Chapitre 1 : La technologie PCR
1.1 Principes de la PCR
La PCR (Polymerase Chain Reaction), ou réaction en chaîne par polymérase, fait référence à l'ADN polymérase catalysée par le brin parent d'ADN comme modèle, avec un amorce spécifique pour l'extension du point de départ, l'ajout de dNTP, Mg2+ et facteurs d'extension, amélioration de l'amplification facteurs. Grâce aux étapes de dénaturation, de recuit et d'extension, la réplication in vitro du brin fille est complémentaire de l'ADN modèle du brin parent, ce qui peut amplifier rapidement et spécifiquement tout ADN cible in vitro.
1.2 Classification des ADN polymérases
L'ADN pol est un enzyme importante pour cellulaire réplication de l'ADN. Selon la stabilité thermique, la capacité de synthèse, la vitesse, la fidélité et spécificité, elle peut être classée comme ADN polymérase Taq, ADN polymérase haute fidélité, ADN polymérase à démarrage à chaud, ADN polymérase à expansion directe, ADN polymérase à fragmentation longue enzyme, ADN polymérase rapide, ADN polymérase multiple, etc..
La plus courante d'entre elles est l'ADN polymérase Taq, qui possède une activité polymérase à l'extrémité 5'→3' et activité exonucléase à l'extrémité 5'→3', mais non Activité de correction de l'extrémité 3'→5'. La caractéristique la plus importante de Taq est sa bonne résistance à la chaleur, qui peut supporter la dénaturation thermique étape de la PCR, ce qui rend inutile l’ajout d’enzymes supplémentaires à mi-chemin du processus. Cependant, Taq a une faible fidélité car il n'a pas d'activité de relecture. Sa fidélité est principalement obtenu par la concentration et le rapport des ions magnésium et des dNTP.
L'ADN polymérase haute fidélité contient un centre de polymérisation et un centre de clivage, le centre de polymérisation a une activité d'ADN polymérase 5'→3', qui peut catalyser la synthèse de l'ADN dans la direction 5'→3'; le centre de clivage a une activité exonucléase 3'→5', qui peut effectuer la réparation des mésappariements de bases. Par conséquent, en plus des caractéristiques de l'ADN polymérase Taq, l'ADN polymérase haute fidélité a également une activité correctrice, responsable de exciser les dépareillés nucléotides, garantissant ainsi l'exactitude du produit.
Le diagramme ci-dessus montre comment fonctionne l'ADN polymérase [1].
La PCR directe (PCR directe) est une réaction qui utilise des échantillons non purifiés pour l'amplification PCR et l'analyse animale ou des tissus végétaux pour une amplification directe. Actuellement, Yeasen Les kits PCR directs peuvent être utilisés pour l'amplification PCR d'échantillons bruts tels que des plantes, des tissus animaux, du sang, etc. sans nécessiter de purification d’acide nucléique, ce qui simplifie grandement le processus des expériences PCR.
La figure ci-dessus montre la technique PCR directe.
UN. Méthode directe : prélever une petite quantité d'échantillon et l'ajouter directement au PCR Master Mix pour l'identification par PCR ;
B. Méthode de lyse : une fois l'échantillon prélevé, ajoutez-le à la solution de lyse pour libérer le génome, prélevez une petite quantité du surnageant de lyse et ajoutez-le au PCR Master Mix pour l'identification par PCR.
