Yeasen 和 Molefuture 開發出耐熱、高保真 T4 DNA 連接酶來對抗假連接

Yeasen 和 Molefuture 推出先進的 T4 DNA 連接酶以克服分子生物學挑戰

Yeasen 和 Molefuture 利用他們的 ZymeEditor 平台共同開發了一種尖端的 T4 DNA 連接酶，解決了分子生物學和下一代定序 (NGS) DNA 文庫構建中的關鍵問題。傳統的T4 DNA連接酶面臨穩定性差、接頭二聚體形成率高、DNA片段自連接率高等挑戰。這種新型酵素旨在克服這些限制。

T4 DNA 連接酶是一種 ATP 依賴性酶，具有緊密螺旋 DNA 結合域 (DBD)、核苷酸轉移酶 (NTase) 域和 OB 折疊域。透過分析蛋白質結構，研究人員確定了 DNA 底物 5 至 20Å 範圍內的關鍵殘基。他們利用先進的計算工具、電腦篩選和結構功能分析，透過一致序列比對設計突變體，並結合結構功能見解。

除了合理設計外，團隊還採用了MTPS方法進行定向進化，篩選了超過10,000個突變體的穩定性、活性和殘留活性。有希望的候選人經過了嚴格的淨化和測試。隨後進行詳細的表徵，評估活性、穩定性、接頭自連接、DNA 片段自連接和 DNA 產量。

研究人員將DNA合理設計與G1突變體的定向突變結合，發展出適合多種應用的特殊變異。這種綜合方法產生了高效、可靠的 T4 DNA 連接酶，有望增強 NGS 中的分子生物學研究和 DNA 文庫建構。

圖 1.說明了 Versatility T4 DNA 連接酶的演化。 （一）合理設計 T4 DNA 連接酶。 (B) 在 45℃ 下篩選耐熱 T4 DNA 連接酶突變體，從而鑑定出比活性顯著增強的突變體。 (C) 篩選 T4 DNA 連接酶突變體，旨在減少 DNA 文庫製備過程中接頭二聚體的形成。 (D) 使用 DNA 文庫製備方法在 42℃ 熱處理 1 小時後評估文庫產量的保留。
表 1. Yeasen 多功能 T4 DNA 連接酶具有熱穩定性。將酵素在30℃下處理5天，並以DNA Lib Prep方法進行分析。
圖 2. Yeasen 多功能T4 DNA連接酶具有更高的保真度 與野生型 (WT) T4 DNA 連接酶相比，透過 DNA Lib Prep 方法分析，由於自身錯誤連接 (A) 和 (B)，形成的接頭二聚體較少。
圖 3. Yeasen 透過 DNA Lib Prep 方法分析，與商用 T4 DNA 連接酶（包括耐熱連接酶）相比，多功能 T4 DNA 連接酶顯示出最低的接頭二聚體形成。
這一突破表明 Yeasen 以及 Molefuture 對酵素工程創新和卓越的承諾。

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姓名 貓＃ 筆記
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Hieff NGS® OnePot Pro DNA 文庫製備試劑盒 V2 12194ES 腫瘤/酵素法
Hieff NGS® OnePot Illumina II DNA 文庫製備試劑盒 13490ES 病原體/酵素/常規時間（140分鐘）
Hieff NGS® OnePot Flash DNA 文庫製備試劑盒 12316ES 病原體/ 酵素/ 超快 (100分鐘)
Hieff NGS® DNA&RNA 文庫共製備試劑盒 V2 12305ES 病原體/酵素/DNA 和 RNA 共製備
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Hieff NGS® Ultima 雙模式 mRNA 文庫製備試劑盒 12309ES oligo dT 磁珠 plus，14 管
Hieff NGS® Ultima 雙模式 RNA 文庫製備試劑盒 12310ES 預混版，5 管
Hieff NGS ® EvoMax RNA Library Prep Kit（預混版）（放線菌素D 自由的） 12340ES 預混版本， （放線菌素 D 自由的）
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關於Molefuture Biotechnology

Molefuture Biotechnology 是 Yeasen 生物科技（上海）有限公司，專業提供以酵素進化技術為驅動的客製化化酶改造解決方案。利用資源 Yeasen 生物技術方面，Molefuture 擁有六大技術平台：ZymeEditor創新酶進化平台、多宿主高效表達平台、發酵製程開發平台、純化製程開發平台、超淨酶生產平台、酵素分析與品管平台。依托這六大技術平台，Molefuture可提供包括酵素定向進化、新型酵素開發、酵素製程開發、GMP等級放大生產等一整套客製化解決方案，滿足體外診斷、生物醫藥、合成生物學、醫學美容、醫藥中間體等領域的酵素應用需求。等

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