Yeasen và Molefuture đã phát triển DNA Ligase T4 chịu nhiệt, độ trung thực cao để chống lại sự thắt nút giả

Yeasen và Molefuture giới thiệu Advanced T4 DNA Ligase để vượt qua những thách thức về sinh học phân tử

Yeasen và Molefuture đã cùng nhau phát triển một ligase DNA T4 tiên tiến sử dụng nền tảng ZymeEditor của họ, giải quyết các vấn đề chính trong sinh học phân tử và xây dựng thư viện DNA cho giải trình tự thế hệ tiếp theo (NGS). T4 DNA ligase truyền thống phải đối mặt với những thách thức như độ ổn định kém, hình thành dimer bộ điều hợp cao và tự liên kết đoạn DNA cao. Enzym mới này nhằm mục đích khắc phục những hạn chế này.

T4 DNA ligase, một enzyme phụ thuộc ATP, có một miền liên kết DNA xoắn chặt (DBD), một miền nucleotidyl-transferase (NTase) và một miền OB-fold. Bằng cách phân tích cấu trúc protein, các nhà nghiên cứu đã xác định được các gốc chính trong phạm vi 5 đến 20Å của chất nền DNA. Sử dụng các công cụ tính toán tiên tiến, sàng lọc in silico và phân tích cấu trúc-chức năng, họ đã thiết kế các đột biến thông qua sự sắp xếp trình tự đồng thuận, kết hợp các hiểu biết về cấu trúc-chức năng.

Ngoài thiết kế hợp lý, nhóm nghiên cứu đã sử dụng phương pháp MTPS để tiến hóa có định hướng, sàng lọc hơn 10.000 đột biến về độ ổn định, hoạt động và hoạt động còn lại. Các ứng viên triển vọng đã trải qua quá trình tinh chế và thử nghiệm nghiêm ngặt. Tiếp theo là quá trình mô tả chi tiết, đánh giá hoạt động, độ ổn định, tự liên kết bộ điều hợp, tự liên kết đoạn DNA và năng suất DNA.

Các nhà nghiên cứu đã kết hợp thiết kế hợp lý DNA và đột biến có định hướng trên các đột biến G1 để phát triển các biến thể đặc biệt phù hợp với nhiều ứng dụng khác nhau. Phương pháp tiếp cận toàn diện này đã tạo ra một ligase DNA T4 hiệu quả và đáng tin cậy, sẵn sàng nâng cao nghiên cứu sinh học phân tử và xây dựng thư viện DNA trong NGS.

Hình 1. Minh họa quá trình tiến hóa của DNA Ligase Versatility T4. (A) Thiết kế hợp lý của T4 DNA ligase. (B) Sàng lọc các đột biến T4 DNA ligase chịu nhiệt ở 45℃, dẫn đến việc xác định các đột biến có hoạt động đặc hiệu được tăng cường đáng kể. (C) Sàng lọc các đột biến T4 DNA ligase nhằm mục đích giảm sự hình thành dimer bộ điều hợp trong quá trình chuẩn bị thư viện DNA. (D) Đánh giá khả năng giữ lại của thư viện sau khi xử lý nhiệt ở 42℃ trong 1 giờ bằng phương pháp chuẩn bị thư viện DNA.
Bảng 1. Yeasen T4 DNA ligase đa năng chịu nhiệt. Enzym được xử lý ở 30℃ trong 5 ngày và phân tích bằng phương pháp DNA Lib Prep.
Hình 2. Yeasen T4 DNA ligase đa năng có độ trung thực cao hơn so với DNA ligase T4 kiểu hoang dã (WT) được chỉ ra bởi sự hình thành ít dimer bộ điều hợp hơn do tự liên kết sai (A) và (B) được phân tích bằng phương pháp DNA Lib Prep.
Hình 3. Yeasen T4 DNA ligase đa năng cho thấy sự hình thành dimer bộ điều hợp thấp nhất so với các ligase T4 DNA thương mại bao gồm các ligase chịu nhiệt được phân tích bằng phương pháp DNA Lib Prep.
Sự đột phá này chứng minh Yeasen và cam kết của Molefuture về sự đổi mới và xuất sắc trong kỹ thuật enzyme.