1.3 Questions fréquemment posées et solutions
| Inquiéter | Raison | Solution |
| Sans bandes amplifiées | Problèmes du système d'électrophorèse | Dépannage du colorant d'acide nucléique, de la concentration du gel et du tampon d'électrophorèse. |
| Température de dénaturation inexacte | La température indiquée par l'instrument PCR est-elle cohérente avec la température réelle ? Si la température est trop élevée, l'enzyme est rapidement dans les premiers cycles ; si elle est trop faible, la dénaturation du modèle n'est pas complète. | |
| Contamination de la protéase et de la nucléase dans le système réactionnel | Le système réactionnel doit être chauffé à 95 °C pendant 5 à 10 minutes avant l'ajout de l'enzyme Taq. | |
| Perreur de rime | Vérifiez la spécificité des amorces ou reconcevez les amorces à l'aide de BLAST. | |
| Le modèle contient des impuretés | En particulier, les tissus fixés au formaldéhyde et inclus en paraffine contiennent souvent de l'acide formique, provoquant une dépurination de l'ADN et affectant les résultats de la PCR. | |
| Détérioration et défaillance de l'amorce | Confirmez que les amorces synthétiques sont correctes, purifiées ou inactivées en raison de conditions de stockage inappropriées. | |
| Moins de quantité de produit PCR | Température de recuit inappropriée | Une réaction de PCR en gradient a été conçue pour optimiser la température de recuit avec un gradient de 2 degrés. |
| Présence d'inhibiteurs dans la matrice d'ADN | Assurez-vous que le modèle d’ADN est propre. | |
| Dénaturation prolongée | Une dénaturation prolongée conduit à l’inactivation de l’ADN polymérase. | |
| Rallonge trop courte | Le temps d'extension est trop court. Réglez le temps d'extension sur le principe de 1 kb/min. | |
| Quantité de modèle d'ADN trop faible | Augmenter la quantité de modèle d’ADN. | |
| Quantité insuffisante d'amorces | Augmenter la teneur en apprêt du système. | |
| Nombre insuffisant de cycles PCR | Augmenter le nombre de cycles de réaction. | |
| Plusieurs bandes | Faible spécificité de l'amorce | Des logiciels de conception d'amorces tels que BLAST et Primer ont été utilisés pour vérifier la spécificité des amorces ou pour reconcevoir les amorces. |
| Nombre excessif de boucles | Augmentez la quantité de modèle de manière appropriée et réduisez le nombre de cycles. | |
| Contamination exogène de l'ADN | Assurer un fonctionnement propre. | |
| Quantité excessive de modèles | La quantité d’ADN plasmidique doit être < 50 ng, tandis que l’ADN génomique doit être < 200 ng. | |
| Trop d'apprêt | Réduire la quantité d’amorces dans le système réactionnel. | |
| La solution de réaction n'est pas bien mélangée | Assurez-vous que le tampon de réaction est complètement fondu et bien mélangé. | |
| Mg Forte concentration | Ajustez la concentration de Mg utilisée de manière appropriée. | |
| Dosage élevé d'enzymes ou mauvaise qualité d'enzymes | Réduisez la quantité d’enzyme ou remplacez-la par une autre source. | |
| Faible température de recuit, long temps de recuit et d'extension | Augmentez la température de recuit pour réduire le temps de dénaturation et d’extension, ou concevez une réaction PCR en gradient pour optimiser la température de recuit. | |
| Problèmes avec le mélange PCR lui-même | S'il s'agit d'un prémélange PCR, il se peut que cela vienne de la qualité du réactif lui-même, il est recommandé de changer de lot ou d'autres marques. | |
| Mauvaise taille | Ccontamination | Nettoyez le banc avec de nouveaux réactifs et pointes. |
| Utilisation incorrecte de modèles ou d'amorces | Remplacer les amorces et les gabarits. | |
| Génotype | Des analyses de séquence et des études BLAST ont été réalisées sur les gènes étudiés. |
Chapitre 2 : Électrophorèse des acides nucléiques
2.1 Principes de l'électrophorèse des acides nucléiques
Le mouvement de particules chargées sous l'action d'un champ électrique vers une électrode opposée à leurs propriétés électriques est appelé électrophorèse. L'utilisation des particules chargées dans le champ électrique se déplacent à des vitesses différentes et réalisent la séparation de la technologie appelée électrophorèse. L'électrophorèse des acides nucléiques est une outil important pour la recherche sur les acides nucléiques et est un partie intégrante de techniques telles que sondes d'acide nucléique, amplification d'acide nucléique et l'analyse de séquence. L'électrophorèse des acides nucléiques est généralement réalisé dans l'agarose ou gels de polyacrylamide. Différentes concentrations de L'agarose et le polyacrylamide peuvent former des gels avec différentes tailles de mailles de tamis moléculaires, qui peuvent être utilisés pour séparer des fragments d'acide nucléique de différents poids moléculaires.
