till att leverera stringenta reagenser som överensstämmer med kundens produktion och regulatoriska krav.
Yeasens produktionsanläggning för molekylära enzymer, specialbyggd för GMP-klassade produkter, säkerställer produktkvalitet på både hårdvaru- och mjukvarunivå. Det består av ett mycket kompetent team på 70 yrkesverksamma, som var och en har lång erfarenhet av GMP-produktion. Lager- och logistikverksamheten är modulariserad, vilket säkerställer säker lagring och effektiv transport av produkter. Ett rikstäckande distributionsnätverk med flera centra garanterar ytterligare en tillförlitlig leveranscykel.
3. Yeasen förvärvade DMF-nummer för många produkter
Drug Master-filer (DMF) är konfidentiella dokument som frivilligt lämnas in till US Food & Drug Administration (FDA). De innehåller detaljerad information om anläggningar, processer eller artiklar som används vid produktion, bearbetning, förpackning och lagring av humanläkemedel.
FDA granskar det tekniska innehållet i en DMF när en tillverkare av aktiv läkemedelsingrediens (API) hänvisar till den för att stödja deras Investigational New Drug Application (IND), New Drug Application (NDA), Abbreviated New Drug Application (ANDA) eller Export Application. DMF spelar en avgörande roll i dessa applikationer.När tillverkare lämnar in DMF för specifika material kan FDA-godkännandeprocessen påskyndas avsevärt.
Yeasen har DMF-filer som kan effektivisera projekttidslinjer. Om så önskas kan du begära referensauktorisering till våra DMF:er för att stödja din FDA-ansökan. För att initiera referensauktoriseringen för våra DMF:er, skicka in en begäran om auktorisering till Yeasen och begär att vi tillhandahåller ett FDA Center-specifikt DMF auktoriseringsbrev.
4. Tillämpningsscenarier för Yeasen-produkter
4.1 Mallgenerering
Plasmidlinjärisering är ett oumbärligt steg under mallgenerering när plasmidvektorer används som transkriptionsmallar. När transkriptionen fortsätter till slutet av DNA-mallarna säkerställer plasmidlinjärisering att RNA-transkript av en definierad längd och sekvens genereras. Yeasen tillhandahåller olika restriktionsenzymer för att möta dina behov. Vi rekommenderar att du väljer restriktionsenzymer som genererar trubbiga ändar eller 5'-överhäng.
4.2 In vitro Transkription (IVT)
In vitro-transkription påverkas av olika faktorer. Enzymer, buffertar och modifierade substrat har alla en stor inverkan på transkriptionseffektiviteten.
Baserat på ZymeEditor-plattformen har YEASEN Biotech utvecklat nya T7 RNA-polymeraser som avsevärt minskar genereringen av dsRNA under in vitro-transkriptionsprocessen (IVT) (T7 RNA-polymeras, lågt ds RNA, 250 U/μL). Det sänker avsevärt immunogeniciteten hos mRNA och förbättrar i viss utsträckning integriteten av mRNA. Denna utveckling förväntas spela en avgörande roll för att främja utvecklingen av mRNA-vacciner och cancerläkemedel.
Genom att optimera bufferten och justera salttypen för nukleotidsubstratet förbättrade vi avsevärt effektiviteten av transkription och minskade produktionen av dsRNA.
Figur 2. Tris NTP kan avsevärt förbättra lVT-effektiviteten och minska dsRNA-produktionen
4,3 mRNA-täckning
Eftersom en 5' cap-struktur minskar immunogeniciteten och krävs för effektiv translation av mRNA, är det nödvändigt att lägga till cap-strukturer till 5'-ändarna av mRNA som genereras genom transkription.
Figur 3. Cap rate-detekteringsresultat (LC-MS-detektion)
4,4 mRNA-rening
Rening är ett oumbärligt steg för att uppnå mRNA med hög renhet.
