HEK293宿主细胞DNA残基检测试剂盒（3G）验证报告

HEK293 宿主细胞DNA残留检测试剂盒 （3）格）

资格概要（类别编号：41331ES60）

1. 背景

本报告中总结的数据由 Yeasen 'HEK293 的生物技术 宿主细胞DNA残留检测试剂盒（3G）' 产品。汇总数据仅供用户参考，用户需自行验证宿主细胞残留 DNA方法通过使用自己的样本来确认该方法是否符合用户的要求。建议所有使用该试剂盒的实验室验证以下参数：线性、范围、准确度、精密度、定量限、特异性和稳健性。

Yeasen 生物技术公司可以提供该试剂盒的详细鉴定报告。如果用户使用此报告，则仅需评估其适用性（包括精密度、 准确性 应验证其有效性和特异性。

2. 实验材料和方法

2.1 HEK293 宿主细胞 DNA 残留检测试剂盒 (3G)，供应商： Yeasen，货号：41331ES60。

2.2 MolPure® 磁性残留 DNA 样本制备试剂盒，供应商： Yeasen，货号：18461ES60。

2.3 原始资料：电子版记录于《实验报告》 父文件“HEK293 宿主细胞DNA残留检测试剂盒（3G）'。

2.4 方法：实验所用材料及操作方法基本由 Yeasen 经过长期评估和验证的生物技术，试剂盒的开发和生产均遵循ISO 13485体系。

3. 资格审查内容及结果

3.1 检测范围

试剂盒的线性范围为30 fg/μL~300 pg/μL，R²≥0.998，扩增效率在90％～110％范围内，各浓度测定的CV<15％。

图 1 HEK293 DNA (3G) qPCR 标准曲线

3.2 准确性

3.2。1 R生态恢复

3.2.1.1 空白样品加标回收率实验

HEK293 样品 分别制备高、低浓度DNA标准品：300 pg/μL、3 pg/μL、30 fg/μL，采用磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒提取后进行测定（每个样本重复2次提取，每次提取重复3次测定），并分析样品回收率及CV。

对于不同浓度的DNA样品，回收率为70%~130%，CV均<20%。

样品类型	理论浓度	提取 1 个均值	提取 2 个均值	平均浓度	简历	恢复
空白样品	/	/	/	/	/	/
恢复示例 1	300 皮克/微升	306.81 皮克/微升	279.57 皮克/微升	293.82 皮克/微升	6.56%	97.94％
恢复示例 2	3皮克/微升	3.11 皮克/微升	2.99 皮克/微升	3.09 皮克/微升	2.75％	103.00%
恢复示例 3	30 微克/微升	31.02 克/微升	30.63 克/微升	30.83 克/微升	0.89％	102.77％

表1 空白样品加标回收率

3.2.1.2 模拟样品加标回收实验

用 5 种不同的背景溶液（高蛋白、高核酸、高和低 pH、高盐）提取相同浓度（3 pg/μL HEK293 DNA）的样品（每个样品进行 2 次提取重复，每次提取进行 3 次测定重复），并分析样品回收率和 CV。

不同背景溶液的 DNA 样本回收率范围为 70% 至 130%，所有 CV 均 <20%。

样品类型	理论浓度	提取 1 个均值	提取 2 个均值	平均浓度	简历	恢复
基本示例	/	/	/	/	/	/
高蛋白	3皮克/微升	2.65	2.80	2.73	3.80％	90.87％
高核酸		2.82	2.97	2.90	3.71％	96.58％
高盐		2.88	2.70	2.79	4.47％	92.89％
高 pH 值		2.81	2.93	2.87	2.98％	95.71％
低 pH 值		2.76	2.79	2.77	0.99％	92.48％

表 2 基本样品加标回收率

3.3 精度

3.3.1 重复性

对浓度为 30 fg/μL 的 HEK293 DNA 标准重复测定 10 次，CV <15%。

重复	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	意思是	简历％
检测值 (fg/μL)	29.51	30.02	30.13	30.16	27.99	31.01	31.05	30.95	31.02	29.86	30.17	3.15％