2.2 Électrophorèse sur gel d'agarose
L'agarose est un polymère linéaire extrait des algues. L'agarose est chauffée dans une solution tampon et fondue en un sol clair et transparent, qui est ensuite versé dans un moule en gélatine et se solidifie pour former une matrice solide appelée gel, dont la densité dépend de la concentration d'agarose.
Agarose L'électrophorèse sur gel est une sorte de méthode d'électrophorèse utilisant l'agarose comme milieu de support, et la principale différence entre le analytique principe et autre support de l'électrophorèse est qu'elle a la double rôle de « tamis moléculaire » et « d'électrophorèse ». le gel est placé dans le champ électrique, sous l'action de la champ électrique, le chargé les acides nucléiques migrent vers le positif pôle à travers le maillage de le gel. Le taux de la migration est affectée par la taille de molécules d'acide nucléique, concentration d'agarose, tension appliquée, champ électrique, tampon d'électrophorèse et quantité de colorant intégré. Après un temps d'électrophorèse appropriémest sous conditions différentes, des fragments d'acide nucléique de différentes tailles et conformations seront dans différentes positions sur le gel, atteignant ainsi l'objectif de séparation.La séparation du gel d'agarose dispose d'une large gamme, couramment utilisée dans la récupération de gel de coupe d'ADN, l'isolement d'ADN et utilisée pour déterminer si l'ADN est recombinant, plasmide, etc. Que le plasmide soit coupé ou non, différentes concentrations de gel d'agarose peut être séparé de la longueur de 200 pb à 50 Ko de ADN fragments.
2.3 Méthodes expérimentales
Fabrication colle
Prenons comme exemple une concentration de 1 % : pesez 1 g d'agarose, versez-le dans une fiole conique de 250 ml, ajoutez 100 ml de tampon d'électrophorèse 0,5×TBE et bien mélanger, faire bouillir au four à micro-ondes puis laissez-le sécher à l'air libre jusqu'à environ 60 ℃, ajoutez une quantité appropriée de colorant d'acide nucléique et secouez-le bien, puis versez-le dans une plaque de gel propre qui a déjà été préparée, prenez un peigne à deux mains pour insérer dans la solution de gel verticalement et attendre gel à être refroidi naturellement jusqu'à ce qu'il soit complètement solidifié (25-30min).
Retirer le peigne à colle
Transférez soigneusement le gel dans la cuve d'électrophorèse (soit avec le bac à gel, soit simplement avec le gel).), placez le côté du puits d'échantillon dans le pôle négatif et ajoutez 0,5 × TBE tampon d'électrophorèse jusqu'à ce que le gel soit à environ 1 mm en dessous.
Ajouter échantillon
Ajouter 10× le tampon de chargement (chargement tampon) aux échantillons d'ADN, bien mélanger, puis ajouter lentement le mélange d'échantillons au subgel fusionné puits avec un pistolet à pipette, en ajoutant 5 à 10 μL d'échantillon par puits (pas plus de 40 μL). En général, le premier puits doit être rempli avec un marqueur ADN, le second avec un contrôle positif (ADN défini), et le troisième avec contrôle négatif (réactif ou eau), et l'ordre des échantillons doit être enregistré.
Électrophorèse
Couvrir le cuve d'électrophorèse, connectez le fils, allumez l'appareil et réglez la tension et le courant de l'électrophorèse et le temps paramètres. En général, le la tension ne doit pas dépasser 5 v/cm (la longueur fait référence à la distance entre les pôles positifs et négatifs de la cuve d'électrophorèse), et le temps d'électrophorèse est généralement 15-30min.