Thông tin đặt hàng

Tên Con mèo# Ghi chú
Enzym Hieff™ T4 DNA Ligase đa năng (600 U/µL) 12996ES Chịu nhiệt và độ trung thực cao để phát hiện gen khối u
ADN Bộ dụng cụ chuẩn bị thư viện DNA Hieff NGS® 13577ES Phương pháp khối u/ cơ học
Bộ dụng cụ chuẩn bị thư viện DNA Hieff NGS® OnePot Pro V2 12194ES Phương pháp khối u/Enzym
Hieff NGS® OnePot II Bộ dụng cụ chuẩn bị thư viện DNA cho Illumina 13490ES Pathgen/Enzymetic/thời gian thường xuyên (140 phút)
Bộ dụng cụ chuẩn bị thư viện DNA Flash Hieff NGS® OnePot 12316ES Pathgen/Enzyme/Siêu nhanh (100 phút)
Hieff NGS® DNA&RNA Library Co-Prep Kit V2 12305ES Pathgen/Enzyme/DNA & RNA Co-Prep
ARN Bộ dụng cụ chuẩn bị thư viện mRNA chế độ kép Hieff NGS® Ultima 12308ES Không có hạt từ tính oligo dT, 11 ống
Bộ dụng cụ chuẩn bị thư viện mRNA chế độ kép Hieff NGS® Ultima 12309ES hạt từ tính oligo dT plus, 14 ống
Bộ dụng cụ chuẩn bị thư viện RNA chế độ kép Hieff NGS® Ultima 12310ES Phiên bản pha sẵn, 5 ống
Bộ dụng cụ chuẩn bị thư viện RNA Hieff NGS ® EvoMax (Phiên bản trộn sẵn) (actinomycin D Miễn phí) 12340ES Phiên bản đã trộn sẵn, (Actinomycin D Miễn phí)
Bộ dụng cụ làm suy giảm rRNA Hieff NGS® MaxUp (Thực vật) 12254ES Thực vật
Bộ dụng cụ làm suy giảm rRNA của người Hieff NGS® MaxUp (rRNA & ITS/ETS) 12257ES Nhân loại

Vui lòng để lại tin nhắn để hỏi về dữ liệu so sánh hiệu suất giữa enzyme này và các ligase T4 DNA thông thường và chịu nhiệt hàng đầu khác.

Giới thiệu về Molefuture Biotechnology

Molefuture Biotechnology là công ty con của Yeasen Công ty TNHH Công nghệ sinh học (Thượng Hải), chuyên cung cấp các giải pháp biến đổi enzyme tùy chỉnh được thúc đẩy bởi công nghệ tiến hóa enzyme. Tận dụng các nguồn lực của Yeasen Công nghệ sinh học, Molefuture hoạt động trên sáu nền tảng công nghệ chính: nền tảng tiến hóa enzyme cải tiến ZymeEditor, nền tảng biểu hiện hiệu suất cao đa vật chủ, nền tảng phát triển quy trình lên men, nền tảng phát triển quy trình tinh chế, nền tảng sản xuất enzyme siêu sạch và nền tảng phân tích enzyme và kiểm soát chất lượng. Với sáu nền tảng công nghệ này, Molefuture có thể cung cấp một bộ giải pháp tùy chỉnh hoàn chỉnh bao gồm tiến hóa theo hướng enzyme, phát triển enzyme mới, phát triển quy trình enzyme và sản xuất mở rộng quy mô cấp GMP để đáp ứng nhu cầu ứng dụng enzyme trong các lĩnh vực như chẩn đoán in vitro, y sinh học, sinh học tổng hợp, thẩm mỹ y khoa, sản phẩm trung gian dược phẩm, v.v.

Cuộc điều tra