5. Råmaterial för beredning av mRNA-vaccin från Yeasen
För närvarande kan Yeasen tillhandahålla en komplett uppsättning produkter i produktionsprocessen av mRNA-stamlösning. Produkterna är strikt kontrollerade av GMP-produktion och uppfyller helt kraven för mRNA-vaccinproduktion.
Tabell 2.Råmaterial för mRNA-vaccinberedning tillhandahållna av Yeasen
| Förberedelse av mall | In vitro transkription | ||
| 10164ES | 10623ES | ||
| 10122ES | 10625ES | ||
| 10922ES | 10672ES | ||
| 10300ES | 10621ES | ||
|
| 10611ES | ||
| 10661ES | 10133ES | ||
| RNAse R (20U/uL) | 14615ES | 10650ES | |
| Xba I | 10662ES | 10651ES | |
| Övertäckning |
| Rening |
|
| 10614ES | 12602ES | ||
| 10612ES | Magnetisk separationsställ | 80460ES | |
| 10619ES | 36717ES | ||
| 10681ES |
| ||
6. Beställningsinformation
Följande är representativa produkter som erbjuds av Yeasen. Ytterligare storlekar finns tillgängliga.Våra produkter är mycket optimerade för att fungera tillsammans, för att säkerställa överlägsen prestanda och reproducerbarhet. Vi kan även erbjuda skräddarsydda tjänster. Om du är intresserad av en produkt som inte visas, kontakta oss så hjälper vi dig att möta dina behov.
Tabell 3. Beställningsinformation
Angående läsning:
GMP-grade reagens för mRNA in vitro syntes
DNase I och deras tillämpningar inom biomedicin
Referenser:
[1] Chaudhary, N., Weissman, D., & Whitehead, KA (2021). mRNA-vacciner för infektionssjukdomar: principer, leverans och klinisk översättning. Naturrecensioner. drog upptäckt, 20(11), 817–838.
[2] Vogel, AB et al. Självförstärkande RNA-vaccin ger likvärdigt skydd mot influensa till mRNA-vaccin men
vid mycket lägre doser. Molecular therapy: tidskriften för American Society of Gene Therapy 26, 446-455,
[3] Fuchs, AL, Neu, A. & Sprangers, R. En allmän metod för snabb och kostnadseffektiv storskalig produktion av 5'
täckt RNA. RNA (New York, NY) 22, 1454-1466, doi:10.1261/rna.056614.116 (2016).
[4] Schmid, A.Överväganden för att producera mRNA-vacciner för kliniska prövningar. Metoder inom molekylärbiologi (Clifton, NJ) 1499, 237-251,
[5] Banerji, A. et al. mRNA-vaccin för att förebygga covid-19-sjukdom och rapporterade allergiska reaktioner: aktuella bevis och föreslagen tillvägagångssätt. Tidskriften för allergi och klinisk immunologi. I praktiken 9, 1423-1437,
[6] Richner, JM et al. Modifierade mRNA-vacciner skyddar mot Zika-virusinfektion. Cell 168, 1114-1125.e1110,
[7] Corbett, KS et al. SARS-CoV-2 mRNA-vaccindesign möjliggörs av prototyppatogenberedskap. Nature 586,567-571,
[8] Corbett, KS et al. mRNA-1273 skyddar mot SARS-CoV-2 betainfektion hos icke-mänskliga primater. Nature immunology 22, 1306-1315,
[9] Keech, C. et al. Fas 1-2-prövning av ett SARS-CoV-2 rekombinant spikprotein nanopartikelvaccin. The New England Journal of Medicine 383, 2320-2332,
[10] Kramps, T. & Elbers, K. Introduktion till RNA-vacciner. Metoder inom molekylärbiologi (Clifton, NJ) 1499, 1-11,
[11] Linares-Fernández, S., Lacroix, C., Exposito, JY & Verrier, B. Skräddarsy mRNA-vaccin för att balansera medfött/- adaptivt immunsvar. Trender inom molekylär medicin 26, 311-323,