Fin de l'électrophorèse
Retirer le gel (sans bac à gel) et imagez-le sous le système d'imagerie UV pour obtenir une image électrophorétique claire, puis modifiez l'image électrophorétique avec le logiciel de retouche d'image et étiquetez-le avec les informations sur l'échantillon, la date et l'opérateur.
2.4 Questions fréquemment posées et solutions
| Inquiéter | Raison | Solution |
| Bande cible manquante | Le petit ADN s'épuise dans le gel | Raccourcissez le temps d'électrophorèse, réduisez la tension, augmentez la concentration du gel. |
| Les bandes d’ADN de poids moléculaire similaire ne sont pas facilement distinguées | Augmentez le temps d’électrophorèse pour atteindre la concentration optimale du gel. | |
| Le fragment cible est trop grand pour l’électrophorèse conventionnelle. | Analysé par électrophorèse sur gel pulsé. | |
| Clip sans but | Le processus PCR était défectueux et n’a pas amplifié le produit cible. | |
| Bandes d'ADN floues | Tampon d'électrophorèse périmé | Lorsque le tampon d'électrophorèse est utilisé plusieurs fois, la force ionique sera réduite, la valeur du pH augmentera lentement et la capacité de rinçage sera affaiblie, affectant ainsi l'effet de l'électrophorèse. Il est donc recommandé de changer fréquemment le tampon d'électrophorèse. |
| Dégradation de l'ADN | Éviter la contamination par les nucléases. | |
| Les conditions d'électrophorèse utilisées ne sont pas adaptées à l'électrophorèse | La tension d'électrophorèse ne doit pas dépasser 20 V/cm et la température doit être < 30 °C ; la température d'électrophorèse des énormes brins d'ADN doit être < 15 °C ; vérifier si le tampon d'électrophorèse utilisé a une capacité tampon suffisante. | |
| Échantillonnage excessif d'ADN | Réduisez la quantité d’ADN suréchantillonnée dans le gel. | |
| Les échantillons d’ADN sont trop salés | L'excès de sel a été éliminé par précipitation à l'éthanol avant l'électrophorèse. | |
| contamination des protéines | L'extraction du phénol avant l'électrophorèse élimine les protéines. | |
| Concentration de l'échantillon trop élevée | La concentration de l'échantillon supérieur doit être inférieure à 500 ng/puits, une concentration trop élevée affectera la vitesse d'électrophorèse, le fonctionnement, entraînant un glissement et un flou. | |
| Bandes faibles ou inexistantes | Taille insuffisante de l'échantillon d'ADN | Augmenter la quantité d'ADN absorbée |
| Dégradation de l'ADN | Éviter la contamination de l'ADN par les nucléases | |
| Source de lumière inappropriée pour les colorants d'acides nucléiques | Sélectionnez la source lumineuse de longueur d’onde appropriée conformément aux instructions du colorant d’acide nucléique. | |
| Bandes non séparées | manque de temps | Augmenter le temps d'électrophorèse |
| Concentration de gel incorrecte | La concentration de colle est trop élevée, ce qui entraîne une trop grande résistance à la séparation. | |
| La concentration d'ions sel dans l'échantillon est trop élevée | Une concentration élevée d'ions sel augmente la résistance électrophorétique et empêche la séparation des bandes, par exemple les échantillons digérés contenant un tampon d'endonucléase. | |
| Bandes non spécifiques | Contamination par l'ARN | Re-préparation des échantillons |
| Contamination entre les échantillons | Remplacement de la pointe lors du remplissage ; évite le déversement d'échantillons de volumes > 40 μl. |
2.5 Électrophorèse sur gel de polyacrylamide
Les gels de polyacrylamide sont formés par la réaction chimique entre le monomère d'acrylamide, les catalyseurs de polymérisation en chaîne N,N,N',N'-tétraméthyléthylènediamine (TEMED) et le persulfate d'ammonium, et l'agent de réticulation N,N'-méthylènebisacrylamide. Le monomère d'acrylamide polymérise en présence d'un catalyseur pour former des gels à longue chaîne chaînes, qui sont réticulé par un agent de réticulation pour former un gel dont la taille des pores est déterminée par la longueur de la chaîne et le degré de réticulation. La taille des pores est déterminée par la longueur de la chaîne et le degré de réticulation. La longueur de la chaîne dépend de la concentration d'acrylamide et le degré de réticulation du polymère peuvent être modifiés en ajustant le rapport entre l'acrylamide et l'agent de réticulation.