表3 重复性结果

3.3。2 中间精度

三位实验人员独立检测了高、低浓度300 pg/μL、3 pg/μL、30 fg/μL的HEK293 DNA标准样品，每个浓度做了三次重复实验，所得九个数据的CV均<15％。

经验值	实际浓度 理论浓度	HEK293 DNA (3G)
		300 皮克/微升	3皮克/微升	30 微克/微升
实验 1	决定 1	319.58	3.026	32.02
	决定 2	309.76	3.051	37.01
	决定 3	309.24	3.067	36.03
实验 2	决定 4	308.34	2.909	29.91
	决定 5	308.54	2.9	29.67
	决定 6	305.83	2.921	28.85
实验 3	决定 7	299.11	3.035	29.36
	决定 8	300.07	2.833	31.14
	决定 9	302.03	3.033	33.07
/	意思是	306.95	2.975	31.90
/	简历％	2.03%	2.83%	9.26%

表4 中间精密度结果

3.4 特异性

对生物制品生产中常用的细胞基因组DNA对HEK293 DNA检测试剂的干扰进行了评价，干扰组与对照组重叠，未见到干扰（下图依次为CHO、E.coli、Pichia Pastoris基因组DNA对HEK293 DNA检测试剂的干扰数据）。

图2 干扰实验结果

3.5 定量限

对HEK293 DNA在30 fg/μL、20 fg/μL、10 fg/μL、5 fg/μL浓度下进行检测，每个浓度重复10次，结果显示10 fg/μL及以上浓度的CV<20%，即HEK293宿主细胞DNA残留检测试剂盒（3G）的定量限为10 fg/μL。

重复 测试项目	HEK293 DNA（3G）（fg/μL）
	数量	重算比率%
1	11.04	110.40%
2	9.97	99.70％
3	11.12	111.20％
4	11.07	110.70%
5	11.21	112.10％
6	9.93	99.30％
7	10.25	102.50％
8	10.16	101.60%
9	10.08	100.80%
10	10.11	101.10%
意思是	10.49	/
简历％	5.14％	/

图3 10fg/μL HEK293 DNA (3G) qPCR检测结果

3.6 稳健性

本套件已经过测试，适用于（但不限于）以下仪器：

小贩	仪器型号	扩增效率	R2	定量限（fg/μL）	简历％
热	澳大利亚商业信息局 7500	102.84％	1	10	7%
热	ABI QuantStudio5	104.70％	0.999	10	9％
上海红石	斯兰	101.46%	0.999	10	8%

表5 仪器适用性试验结果

3.7 稳定性

3.7.1 冻融稳定性

HEK293宿主细胞DNA残留检测试剂盒（3G）经10次反复冻融测试，试剂盒性能未受影响。

测试指标 冻融时间	范围	T0时间	冻融10次
标准曲线参数	扩增效率	99.34％	100.78％
	R2	1	1
定量限（30 fg/μL）	简历	11%	7%

表6 冻融稳定性结果分析

3.7。2 加速稳定性

HEK293宿主细胞DNA残留检测试剂盒（3G）分别在2~8°C下保存30天和37°C下保存14天。试剂盒的性能均不受影响。

测试指标 加速温度和时间	范围	T0时间	37℃ 7天	37℃ 14天
标准曲线参数	扩增效率	103.83%	101.58％	100.47%
	R2	0.999	1	1
定量限（30 fg/μL）	简历％	8%	5％	5％

表7 加速稳定性结果分析

3.8 空白限量

无模板对照 (NTC) 是模板稀释液，96 次重复 CT 值 >32（加上 ROX 校准阈值线设置为 0.06）。

图4 NTC实验结果

4. 4。参考

4.1 国家药典委员会. 中华人民共和国药典（三部）[S]. 北京：中国医药科技出版社，p.542-543, 2020.

4.2国家药品监督管理局，2007年：《生物制品质量控制分析方法验证技术审查通则》。

4.3 ICH(2022)《分析方法验证Q2》，征求意见稿。

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