L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide peut être utilisée pour séparé échantillons basés sur différences dans charge, taille moléculaire et forme de les échantillons électrophorésésIl combine le tamisage moléculaire et l'électrostatique , et a un pouvoir de résolution plus élevé que l'électrophorèse sur gel d'agarose. Fragments d'ADN ne différant que par un nucléotide peut être séparé.
L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide est utilisée pour analyser et préparer des fragments d'ADN de moins de 1 kb de longueur. la taille de les fragments d'acide nucléique à isoler, gels de différent peut être préparé.
Les plages de séparation efficaces pour différentes concentrations d'acrylamide et d'ADN sont présentées dans le tableau ci-dessous :
| Conc. (%) | Plage de séparation effective (pb) |
| 3.5 | 100 à 2000 |
| 5 | 80 à 500 |
| 8 | 60 à 400 |
| 12 | 40 à 200 |
| 15 | 25 à 150 |
| 20 | 10 à 100 |
2.4 Lignes directrices pour la sélection de produits connexes
PCR conventionnelle | ||||
| Spécification | 10167ES | 10102ES | 10103ES | 10108ES |
| Longueur d'amplification | ≤10-15 Ko | ≤5 Ko | ≤5 Ko | ≤4 Ko |
| Délai de prolongation | 1 à 10 secondes/Ko | 30 sec/ko | 30 sec/ko | 30 sec/ko |
| Structure finale du produit | 3'-dA | 3'-dA | 3'-dA | 3'-dA |
| Température de recuit | 60℃ | Tm-(2~5)℃ | Tm-(2~5)℃ | Tm-(2~5)℃ |
| Plage de compatibilité GC | 30-70% | 40-70% | 40-70% | 30-70% |
| Activité exonucléase 5'-3' | Présent | Présent | Présent | Présent |
| PCR de colonie | Approprié | Approprié | Approprié | Approprié |
| Identification des gènes | Approprié | Approprié | Approprié | Approprié |
| PCR multiplexée | Ne convient pas | Ne convient pas | Ne convient pas | PCR 3-4 plexes |
| Indicateur d'électrophorèse | Rouge-violet | Bleu | Incolore | Bleu |
| Démarrage à chaud | Démarrage à chaud | Pas de démarrage à chaud | Pas de démarrage à chaud | Démarrage à chaud |
| Pré-mélange/Kit | Pré-mélange | Pré-mélange | Pré-mélange | Pré-mélange |
PCR directe | ||||
| Spécification | 10185ES | 10188ES | 10187ES | |
| Type de produit | Amplification directe de la souris | Amplification directe du sang | Amplification directe des plantes | |
| Longueur d'amplification | ≤1 Ko | ≤8 Ko | ≤1 Ko | |
| Délai de prolongation | 30 s/ko | 3-5 s/ko pour ≤2 ko, | 60 s/ko | |
| 10 s/kb pour ≤8 kb | ||||
| Temps de lyse de l'échantillon | 15 minutes | 0-3 min | 0-10 min | |
| Structure finale du produit | Extrémité émoussée | Extrémité émoussée | Extrémité émoussée | |
| Température de recuit | Tm-(2~5)°C | Tm-(1~2)°C | Tm-(2~5)°C | |
| Plage de compatibilité GC | 30-70% | 30-75% | 40-65% | |
| Activité exonucléase 5'-3' | √ | √ | √ | |
| Identification des gènes | √ | √ | √ | |
| PCR multiplexée | 3-4 plex | |||
| Amplification directe d'échantillons | √ | √ | √ | |
| Indicateur d'électrophorèse | Bleu | Incolore | Bleu | |
| Démarrage à chaud | √ | √ | √ | |
| Pré-mélange/Kit | Kit (avec mélange) | Kit (avec Mix + Tampon) | Kit (avec mélange) | |
| Organismes appropriés | Souris, rat | Humain, souris, chèvre, poulet, cochon, etc. | Riz, maïs, tabac, colza, blé, soja, etc. | |
| Tissu/matériau approprié | Queue, oreille, orteil (avec muscle) et autres organes | Sang frais avec EDTA, héparine, citrate, etc., sang réfrigéré (congelé), gouttes de sang séché du commerce | Jeunes feuilles, vieilles feuilles, jeunes pousses, jeunes tiges | |
| Exemple d'entrée | Tissu : 5-10 mg ; Queue : 1-5 mm | Sang total : 0,5%-20%, tache de sang séché : 1 mm² | Feuille : 1-10 mm, Graine : 1-3 mm | |
PCR haute fidélité | ||||
| Spécification | 10164ES | 10153ES | 10154ES | |
| Longueur d'amplification | ≤ 10 kb d'ADNg, ≤ 10 kb d'ADNc, ≤ 16 kb d'ADNλ | ≤ 10 kb d'ADNg, ≤ 10 kb d'ADNc, ≤ 13 kb d'ADNλ | ≤ 10 kb d'ADNg, ≤ 10 kb d'ADNc, ≤ 13 kb d'ADNλ | |
| Délai de prolongation | 5 sec/ko | 30 sec/ko | 30 sec/ko | |
| Fidélité (Taq) | 83× | 83× | 83× | |
| Structure finale du produit | Extrémité émoussée | Extrémité émoussée | Extrémité émoussée | |
| Température de recuit | 60°C | 68°C | 68°C | |
| Plage de compatibilité GC | 20-80% | 30-60% | 30-60% | |
| Activité exonucléase 5'-3' | Absent | Absent | Absent | |
| Indicateur d'électrophorèse | Bleu | Incolore | Bleu | |
| Enzyme unique/Pré-mélange | Pré-mélange | Enzyme unique | Pré-mélange | |
| Tolérance | / | / | Sang, lysat de tissu de souris | |
Électrophorèse des acides nucléiques | ||||
| Catégorie de produit | N° de chat. | Nom du produit | Application | |
| Agarose | 10208ES | Agarose | Électrophorèse des acides nucléiques de routine | |
| 10221ES | Agarose à tamisage élevé (qualité PCR) | Convient pour séparer des fragments d'ADN de 20 à 800 pb, comparable au gel de polyacrylamide | ||
| 10226ES | Comprimés d'agarose (0,5 g/comprimé) | Pratique pour les applications d'agarose de routine | ||
| Colorant d'acide nucléique | 10202ES | Coloration au gel d'acide nucléique YeaRed (10 000 × dans l'eau) | Soluble dans l'eau, avec des propriétés spectrales similaires à celles de l'EB, excitable à la lumière UV de 300 nm | |
| Marqueur ADN | 10510ES | Échelle d'ADN GoldBand 1 kb | 250-12000 pb (13 bandes) | |
| 10515ES | Échelle d'ADN GoldBand 50 bp | 50-1000 pb (14 bandes) | ||
| 10507ES | Échelle d'ADN GoldBand 100 bp | 100-1500 pb (12 bandes) | ||
| 10516ES | GoldBand 100 bp plus échelle d'ADN | 100-3000 pb (14 bandes) | ||
| 10517ES | Échelle d'ADN GoldBand 200 bp | 200-5000 pb (12 bandes) | ||
| 10518ES | Échelle d'ADN GoldBand 500 bp | 500-5000 pb (8 bandes) | ||
| 10501ES | Marqueur ADN GoldBand DL2000 | 100-2000 pb (6 bandes) | ||
| 10504ES | Marqueur ADN GoldBand DL5000 | 100-5000 pb (9 bandes) | ||
| 10505ES | Marqueur ADN GoldBand DL10 000 | 100-10000 pb (10 bandes) | ||
| 10511ES | Échelle d'ADN complète GoldBand | 100-12000 pb (20 bandes) | ||
| 10512ES | Marqueur ADN GoldBand DL15000 | 250-15000 pb (7 bandes) |
2.5 Publications utilisant des produits d'électrophorèse d'acides nucléiques (P(artiel)
[1] Luo J, Yang Q, Zhang X, et al. TFPI est un récepteur cryptique colique pour TcdB du clade 2 hypervirulent C. difficile. Cellule. 2022;185(6):980-994. e15. doi:10.1016/j.cell.2022.02.010 (IF:41.584)
[2] Huang N, Chen H, Gong H, et al. SeHed, un nouveau système d'expression génique avec du peroxyde d'hydrogène provoqué par le stress Propriété d'élimination des ides et effet anti-âge. Transduction du signal et thérapie ciblée. 2022, 7, 235. doi: 10.1038/s41392-022-01047-2. (SI : 38.1)
[3] Zhang C, Zhou B, Gu F, et al. L'inhibition du micropeptide PACMP provoque des effets létaux synthétiques en diminuant le CtIP et poly(ADP-ribosyl) ation. mol Cell. 2022;82(7):1297-1312.e8. doi:10.1016/j.molcel.2022.01.020 (SI:17.970)
[4] Zhu M, DaiX. La suppression de la croissance par des niveaux modifiés de (p)ppGpp résulte d'une allocation des ressources dans Escherichia coli. Nucleic Acids Res. 2019;47(9):4684-4693. doi:10.1093/nar/gkz211 (SI:11.147)
[5] Rizwan HM, Zhimin L, Harsonowati W, et al. Identification des agents pathogènes fongiques pour le contrôle post-récolte La décomposition du fruit de la passion (Passiflora edulis) et l'analyse comparative des voies multi-omiques révèlent Le violet est plus résistant nt aux agents pathogènes qu'un cultivar jaune. j Fungi (Basel). 2021;7(10):879. Publié le 19 octobre 2021. doi:10.3390/jof 7100879 (SI:5.816)
[6] LiT, Zhou B, Luo Z, et al. Caractérisation structurelle d'un Nanocorps neutralisant avec une large activité contre Variantes du SARS-CoV-2. Front Microbiol. 2022;13:875840. Publié le 2 juin 2022. doi:10.3389/fmicb.2022.875840 (SI:5.640)
[7] Wang T, Ren D, Guo H, et al. CgSCD1 est essentiel à la biosynthèse et à la pathogénicité de la mélanine de Colletotrichum gloeosporioides. pathogens. 2020;9(2) :141. publié le 20 février 2020. doi:10.3390/pathogens9020141(IF:3.018) :141. Publié le 20 février 2020. doi:10.3390/pathogènes9020141 (IF:3.018)
[8] Lv Y, LiX, Zhang H, Zou F, Shen B. Profils d'expression de CircRNA chez les bactéries sensibles et résistantes à la deltaméthrine
pipiens pallens (Diptères : Culicidae). Comp Biochimie Physiol B Biochem Mol Biol. 2022;261:110750. doi:10.1016 /j.cbpb.2022.110750 (IF:2.231)
[9] Hu M, DaiX. Suppression de la croissance par (p) ppGpp modifié les niveaux résultent d'une allocation non optimale des ressources Escherichia coli[J]. Recherche sur les acides nucléiques, 2019, 47(9) : 4684-4693.(IF11.6)
[10] Guo L, Yang W, Huang Q, et al. La spectrométrie de masse spécifique à la sélénocystéine révèle des sélénoprotéines distinctes selon les tissus et des sélénoprotéines candidates [J ]. Chimie cellulaire biologie, 2018, 25(11): 1380-1388. e4. (IF6.762)
2.6 Publications utilisant des produits PCR (partiel)
[1] Wang Y, Fu Z, LiX, et et. Cytoplasmique Détection d'ADN par KU complexe dans âgé T CD4+ cellule potentialise T cellule actif tion et lié au vieillissement auto-immune inflammation. Immunité. 2021;54(4):632-647.e9. est-ce que:10.1016/j.immu
ni.2021.02.003(IF:31.745)
[2] Yang X, Gao F, Zhang W, et et. "Étoile" miR-34a et CXCR4 antagoniste basé nanoplex pour binaireet coopérative traitement des migrations contret métastatique sein cancer. J Contrôle Libération. 2020;326:615-627. doi:10.1016/j. jconrel.2020.07.029(IF:7.727)
[3] Qiao Y, Du J, Gé R, et et. A Échantillon et Détection Micro-aiguille Correctif pour Psoriasis MicroARN Biomarqueur
Analyse dans Interstitiel Fluide. Anal Chimie. 2022;94(14):5538-5545. doi:10.1021/acs.analchem.1c04401(IF:6.986)
[4] Lin Q,Oui X, Huang Z, et et. Graphène À base d'oxyde Suppression de Non-spécificité dans Médiation par boucle Isother malamplification Activation du sensible Détection de la cyclooxygénase-2 ARNm dans Colorectal Cancer. Anal Chimie. 2019;91(24):15694-15702. doi:10.1021/acs.analchem.9b03861(IF:6.350)
[5] Lin Q, Huang Z,Oui X, et et. Laboratoire dans un tube: Isolement, extraction, et estautre amplification détection de exosomal long non-codage ARN de l'estomac cancer. Talante. 2021;225:122090.
doi:10.1016/j.tta.2021.122090(IF:6.057)
[6] Liu C, Zou G, et et. 5-Formyluracile comme un Multifonctionnel Bâtiment Bloc dans Biocapteur Dessins[J]. Angew Chimie Int Éd Anglais : Angl. 26 juill. 2018;57(31):9689-9693.（IF 11.992）
[7] Wang M, Zhang S, Zheng G, et et. Gain de fonction Mutationion de Card14 Conduit à Spontané De type psoriasis Peau Inflammation par Amélioré Kératinocyte Réponse à IL-17A. Immunité. 2018;49(1):66-79.e5.
est ce que je:10.1016/j.immuni.2018.05.012(IF:19.734)
[8] Zhang Y, Ding H, Wang X, et et. MK2 favorise Tfcp2l1 dégradation via β-TrCP ubiquitine ligase à réglementer souris tige embryonnaire auto-renouvellement cellulaire. Cellule Rapport 2021;37(5):109949. doi:10.1016/j.celrep.2021.109949 (SI:9.423)
[9] Lin Q, Ye X, Yang B, et et. En temps réel fluorescence à médiation par boucle isotherme amplifiqueation essai pour rapide et sensible détection de Streptocoque gallolyticus sous-sp. gallolyteIcus associé à colorectal cancer[J].
Analytique et bioanalytique chimie, 2019, 411(26) : 6877-6887. (IF6.35)
[10] Lin Q,Oui X, Huang Z, et et. Graphène À base d'oxyde Suppression de Non-spécificité dans Médiation par boucle Isother malamplification Activation de la sensibilité Détection de la cyclooxygénase-2 ARNm dans Couleurctal Cancer[J]. Analyti cal chimie, 2019.（IF6.35）
Citation:
[1] Loeb LA, Jr R. ADN polymérases et maladies humaines[J]. Nature Reviews Genetics.